杨套伟
- 作品数：90 被引量：190H指数：6
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 钝齿棒杆菌胞内辅酶NADPH水平对PHB积累和L-精氨酸合成的影响
- L-精氨酸作为一种人体半必需氨基酸,因其生理和药理功效而广泛应用于食品、药品和保健品等行业；聚羟基脂肪酸酯(PHAs)是微生物在碳源、氮源比例过高等条件下,在细胞内形成的作为细胞自身碳源和能源储备物的一类聚酯,其中聚-β...
- 徐美娟秦敬儒张显杨套伟饶志明
- 关键词：L-精氨酸钝齿棒杆菌
- 文献传递
- 一株联产L-精氨酸和聚羟基丁酸酯的重组钝齿棒杆菌的构建被引量：2
- 2016年
- Corynebacterium crenatum SYPA 5-5是一株用于L-精氨酸(Arg)生产的工业菌株。聚羟基丁酸酯(PHB)是在细菌内部形成的聚合物,将PHB代谢途径引入细胞内可影响胞内的全局代谢网络,实现联产PHB和相关化工产品如琥珀酸、L-谷氨酸和L-色氨酸等。采用基因工程技术,将来源于Ralstonia eutropha H16的PHB合成基因簇phb CAB导入到L-精氨酸生产菌株C.crenatum SYPA 5-5中,进行组成型表达,旨在获胞内产PHB、胞外产L-精氨酸的效果,对出发菌和重组菌分别进行5 L容积发酵罐实验,并对发酵相关参数进行测定分析。结果表明,由于PHB合成基因簇的导入,重组菌中PHB质量为细胞干质量的12.8%,实现了胞外产L-精氨酸、胞内产PHB的效果,并发现胞内PHB的积累对菌体生产L-精氨酸有一定的正向作用,发酵96 h,L-精氨酸的产量达到43.21 g/L,相比于出发菌提高了20%。
- 秦敬儒徐美娟张显杨套伟许正宏饶志明
- 关键词：L-精氨酸聚羟基丁酸酯钝齿棒杆菌联产发酵
- 过量表达枯草芽孢杆菌乙偶姻还原酶提高2,3-丁二醇产量被引量：4
- 2016年
- 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 168是一株安全生产的菌株,但是在2,3-丁二醇(2,3-BD)的发酵过程中,会积累较多的副产物乙偶姻(AC)。乙偶姻还原酶是催化AC合成2,3-BD的关键酶。为了提高2,3-BD合成效率,首先将乙偶姻还原酶基因acr克隆到B.subtilis 168,构建了重组菌B.subtilis 168/p MA5-acr。对重组菌进行摇瓶发酵实验,结果表明,相比出发菌,重组菌的2,3-BD产量和转化率分别提高28.62%和22.87%,主要副产物AC积累量下降了20.01%。同时,分支路径的副产物甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸,也有不同程度的降低。
- 李秀鹏杨套伟徐美娟张显饶志明
- 关键词：2,3-丁二醇乙偶姻枯草芽孢杆菌
- 酶法高效转化苯乙酮酸合成L-苯甘氨酸被引量：2
- 2019年
- L-苯甘氨酸是合成多种抗生素和抗癌药物的重要中间体,目前主要通过化学法合成.利用蜡样芽孢杆菌来源的亮氨酸脱氢酶(LeuDH)催化苯乙酮酸的还原氨基化合成L-苯甘氨酸,并偶联甲酸脱氢酶(FDH)进行辅酶再生,建立了一种新型的苯甘氨酸生物合成方法.结果表明,该辅酶再生体系可有效地用于L-苯甘氨酸的合成,且没有副产物残留,辅底物甲酸铵还可提供还原氨基化所需NH4+,随后对酶转化条件进行优化,最适转化条件为苯乙酮酸60 g/L,甲酸铵50.4 g/L,LeuDH 4 U/mL,FDH 2 U/mL,NAD+浓度0.14 g/L,p H 8.0以及30℃.在最优条件下,1 L的转化体系中,转化反应5 h,苯乙酮酸转化率达到99%,L-苯甘氨酸产量60.2 g/L,ee值>99%.本研究为L-苯甘氨酸的工业生产提供了一种更加简单、高效、经济的生物合成途径.(图8表4参27)
- 刘巧利杨套伟周俊平徐美娟张显饶志明
- 关键词：甲酸脱氢酶
- 基于代谢工程改造和发酵调控策略强化微生物利用粗甘油合成2,3-丁二醇的能力
- 生物柴油是一种可再生燃料,具有完全取代化石燃料的潜力,然而,生物柴油生产过程中有10%的副产物粗甘油生成,如何处理这些副产物粗甘油,对于生物柴油产业发展来说是一个必须关注的问题。将甘油转化为附加值更高的产品（如1,3-丙...
