蒋洪彦
- 作品数：13 被引量：40H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 血清比较蛋白质组学在SARS及并发症中的应用被引量：1
- 2008年
- 蛋白质组学技术是研究疾病相关蛋白质的重要手段。血清以其在临床疾病研究中的独特性、重要性成为研究者最为感兴趣的研究材料之一,寻找疾病血清中特异蛋白质的比较蛋白质组学,以此发现血清中的特异标志物是蛋白质组学研究的新思路。本文就血清比较蛋白质组学技术在SARS及并发症中的应用作一综述。
- 蒋洪彦李雪华翁亚光王世鑫
- 关键词：蛋白质组学血清SARS生物标志物
- 自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷基因的表达及意义被引量：1
- 2008年
- 目的 探讨自然流产胚胎组织中人类纺锤体有丝分裂俘获缺陷（hsMAD）2基因的表达，以及hsMAD2基因表达降低与染色体数目异常的相关性。方法 采集2006年3月至2007年3月重庆医科大学附属第一、第二医院妇产科自然流产患者的胚胎组织标本33份，其中流产1次者23份，流产2次及以上者10份；同时采集人工流产患者的胚胎组织标本35份。采用FQ-PCR和蛋白印迹法检测自然流产和人工流产胚胎组织中hsMAD2基因的mRNA和蛋白表达水平；原代培养人工流产胚胎组织并经染色体分析筛选出5例具有正常核型的胚胎细胞，构建hsMAD2基因的短发夹RNA（shRNA）表达载体，转染筛选出来的胚胎细胞以抑制其内源性hsMAD2基因的表达，将细胞分为实验1组（转染重组干扰质粒pshRNA-hsMAD2-1）、实验2组（转染pshRNA-hsMAD2-2）、实验3组（转染pshRNA-hsMAD2-3）、对照1组（未做任何处理）、对照2组（转染pTZU6＋1干扰质粒空载体）、无关对照组（转染pshRNA-N1）。用蛋白印迹法和定量PCR技术评价shRNA的干扰效果，四甲基偶氮唑蓝比色法测定胚胎细胞增殖抑制率，流式细胞技术检测胚胎细胞周期的分布，并计算染色体数目的变化。结果 （1）自然流产1次者、自然流产2次及以上者、人工流产者的胚胎组织中hsMAD2基因mRNA的表达量分别为0．00879±0．00035、0．00901±0．00033、0．00941±0．00026，3者分别比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）；hsMAD2蛋白的表达量分别为0．2791±0．0311、0．0431±0．0020、0．5790±0．0331，3者分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（2）shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达，转染有效干扰质粒后，实验1组胚胎细胞的增殖抑制率为54％，分别与对照1组（4％）、对照2组（3％）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；G2／M期细胞比例实验1组�
- 蔡燕王箭袁泰先施琼翁亚光王应雄蒋洪彦刘子杰
- 关键词：胚胎钙结合蛋白质类细胞周期蛋白质类小分子干扰
- 染色体数目异常自然流产胚胎hsMAD2基因研究
- 分别用定量 PCR 和 Western blot 在 mRNA 和蛋白水平检测染色体数目异常(实验组)和正常(对照组)的自然流产胚胎组织中目的基因的表达：构建针对 hsMAD2基因的 shRNA 表达载体,抑制胚胎细胞内...
- 施琼王箭袁泰先翁亚光王应雄蔡燕蒋洪彦刘子杰
- 文献传递
- 原代绒毛滋养层细胞的培养及转染研究被引量：11
- 2007年
- 目的探索绒毛组织滋养层细胞原代培养、纯化的有效方法及最佳转染方法。方法分离妊娠7周内的人工流产胚胎的绒毛组织进行滋养层细胞的培养和纯化。用细胞免疫化学方法对培养细胞进行鉴定;用MTT实验方法绘制滋养层细胞的生长曲线;用细胞贴壁率找到最适pH;用细胞存活分数评价转染的最佳脂质体用量。结果成功寻找到滋养层细胞原代培养和纯化的有效方法;细胞消化传代后的12～48h滋养层细胞处于对数生长期,pH6.8～7.0为培养液最适pH范围;并找到质粒转染滋养层细胞的最佳脂质体用量。结论成功培养和纯化滋养层细胞,并找到滋养层细胞的最佳转染方法。
- 施琼朱旦王箭翁亚光王应雄蔡燕蒋洪彦徐远久
- 关键词：细胞培养滋养层细胞细胞转染
- 染矽尘大鼠早期肺组织蛋白质双向电泳图谱差异分析被引量：11
- 2009年
- 目的应用比较蛋白质组学方法分析染矽尘大鼠早期肺组织蛋白质表达的变化，寻找矽肺发病早期差异表达蛋白，以探讨矽肺发生发展的相关机制。方法采用随机数字表法将Wistar大鼠分为对照组和染矽尘组（每组4只）。气管暴露法建立染矽尘大鼠模型，14d时处死大鼠取肺组织，提取总蛋白，双向凝胶电泳（two—dimensional gel electrophoresis，2-DE）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption／ionization time—of-flight mass spectrometry．MALDI-TOF-MS）分析鉴定差异蛋白。免疫印迹法（Western blotting）检测差异蛋白在肺组织中的表达。结果初步筛选出存在明显差异的11个蛋白点，经质谱鉴定得到6种蛋白质。与对照组相比，染矽尘组组织蛋白酶D前体、硫氧还蛋白过氧化物酶-1（peroxiredoxin-1，Prx-1）、热休克71000同源蛋白（heat shock cognate71000 protein，HSP7C）、不均一核糖核酸核蛋白A3（hnRNPA3）、表皮脂肪酸结合蛋白（E—FABP）表达上调，两组中吸光度值（A值）分别为116．50±12．56、148．75±22．40；40．00±1．63、66．00±13．93；51．25±7．37、92．75±8．69；83．00±6．48、122．75±24．62；50．75±6．50、93．50±23．10；100．25±19．99、142．50±21．21；差异有统计学意义（t值分别为-2．51、-3．71、-7．28、-3．12、-3．56、-2．90，P值均〈0．05）。而SEC14类蛋白3表达下调，两组A值为153．00±11．28、109．75±18．32，差异有统计学意义（t=4．02，P〈0．01）。Western blotting结果显示差异表达蛋白Prx-1在染矽尘组与对照组中A值分别为0．61±0．05、0．35±0．05，染矽尘组中表达上调（t=-7．24，P〈0．01），与双向电泳结果一致。结论应用2-DE建立了染矽尘大鼠早期肺组织双向电泳图谱，分离并初步鉴定了6种与矽肺相关的差异表达的蛋白质，为研究矽肺发生发展相关机制提�
