温凯
- 作品数：6 被引量：29H指数：4
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- 牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接ELISA方法的建立被引量：12
- 2011年
- 为建立一种有效的牛病毒性腹泻病病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体检测方法,作者将BVDVNS3蛋白2个抗原表位的编码核酸序列进行串联,构建重组表达载体pET-30a-EXnN,并在原核表达系统中表达了重组蛋白。选取包含12个表位肽的重组蛋白(r-BVDV-EX6N)作为包被抗原建立NS3蛋白抗体间接ELISA方法。该方法的特异性和稳定性良好,与2种商品化试剂盒的符合率分别为96.05%和78.95%。试验结果表明建立的ELISA方法可用于BVDV NS3蛋白抗体的检测。
- 贾莹李岩尹鑫温凯刘华张文龙王君伟
- 关键词：BVDVNS3蛋白间接ELISA
- 牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株E2蛋白线性表位区的筛选
- 为了筛选牛病毒性腹泻病毒E2 B细胞线性表位区域,本研究分段克隆了BVDVVEDEVAC株E2基因,并利用pET原核表达系统,分段表达目的蛋白,表达的蛋白经过纯化后,利用western blot方法筛选与感染血清反应的片...
- 李岩贾莹温凯刘华王君伟
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗原性
- 牛病毒性腹泻病毒基因Ⅱ型HLJ-10分离株全基因组克隆及其序列特征分析被引量：4
- 2012年
- 为研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的分子特征,本研究参考GenBank中登录的BVDV基因Ⅱ型病毒株全基因组序列,设计多对引物,通过RT-PCR方法,对一株分离自某商品化血清中的BVDV分离株HLJ-10全基因组进行分段克隆及序列测定,获得了该分离株的全基因组序列。生物信息学分析表明,该分离株为BVDV基因Ⅱ型,全长12 284 nt,编码区为11 694 nt,共编码3 897个氨基酸,5'和3'非编码区分别为385 nt和205 nt。与其它BVDV参考株序列比对分析表明,HLJ-10与SH-28和KZ91CP进化关系较密切,预测该分离株含有22个潜在糖基化位点,氨基酸差异性分析表明E2蛋白的氨基酸序列在瘟病毒属中变异性较大。
- 刘华付培芬李岩温凯贾莹刘晓玫张海丽商云鹏高明春马波张文龙王君伟
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒基因组
- 牛病毒性腹泻病毒套式RT-PCR分型检测方法的建立及初步应用的研究
- 牛病毒性腹泻/黏膜病(BVD/MD),简称牛病毒性腹泻(BVD),是由牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染牛引起的以发热、黏膜糜烂溃疡、白细胞减少、腹泻、持续性感染与免疫耐受及怀孕母牛流产、产死胎和畸形胎等为主要特征的一种传...
- 温凯
- 关键词：牛病毒性腹泻RT-PCR检测病毒感染
- 牛病毒性腹泻病毒NS3基因的序列分析、表达与抗原性鉴定被引量：8
- 2010年
- 本研究应用套式RT-PCR方法扩增出牛病毒性腹泻病毒VEDEVAC株编码NS3蛋白的基因,克隆至表达载体pET-30a(+),并进行测序。对瘟病毒属病毒NS3基因进行氨基酸差异性分析,显示平均P-distance为0.07,系统进化树分析表明VEDEVAC株隶属于BVDV1型。将构建成功的重组质粒转化大肠埃希氏菌Rosetta(DE3),在IPTG诱导下表达NS3重组蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化和尿素梯度透析后进行反应原性鉴定。Western blotting结果显示表达的重组蛋白可以与牛病毒性腹泻病毒阳性血清反应,并与猪瘟阳性血清有交叉反应,ELISA结果显示该重组蛋白具有良好的反应原性。所获得的蛋白为建立针对NS3抗体的ELISA检测方法奠定了基础。
- 李岩聂明非魏伟温凯贾莹霍慧王君伟
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒NS3蛋白进化树抗原性
- 牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2010年
- 为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的特异性单克隆抗体(MAb),用含有BVDV E2基因的真核表达质粒pcDNA-E2免疫4周龄～6周龄BALB/c鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,以BVDV作为抗原建立间接ELISA筛选及4次连续克隆获得3株能稳定分泌抗E2MAb的杂交瘤细胞系,分别命名为2E2、3D12、4D6。MAb亚类鉴定表明,2E2和4D6为IgM类,3D12为IgG2a亚类,轻链均为κ链。经western blot和间接免疫荧光检测证明3株MAb针对E2的构象表位,并且3D12株MAb能与BVDV及猪瘟病毒(CSFV)结合,2E2和4D6MAb只能与BVDV结合。
- 聂明非李岩温凯贾莹王君伟
- 关键词：BVDVE2单克隆抗体CSFV