- 杨套伟张显徐美娟饶志明
- 关键词：2,3-丁二醇合成工艺粗甘油
- 文献传递
- 偶联羟化反应和辅酶再生体系产9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮被引量：4
- 2019年
- 9α-羟基雄甾-4-烯-3,17-二酮(9-OH-AD)是一种重要的甾体药物中间体,可以用来制备β-甾酮,地塞米松和其他类固醇化合物。3-甾酮9α-羟基化酶(KSH)是由两个亚基即末端氧化亚基(KshA)和铁氧还蛋白还原亚基(KshB)构成的。在本研究中,人工合成了来源于分枝杆菌Mycobacterium sp.Strain VKM Ac-1817D的kshA和kshB基因,通过优化表达载体促进了KshA和KshB在E.coli BL21(DE3)中的可溶性表达,并探究了催化体系中KSH还原亚基和氧化亚基的最适添加比例。此外,KSH转化雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)为9-OH-AD的过程中需要辅酶NADH。本研究构建了羟基化反应与利用葡萄糖脱氢酶(GDH)的NADH辅酶再生反应的偶联体系。为了进一步提高转化效率,本研究进行了转化条件的优化,并采取了分批补料的策略,最终9-OH-AD产量为4.78 g/L,转化率为96.7%。此种酶介导的转化生产9-OH-AD的方法为甾体药物生产提供了一种环境友好和经济实用型的新策略。
- 沙宗焱张显邵明龙杨套伟徐美娟饶志明
- 关键词：羟化反应辅酶再生葡萄糖脱氢酶
- 理性代谢工程改造促进谷氨酸棒杆菌高效合成L-谷氨酸被引量：1
- 2023年
- L-谷氨酸是世界上第一大宗氨基酸产品,广泛应用于食品医药及化工等行业。以谷氨酸高产菌谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)G01为出发菌株,首先通过敲除主要副产物丙氨酸合成相关基因-丙氨酸氨基转移酶编码基因(alaT),降低了发酵副产物丙氨酸含量。其次,α-酮戊二酸节点碳流量对谷氨酸合成起重要作用,因此,采用核糖体结合位点(ribosome-binding site,RBS)序列优化降低了α-酮戊二酸脱氢酶的活性,强化了谷氨酸合成代谢流。同时通过筛选不同来源的谷氨酸脱氢酶,加强了α-酮戊二酸内源转化为谷氨酸的能力。接着,对谷氨酸转运蛋白进行理性设计,提高了谷氨酸的外排能力。最后,对基于以上策略构建的整合菌株进行了5L发酵罐发酵优化,通过梯度升温结合分批补料策略,谷氨酸产量为(136.33±4.68)g/L,较原始菌的产量(96.53±2.32)g/L提高了41.2%;糖酸转化率为55.8%,较原始菌的44.2%提高了11.6%;且降低了副产物丙氨酸的含量。以上策略一定程度上提高了谷氨酸的产量与糖酸转化率,可为谷氨酸生产菌株的代谢改造提供参考。
- 刘佳峰乔郅钠赵有玺徐美娟张显杨套伟饶志明
- 关键词：谷氨酸棒杆菌谷氨酸转录分析
- 新金色分枝杆菌CRISPR基因编辑技术的构建及其初步应用
- 2021年
