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杜柏榕: 作品数：27 被引量：58H指数：4; 供职机构：吉林大学白求恩医学院更多>>; 发文基金：吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

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利用噬菌体肽库筛选IL-2Rα模拟表位肽的研究被引量：3: 2007年; 目的筛选IL-2Rα模拟表位肽,为研制高效、特异性强的小分子肽类免疫抑制剂奠定基础。方法应用离子交换层析法从小鼠腹水中纯化抗人IL-2Rα单克隆抗体5G1,细胞ELISA方法检测其特异性。用5G1单抗筛选噬菌体环七肽库,并对噬菌体克隆进行抗原性鉴定。根据阳性克隆的DNA序列合成环肽并鉴定其生物活性。结果经5轮筛选、鉴定,获得5个与5G1有较强结合特性的噬菌体阳性克隆。DNA测序并推导氨基酸序列,得到Lys-X-{X}-Lys-Gly保守序列。依此序列合成环七肽CP,小鼠淋巴细胞增殖试验证实其有免疫抑制活性。结论环肽CP为IL-2Rα模拟表位肽,可作为IL-2Rα的拮抗剂发挥免疫抑制效应。; 张吉凤赵雷杜柏榕朱迅; 关键词：噬菌体肽库模拟肽免疫抑制剂

IL-2Rα模拟肽抑制小鼠皮肤移植排斥反应的研究被引量：3: 2007年; 目的:研究IL-2Rα模拟肽CP对小鼠皮肤移植排斥反应的影响。方法:采用小鼠同种皮肤移植模型,通过淋巴细胞增殖试验、单向混合淋巴细胞反应、脾脏T淋巴细胞亚群分析和细胞因子分泌水平测定、皮肤移植物组织学改变、记录皮肤移植物平均存活时间(MST)研究环七肽CP的免疫抑制效应。结果:环七肽CP可降低小鼠脾细胞增殖反应的强度、减少受鼠脾脏T淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞的数目并降低CD4+/CD8+的比值、下调受鼠脾脏T淋巴细胞诱导上清中IL-2和IFN的水平,并可延长皮肤移植物平均存活时间(MST);环七肽CP与免疫抑制剂CsA联用,显示二者具有协同效应。结论:环肽CP以IL-2Rα模拟肽的方式发挥生物学效应,可有效抑制小鼠皮肤移植排斥反应。; 张吉凤赵雷杜柏榕朱迅; 关键词：IL-2RΑ 模拟肽免疫抑制噬菌体展示

抗人DR5单克隆抗体诱导U343细胞凋亡研究被引量：10: 2004年; 目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡配体的死亡受体DR5单克隆抗体对神经胶质瘤细胞株U343的杀伤作用及机制。方法:采用流式细胞仪从蛋白质水平定量地检测DR5在U343的表达;用RT—PCR从mRNA水平检测DR5的表达;免疫细胞化学法明确DR5在U343的分布情况。通过MTT法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪DNA倍体分析,观察抗人DR5单克隆抗体对U343细胞增殖的抑制活性及其诱导凋亡效应。结果:神经胶质瘤细胞株U343表达死亡受体DR5,DR5分布于细胞内细胞核的周围。抗人DR5单克隆抗体3 μg/ml作用4 h可明显杀伤U343细胞,其机制与诱导凋亡有关。结论:抗人DR5单克隆抗体可以诱导神经胶质瘤细胞株U343凋亡,以死亡受体为靶点的抗体制剂为肿瘤治疗提供新的途径。; 庄国洪孙红光杜柏榕朱迅; 关键词：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体死亡受体凋亡

以绿色荧光蛋白为报告蛋白检测真核表达载体pcDNA3.1PLN中L-plastin启动子的活性: 肿瘤基因治疗的关键是目的基因能否在体内被有效的导入特定的肿瘤组织细胞,并实现靶向高效表达。解决这一问题的主要策略是通过利用肿瘤组织/细胞特异性启动子调控治疗基因靶向表达。近年来几项研究结果显示,2.4kb的L-plast...; 李桂英孙红光朱迅杜柏榕; 文献传递