- 陈娟娟蒋洪彦刘萍刘伟魏茂提王世鑫翁亚光
- 关键词：矽肺电泳凝胶
- 结肠癌中有丝分裂关卡基因hsMAD2表达的分析
- 2007年
- 目的:研究结肠癌组织中有丝分裂关卡基因HsMAD2的表达。方法:采用定量real-timeRT-PCR方法检测18例结肠癌及正常结肠组织中hsMAD2基因表达水平。结果:以hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值为hs-MAD2基因mRNA水平的相对定量值。结肠癌和正常组织中的hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值分别为0.1235±0.0752和0.0312±0.0598。hsMAD2基因的表达水平在结肠癌中显著高于正常结肠组织。结论:hsMAD2基因在结肠癌组织中的高表达,可能与癌细胞的异常增殖有关,是结肠癌发生发展的原因,可为临床结肠癌的治疗提供有效的靶点。
- 施琼翁亚光蒋洪彦徐远久刘子杰刘青松蔡燕
- 关键词：定量RT-PCR结肠癌
- RNA干扰MAD2基因对细胞增殖的影响被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨MAD2对HepG2细胞周期的影响。方法:构建针对MAD2基因的shRNA表达载体,MAD2基因与GFP融合的绿色荧光蛋白真核表达质粒pmad2-EGFP共转染HepG2细胞株,用Western印迹法检测shRNA的抑制效应;用MTT法测定细胞增殖率;用流式细胞仪检测细胞周期。结果:shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制MAD2绿色荧光融合蛋白的表达。HepG2细胞转染有效干扰质粒48h后,细胞增殖抑制率达65%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论:在细胞水平,可通过RNA干扰特异性抑制MAD2基因来抑制细胞的增殖,为研究MAD2基因在细胞增殖中的作用机制奠定基础。
- 施琼王箭舒朝忠翁亚光王应雄徐远久蒋洪彦刘子杰刘青松蔡燕
- 关键词：MAD2基因RNA干扰细胞增殖
- 微小RNA抑制胚胎细胞MAD2基因的表达
- 2007年
- 目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理。方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平。结果:对照组的MAD2基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1780±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1778±0.0689和0.1778±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性MAD2基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而其中一实验组的蛋白水平在转染后有明显降低。结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础。
- 施琼翁亚光徐远久蔡燕蒋洪彦
- 关键词：微小RNAMAD2基因定量RT-PCR
- 染色体数目异常自然流产胚胎有丝分裂关卡蛋白基因的研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨染色体数目异常自然流产胚胎中有丝分裂关卡蛋白(hsMAD2)基因的功能。方法分别用定量PCR和Western blotting在mRNA和蛋白水平检测染色体数目异常(实验组)和正常(对照组)的自然流产胚胎组织中目的基因的表达;构建针对hsMAD2基因的shRNA表达载体,抑制胚胎细胞内源性hsMAD2基因的表达,用Western blotting和定量PCR方法评价shRNA的干扰效果;用MTT法测定细胞增殖率;流式细胞术检测细胞周期。结果hsMAD2蛋白在实验组中的表达显著低于对照组。shRNA的重组质粒表达载体能明显抑制胚胎细胞中hsMAD2基因的表达。胚胎细胞转染有效干扰质粒48 h后,细胞增殖抑制率达58%。有效干扰质粒引起G0/G1期和S期细胞的明显降低,G2/M期细胞增多。结论hsMAD2基因表达下调可能在染色体数目异常的自然流产胚胎发生中起着很重要的作用,为寻找可靠的临床检测指标奠定了基础。
- 施琼王箭袁泰先翁亚光王应雄徐远久蔡燕蒋洪彦
- 关键词：RNA干扰细胞增殖染色体数目异常免疫印迹法
- SARS康复人员血清相关蛋白研究
- 急性呼吸系统综合症是一种感染SARS相关冠状病毒引发的新发传染病。目前,人们对其发病机制的认识并不完全清楚,其康复人员并发症/(股骨头缺血性坏死、肺纤维化/)是该病恢复期一个较为常见而严重的问题。SARS康复人员并发股骨...
- 蒋洪彦
- 关键词：SARS血清股骨头缺血性坏死肺纤维化
- 文献传递