- 新金色分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12是一株用于转化植物甾醇合成甾体激素类药物中间体的重要菌株,传统的基因编辑方法效率低、周期长、操作复杂并且需带入抗性标签。近期CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9系统在许多非模式菌株中成功应用为本研究提供了参考。作者结合非同源黏性末端连接(NHEJ)构建了应用于新金色分枝杆菌基因组编辑CRISPR-Cas系统,对Mycobacterium neoaurum JC-12基因组上催化雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)的3-甾酮-脱氢酶(KSDD)分别设计了敲除和转录激活的靶向sgRNA。结果显示成功敲除了ksdd基因并且突变菌株KSDD的酶活下降了80%,突变株发酵96 h的AD产量比原始菌株提高了30%,并且突变株未代谢产生ADD。转录调控结果显示,靶向-29位点相比于无靶向对照ksdd的转录水平下降了38%,而靶向-83位点和-141位点则对ksdd的转录水平分别提升了2.24倍和3.23倍,同时对应的AD和ADD的产量在对-29位点激活时没有显著变化,而AD和ADD的产量在-83位点分别提升了26%和25%,在-141位点分别提升了29.5%和36%。以上研究为进一步对新金色分枝杆菌基因组水平的代谢工程改造提供了更便捷的方式。
- 林春童丽珍杨套伟邵明龙张显徐美娟廖祥儒饶志明
- 关键词：CRISPR转录激活
- 谷氨酰胺酶基因的克隆、表达和酶学性质研究被引量：2
- 2019年
- 以枯草芽孢杆菌基因组为模板通过PCR扩增获得谷氨酰胺酶基因ylaM,构建重组质粒pMA5-ylaM,将其转化到枯草芽孢杆菌168中获得重组菌BS168/pMA5-ylaM,并在宿主菌成功得到表达,纯化后的谷氨酰胺酶比酶活大小为939.48 U/mg。谷氨酰胺酶的反应最适pH为7.5,反应最适温度为55℃,La^3+、Zn^2+、Fe^3+和Al^3+对谷氨酰胺酶活力具有一定的抑制作用,在NaCl浓度为15%~17.5%的条件下,该酶酶活力可以保留50%以上。在5 L罐中,通过分批补料发酵,其最高酶活力产量为215.06 U/mL。
- 张美丹饶志明张显杨套伟徐美娟
- 关键词：枯草芽孢杆菌谷氨酰胺酶酶学性质
- 天蓝色链霉菌海藻糖合酶的异源表达、活性分析及重组菌全细胞转化合成海藻糖的条件优化被引量：4
- 2019年
- 从天蓝色链霉菌Streptomyces coelicolor克隆得到海藻糖合酶基因(ScTreS),在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行了异源表达,通过Ni-NTA亲和柱对表达产物进行分离纯化得到纯酶,经SDS-PAGE测定其分子量约为62.3 kDa。研究其酶学性质发现该酶最适温度35℃;最适pH7.0,对酸性条件比较敏感。通过同源建模和序列比对分析,对该基因进行定点突变。突变酶K246A比酶活比野生酶提高了1.43倍,突变酶A165T相对提高了1.39倍,海藻糖转化率分别提高了14%和10%。利用突变体重组菌K246A进行全细胞转化优化海藻糖的合成条件并放大进行5L罐发酵,结果表明:在麦芽糖浓度300g/L、初始反应温度和pH分别为35℃和7.0的条件下,转化率最高达到71.3%,产量为213.93 g/L;当底物浓度增加到700g/L时,海藻糖产量仍可达到465.98g/L。
- 吴傲张显徐美娟杨套伟李华钟饶志明
- 关键词：海藻糖合酶克隆表达
