杜志荣 作品数:8 被引量:16 H指数:2 供职机构: 中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所 更多>> 发文基金: 美国中华医学基金 国家自然科学基金 国家重点实验室开放基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
PCR/SSCP技术在检测HLA基因点突变中的应用 被引量:1 1996年 聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR/SSCP)是根据核苷酸序列不同的单链DNA,可形成不同构象,从而在不含变性剂的聚丙烯酰胺凝胶中泳动速度不同的原理,分离鉴定等长DNA单链的方法。本文应用PCR/SSCP方法检测了60例无亲属关系个体白细胞抗原Ⅱ类基因(HLA-DOA1)5-上游调控区的等位基因多态性,并以PCR直接测序证明每种SSCP带型都与不同位置单个碱基取代相关联。 朱席琳 余跃 杜志荣 周文郁 邱长春关键词:白细胞抗原 突变 聚合酶链反应 单链构象多态性 醛固酮合成酶基因多态性与哈萨克族人群高血压的关系 被引量:8 2011年 目的探讨醛固酮合成酶(Cyp11B2)基因C-344T多态性与哈萨克族原发性高血压易感相关性。方法采用病例-对照相关分析,高血压患者354例(男性/女性=163/191),平均年龄52.80±11.46岁;正常血压对照360人(男性/女性=169/191),平均年龄41.96±13.78岁,均为哈萨克族牧民。应用聚合酶链反应/限制性片段长度多态性(PCR/RFLP)分析和PCR产物直接测序鉴定Cyp11B2调控区C-344T基因型。结果 (1)血脂测定结果表明,高血压组血清中TG、TC、ApoA、ApoB尿酸和肌酐水平明显高于对照组(P:0.0001~0.01)。(2)高血压组的BMI值远远高于对照组(P<0.0001)。(3)C-344T位点基因型分布在病例-对照,及男性/女性组均符合Hardy-weinberg遗传平衡定律。(4)高血压组(男性+女性)与对照组(男性+女性)基因型和等位基因频率分布无明显差异;按男、女性分组分析,高血压组男性-344C等位基因频率较对照组男性稍有增加,(47.24%vs38.17%,P=0.043)。结论本文研究结果表明,肥胖(BMI>24kg/m2)和高血脂可能是哈萨克族人群原发性高血压患病率高的重要危险因素,醛固酮合成酶C-344T多态性仅仅增加男性易感高血压的危险性。 杜志荣 张琳 张彬 阿木提司马义 张明涛 孙玉晶 李博 李广平 邱长春关键词:哈萨克族 原发性高血压 醛固酮合成酶 血管紧张素原基因(GT)重复多态性与藏族原发性高血压 被引量:2 2011年 目的探讨血管紧张素原基因(GT)3′-端(GT)重复多态性与藏族原发性高血压(EH)易感相关性。方法导入基于群体的病例-对照相关分析。病例组360例(M/F=168/192);对照组380人(M/F=177/203)。平均年龄分别为51.4±14.5岁和47.8±12.4岁。应用荧光标记dctp参入PCR扩增和基因扫描技术检测各片段长度及基因型。结果藏族血管紧张素基因3′-端(GT)重复序列在10种主要等位基因(频率>1%),从小到大依次称为A1(162bp),A2,A……,A10(180bp)。重复次数依次为(GT)≥1.5,(GT)16……(GT)≥24。分布频率从1.7%~27.5%;A4(GT18)为常见等位基因。高血压组A7(GT21)频率较对照组明显升高(11.3%:5.9%,χ2=5.02,P=0.023,OR=2.01,95%CI:1.05~1.87)。结论 AGT基因3′-端(GT)n多态性与藏族EH易感相关,而与汉族EH无关联。 张琳 杜志荣 朱席琳 卓玛次仁 崔超英 庄兰平 边巴 余跃 丁守全 柴作春 岑维俊 邱长春关键词:藏族 原发性高血压 血管紧张素原 汉族人群血管紧张素原基因的新单核苷酸多态性位点 被引量:2 2002年 应用改进的PCR SSCP技术、多种聚丙烯酰胺凝胶电泳和PCR产物直接测序等方法 ,分析人的血管紧张素原(AGT)基因启动子区 5 '远侧端的单核苷酸多态性 (SNP)。在非变性胶上 ,发现不同样品的PCR产物 (双链DNA分子 )电泳迁移率不同 ;而在变性胶上 ,对应的单链DNA分子电泳迁移率相同 ;PCR产物直接测序的结果表明 ,在同一PCR扩增片段中同时存在两个SNPs位点 (G 10 74T ,A 1179G) ;通过 4 76个不同样品的实验结果 ,进一步证实两个SNPs位点处于完全的连锁不平衡关系。GenBank同源性比较结果显示 :A 刘天承 侯淑琴 张琳 杜志荣 余跃 邱长春关键词:汉族人群 血管紧张素原基因 单核苷酸多态性 位点 高血压 两种不同缓冲系统的多聚甲醛对鼠脑组化结果的影响 2014年 哺乳动物大脑皮质的发育长期以来都是发育生物学研究的焦点和热点.目前用于研究大脑发育的组织化学技术主要有原位杂交技术和免疫荧光染色,而这些技术均需要前期的标本制备,尤其是取材后的组织固定.