许龙岩
- 作品数：57 被引量：215H指数：10
- 供职机构：广东检验检疫技术中心更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东出入境检验检疫局科技计划项目辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生轻工技术与工程生物学经济管理更多>>
- 实时荧光定量PCR技术在食品致病菌等领域中的快速检测应用
- 焦红何蕴韶翁文川王方金徐海聂高东微朱道中林志雄许龙岩钟国强程钢邓中平黄捷王伟毅谢钧宪陈胤瑜
- 该项目针对进口试剂盒的昂贵及国内基因检测试剂市场几乎空白的特点，在具有我国自主知识产权的合成平台上，使用国产原材料，将国际先进的实时荧光定量PCR技术引入国内食品致病菌、动物禽流感、植物松材线虫、人类乙型肝炎病毒的检测领...
- 关键词：
- 关键词：荧光定量PCR食品致病菌
- 食品中伤寒沙门氏菌TaqMan探针实时PCR检测方法被引量：6
- 2014年
- 建立实时荧光PCR快速鉴定伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhi)的方法。根据GenBank公布的伤寒沙门氏菌基因序列,设计引物和Taqman探针,采用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果表明,特异性引物和探针可从31株伤寒沙门氏菌菌株、27株其他血清型沙门氏菌和7株非沙门氏菌菌株中鉴定出全部的31株伤寒沙门氏菌。以伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR扩增,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数为0.994,扩增效率为94.5%,最低检测浓度为4cfu/mL的添加浓度。实时荧光PCR检测与传统方法相比较,两者结果一致。该方法特异性好、灵敏度高,可以快速鉴定伤寒沙门氏菌。
- 曹冬梅袁慕云史媛媛刘洋许龙岩曹际娟
- 关键词：实时荧光PCR伤寒沙门氏菌
- 副溶血性弧菌MPCR-DHPLC检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 目的:建立多重PCR(Multiplex PCR,MPCR)结合变性高效液相色谱(Denaturing High-Performance Liquid Chromatography,DHPLC)检测副溶血性弧菌的方法,并了解该菌携带毒力基因的情况。方法:根据副溶血性弧菌的毒力基因tdh、trh和种特异性基因toxR进行引物设计,以其单一PCR扩增产物在DHPLC出现的色谱峰作为标准色谱峰,建立MPCR-DHPLC的检测方法。结果:该方法能有效扩增副溶血性弧菌的tdh、trh和toxR基因,25株副溶血性弧菌的MPCR扩增产物经DHPLC分析所得的色谱峰在位置和峰型与标准色谱峰有很好的符合性,其他菌属的菌株均无特异性扩增,对模拟污染样品可正确检测,灵敏度达到1*103CFU/ml,特异性达到100%。结论:本文建立的MPCR-DHPLC方法可准确检测副溶血性弧菌,并了解该菌携带毒力基因的情况。
- 凌莉许龙岩袁慕云胡科锋陈碧玲焦红
- 关键词：副溶血性弧菌DHPLC
- 基于TaqMan探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌被引量：11
- 2017年
- 目的建立基于Taq Man探针四重荧光PCR检测甲型、乙型、丙型副伤寒和伤寒沙门菌的方法。方法根据甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)、乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi B,SPB)、丙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi C,SPC)和伤寒沙门菌(Salmonella typhi,ST)的特异序列分别设计引物SPAP、SPBP、SPCP和STP,在探针的5'端分别标记TET、ROX、FAM、HEX,建立基于Taq Man探针四重荧光PCR检测方法。结果 SPAP、SPBP、SPCP和STP分别扩增出5株SPA、4株SPB、7株SPC和11株ST,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。SPAP、SPBP、SPCP和STP扩增效率分别为84.5%、101.8%、92.4%和90.9%,线性相关系数(R^2)分别为0.996、0.975、0.996和0.984。结论建立的方法特异性高、敏感性强,可用于SPA、SPB、SPC和ST的特异性检测。
- 许龙岩袁慕云孙薇柯碧霞洪烨
- 关键词：甲型副伤寒沙门菌丙型副伤寒沙门菌伤寒沙门菌
- 冰鲜家禽中弯曲菌检验的探讨被引量：1
- 2000年
- 近年来发现弯曲菌与诸多疾病有关 ,因此 ,对食品中弯曲菌的检验越来越受到许多国家和部门的重视。在各类食品中 ,我们认为冰鲜家禽受弯曲菌污染的可能性较高 ,并从冰鲜家禽的皮肤、口腔、腹腔等部位分离出了结肠弯曲菌、海鸥弯曲菌和空肠弯曲菌。采用自动酶联免疫分析仪(Vidas)和Api快速筛选和鉴定 ,着重分析讨论了检测过程中遇到的多种问题。