三种转移因子的理化特性和免疫活性比较: 1994年; 王桂兰杜柏榕董历明; 关键词：生物制品免疫活性

L-plastin启动子调控下p16基因的表达有效抑制MCF-7细胞的增殖: p16基因是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂家族的一个成员,它能与Cyclin D1竞争性结合CDK4,抑制其激酶活性,从而抑制细胞增殖。p16基因在多种肿瘤细胞中发生基因的缺失、重排、突变及不表达,目前已被确认为一种抑...; 李桂英孙红光朱迅杜柏榕; 文献传递

HBcAg和HBsAg前S1表位肽融合蛋白的表达研究: 2006年; 构建、表达并纯化了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白BTcs1,为开发新型HBV治疗和预防性疫苗提供实验依据。利用DNA重组技术,构建了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白原核表达质粒pBTcs1,在大肠杆菌(HB101)中进行表达,用蔗糖密度梯度超速离心对表达产物BTcs1进行纯化,用SDSPAGE、SEC、Westernblot和电镜进行鉴定。结果表明成功构建了HBcAg与HBsAg前S1表位肽融合蛋白原核表达质粒pBTcs1,BTcs1的表达量为20～25mg/L,DOTBLOT结果显示BTcs1主要分布在30%～50%蔗糖介质中,SDSPAGE和SEC结果显示蛋白纯度>95%,Westernblot结果显示BTcs1可以与抗HBcAg抗体和抗HBsAg前S1抗体特异杂交,显色条带在约28kDa处,电镜分析表明BTcs1可以自主组装成病毒样颗粒(VLP),直径约为30～34nm。为进一步探讨BTcs1的功能及应用奠定了基础。; 孙红光闫东梅杜柏榕朱迅; 关键词：融合蛋白

L-plastin启动子调控下的肿瘤细胞特异性表达载体的构建及活性分析被引量：4: 2007年; 目的:构建肿瘤细胞特异性表达载体pcDNA3.1PLN-GFP及鉴定活性。方法:用2.4kb的L-plastin启动子,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告蛋白,通过分子克隆技术,构建真核表达载体pcDNA3.1PLN-GFP,用脂质体介导法转染肿瘤细胞和成纤维细胞后,流式细胞术(FACS)分析载体的肿瘤细胞特异性和活性。结果:仅在表达内源性L-plastin的肿瘤细胞和转化的293细胞中有GFP的表达,发光细胞比率较高,而且L-plastin启动子的活性与CMV启动子活性相当,而在其它细胞中没有检测到GFP的表达。结论:我们构建的pcDNA3.1PLN-GFP是一肿瘤特异性的高效表达载体。; 李桂英孙红光王磊田宇杜柏榕朱迅; 关键词：肿瘤特异性 GFP

特异性抗人cyclin D1人源单链抗体的筛选被引量：5: 2006年; 目的从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定。方法以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过“吸附-洗脱-扩增”淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通过ELISA方法对获得抗体的特异性和结合活性进行分析鉴定。结果经过4轮筛选,获得7株能与人cyclinD1蛋白结合的阳性克隆,其中3株噬菌体的可溶性表达单链抗体能与人cyclinD1蛋白有特异性结合活性。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出特异性的人源性抗人cyclinD1抗体。; 李桂英朱迅周立宏邹德生郝东云田宇杜柏榕; 关键词：噬菌体抗体库单链抗体

SUMO蛋白酶的发酵和纯化工艺的研究被引量：4: 2009年; 目前,小分子肽多需要进行融合表达,虽然有GST标签等表达体系,但是表达产物切割时仍留有多余氨基酸,影响小分子肽的功能;SUMO蛋白酶对SUMO融合表达系统表达的重组蛋白进行切割时没有多余氨基酸残留,因此成为蛋白切割工具的热点。利用基因工程技术构建重组His-Ulp1/pET3c/BL21(DE3)工程菌株,用摇瓶优化表达条件,摸索高密度发酵工艺和不同层析纯化工艺条件。结果表明,经1.0mmol/L的IPTG30℃诱导表达6h,表达效果最好。罐发酵后菌体SDS-PAGE分析表达量可达24.39%,通过CMSepharose Fast Flow阳离子交换一步层析可获得纯度大于98%的SUMO蛋白酶,每升发酵液可获得355mg的SUMO蛋白酶纯品。Western blot分析表明,UlP1能与6×His抗体产生免疫反应。为日后大规模产业化生产奠定了基础。; 冯秀萍杜柏榕闫东梅赵向峰朱迅; 关键词：发酵优化离子交换层析

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