组织固定的主要目的是尽可能保持组织内待检测物的原位性、完整性和免疫活性[1],所以组织固定的效果往往决定着组化实验最终结果的成败.4%多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)因其优良的理化性质成为目前固定标本组织的常用固定剂之一[2-3],而关于其配制方法,尤其是用于溶解它的溶剂的选择目前还未有定论.本研究以此问题为出发点,比较不同溶剂的4%PFA对鼠脑组织的固定效果,探讨最佳的组织固定方法. 杜志荣 张琳 阴彬 彭小忠关键词:多聚甲醛 鼠脑 组织化学技术 免疫荧光染色 原位杂交技术 世居海平面以下地区人群的生理特征 被引量:2 2013年 目的吐鲁番盆地是我国海拔最低(最低处为-154.3米)平均大气压最高的地区。本研究旨在探明生活在海平面下地区人的生理特征和低海拔富氧自然环境对血氧饱和度的影响。方法采用非概率抽样法。样本取自新疆维吾尔自治区吐鲁番盆地的托克逊县,地处海平面以下30~60米处的夏乡世居维吾尔族和汉族人。通过调查问卷、体格检查和生化指标测定获取被研究人群的人口学资料和生理、生化特征数据。结果被调查维吾尔族572人(男性/女性=238/334),汉族90人(男性/女性=33/57),分别占当地维、汉族总人数的16.3%和18.0%。结果表明:①维吾尔族男、女性身高明显高于汉族人,P值分别<0.0001和等于0.000;②该地区世居人群平均血氧饱和度与生活在海平面上常氧环境人群的血氧饱和度相近,变化范围在95%~100%,无民族差异。存在个体差异和性别差异,女性平均血氧饱和度略高于男性;③汉族男性空腹血糖异常率和血浆尿素氮、高密度脂蛋白水平明显高于维吾尔族男性,分别为57.3%vs 37.0%(P=0.023),6.36±1.58μmol/L vs 5.78±1.34μmol/L(P=0.028)和1.56±0.30μmol/L vs 1.44±0.24μmol/L(P=0.019);④调整年龄后,维吾尔族女性体重、BMI和腰围都大于汉族女性。结论初步结果表明,生活在低海拔富氧地区人群的平均血氧饱和度与生活在海平面上常氧环境下人群的平均血氧饱和度无差异,但都存在个体和性别差异。维吾尔族男、女身高都高于当地汉族,表明与遗传因素相关。 杜志荣 穆叶赛.尼加提 张琳 韩伟 李鸿梅 邓志会 吴桐 何宁 姜晶梅 阿木提司马义 邱长春关键词:吐鲁番盆地 生理特征 血氧饱和度 二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体稳定性研究 被引量:1 2010年 目的:研究二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody)在体外和体内的稳定性。方法:将抗CD3/抗Pgp Diabody置于37℃含0.2%人血清白蛋白(human serumalbumin,HSB)的PBS中,孵育不同时间后,用流式细胞术(FACS)检测其结合活性。建立K562/A02裸鼠移植瘤模型,用Cy5荧光标记试剂盒标记抗CD3/抗Pgp Diabody,通过尾静脉注射给荷瘤裸鼠,在小动物活体成像系统上动态观察荧光信号。结果:二硫键稳定的抗CD3/抗Pgp Diabody(Ds-diabdoy)体外孵育72小时后活性无明显下降,而改造前Diabody孵育1小时后活性即开始下降,24小时后活性完全丧失。Ds-diabdoy注射后72小时仍能在肿瘤部位检测到荧光信号,而改造前Diabody在注射后24小时肿瘤部位荧光信号消失。结论:Ds-diabdoy较改造前Diabody稳定性大大提高。 杨铭 程昕 杜志荣 王彦 范冬梅 刘娟妮 王金宏 纪庆 高瀛岱关键词:药物稳定性 DIABODY 二硫键 多药耐药 工程菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2的遗传稳定性 2012年 目的本基因工程大肠杆菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2所表达的靶向融合蛋白XE-TNFαm2已被初步证明具有用于清除艾滋病患者体内HIV病毒的前景。其目的蛋白表达水平为32%~36%细胞总蛋白。本研究旨在验证其遗传稳定性。方法工程菌株DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm分别在LBAmp+与LBAmp-二种固体培养基上逐日单菌落划线传代,32℃培养过夜。每间隔十代运用一般温控表达技术,确定其XE-TNFαm2的蛋白含量,最后比较分析各代之间目的蛋白(20.3 kDa)表达水平的差异情况。结果该重组基因工程菌连续传100代后XE-TNFαm2的蛋白表达水平没有明显差异(P>0.05);只是在上述两种情况下传至100代后将其置于4℃保藏4、5、6个月,其目的蛋白表达水平有8%的下降。本载体质粒含有的CIts857序列、PL启动子与T1T2末端终止序列,是确保目的基因稳定高表达的3个关键元件。结论本研究结果证明该工程菌DH5α/pCW-PL-XE-TNFαm2具有良好的遗传稳定性。 路金芝 杜志荣 赵庆 张琳 杨晶 陈伟京 蒋虹 李涛 王欣 王憬惺 卢圣栋关键词:基因工程菌 传代