- 许龙岩
- 关键词：弯曲菌食品
- 进出口食品中单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型研究被引量：2
- 2010年
- 目的研究进出口食品中分离的单核细胞增生李斯特菌(LMO)之间分子分型特征和遗传相关性。方法参照美国PulseNet推荐的LMO脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准方法,用限制性内切酶AscⅠ酶切LMO染色体DNA进行PFGE试验。用BioNumerics软件对不同地区分离的LMO进行比对,分析菌株之间的相似度。结果 24株LMO分成20种PFGE型,菌株之间的相似度在44.45%～100%。来源于加拿大的LMO16、美国的LMO18、丹麦的LMO13,丹麦的LMO7和顺德的LMO22,广州的LMO21和山西的LMO8,分别有相同的PFGE型,相似度达到100%。结论进出口食品中分离的LMO在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有一定程度的相关性。
- 许龙岩袁慕云刘静宇赵贵明皱志飞凌莉张旺焦红
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分子分型食品安全
- PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物、试剂盒和检测方法
- 本发明公开了一种PCR-焦磷酸法检测单增李斯特菌的检测引物、试剂盒和检测方法。本发明根据单增李斯特菌hly基因设计扩增引物和测序引物，建立了PCR-焦磷酸测序，从DNA碱基序列水平上检测单增李斯特菌的方法。本发明先对目标...
- 许龙岩袁慕云凌莉阳静唐勤陈碧玲易敏英
- 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法
- 本发明公开了一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三重实时荧光PCR检测引物、探针、检测试剂盒和检测方法。本发明根据nuc、mecA和femA基因序列分别设计引物和探针，利用该检测引物和检测探针按照本发明的方法对样品进行三重实时荧...
- 袁慕云许龙岩张旺王志强阳静陈碧玲
- 文献传递
- PCR-焦磷酸测序检测副溶血性弧菌研究被引量：1
- 2013年
- 目的建立副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)的PCR-焦磷酸测序方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因设计扩增引物和测序引物,先用PCR特异性地扩增目的片段,再制备单链模版,最后用焦磷酸测序法检测DNA碱基序列,检测的序列为CCAAGGATTCACAGCAGAAGCCACAGGTGCTTTT,则判断为副溶血性弧菌。结果扩增引物和测序引物表现出良好的特异性。PCR扩增结果:20株VP均扩增出大小为137bp的DNA片段,而创伤弧菌等对照菌株未扩增出DNA条带。焦磷酸测序结果:20株副溶血性弧菌均测出与预期相符的DNA碱基序列,而其他对照菌株未测出DNA碱基序列或检测结果与测序引物后的序列不匹配。VP标准菌株ATCC17802发生A-T突变,密码子CCU变成CCA,而两个密码子都是脯氨酸的密码子。结论该方法特异性高,是快速检测VP有效手段。
- 许龙岩袁慕云唐勤阳静邹志飞相大鹏
- 关键词：副溶血性弧菌聚合酶链式反应焦磷酸测序碱基序列
- 基于TaqMan探针三重荧光PCR检测沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌被引量：10
- 2015年
- 目的建立基于TaqMan探针三重荧光PCR检测沙门菌(salmonella,Sa)、肠炎沙门菌(salmonella enteritidis,SE)和鼠伤寒沙门菌(salmonella typhimurium,ST)的方法。方法根据沙门菌aceA基因、肠炎沙门菌特异序列(GenBank:AF370707.1)、鼠伤寒沙门菌的STM4599序列(GenBank:AERV01000023.1),分别设计引物和TaqMan探针,在探针的5′端分别标记FAM、VIC、cy5,建立基于TaqMan探针三重实时荧光PCR检测沙门菌的方法。结果 29种不同血清型沙门菌均扩增出aceA基因,肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的引物和探针分别特异性地扩增出15株肠炎沙门菌和11株鼠伤寒沙门菌,而其他血清型沙门菌和17株非沙门菌扩增结果阴性。aceA、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌的三重荧光PCR扩增效率分别为89%、87%、90%,最低检测浓度分别达到280cfu/ml、260cfu/ml、300cfu/ml。结论本研究建立的方法特异性好、灵敏度高,可用于食品中沙门菌、肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌的特异性检测。
- 袁慕云刘二龙谢力柯碧霞曹际娟许龙岩
- 关键词：TAQMAN探针沙门菌肠炎沙门菌鼠伤寒沙门菌
