李金慧
- 作品数：6 被引量：12H指数：2
- 供职机构：广州市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 镉暴露对人胚肾细胞TET酶表达及DNA甲基化水平的影响被引量：5
- 2015年
- 目的：观察人胚肾细胞（HEK293）短期暴露于高剂量氯化镉（CdCl2）时，TET酶表达及DNA甲基化水平的变化。方法 HEK293细胞经CdCl2染毒24、48和72 h后，用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率并记录细胞形态，Real-time PCR法检测mRNA表达水平，Western blot法检测TET3酶蛋白表达水平，并采用焦磷酸测序法检测全基因组DNA甲基化水平。结果细胞增殖及细胞存活率监测结果显示，CdCl2对HKE293细胞有毒性作用，其半数抑制浓度（IC50）为1.78μmol/L；CdCl2处理HEK293细胞24、48和72 h后，细胞形态发生改变，2.0μmol/L染毒组细胞呈空泡样变化且形态模糊。染毒剂量分别为0.0、0.5、1.0和2.0μmol/L时，TET1 mRNA相对表达量分别为0.23±0.13、0.48±0.12、0.59±0.16和0.95±0.39（F=182.89，P=0.002）；TET2 mRNA相对表达量分别为0.23±0.12、0.32±0.02、0.31±0.10和0.34±0.07（F=18.91，P〈0.001）；TET3 mRNA相对表达量分别为0.26±0.10、0.27±0.11、0.25±0.11和0.28±0.09（F=1.76，P=0.036）。TET1 mRNA、TET2 mRNA和TET3 mRNA相对表达量在染毒时间和染毒剂量均有交互作用（F值分别为32.94、23.04和13.78，P值分别为〈0.001、0.041和〈0.001）。Western blot检测结果显示，TET酶蛋白表达量在不同时间梯度和浓度梯度的改变趋势与mRNA相对表达量一致。染毒时间分别为24、48和72 h时，全基因组DNA甲基化水平分别为（55.01±3.62）%、（48.31±8.99）%、（48.76±6.60）%（F=18.50，P〈0.001）；染毒剂量分别为0.0、0.5、1.0和2.0μmol/L时，全基因组DNA甲基化水平分别为（55.29±2.83）%、（55.35±3.11）%、（48.58±6.40）%和（43.56±7.89）%（F=7.03，P=0.048）。全基因组DNA甲基化水平在剂量组和时间点有交互作用（F=2.73， P=0.043）。结论在CdCl2短期暴露下，随着染毒剂量和染毒时间的增加，TET酶mRNA和蛋白表达水平呈逐渐升高的趋势，且全基因组DNA也表现出去甲
- 李金慧李文学殷花张波朱伟
- 关键词：镉DNA甲基化
- DNA甲基化分析方法及相关应用被引量：2
- 2014年
- DNA甲基化与基因调控关系密切,且对生物体生长发育等正常生理过程和肿瘤、心血管等多种疾病的病理过程有重要影响。近年来随着对表观遗传学及DNA甲基化的深入研究,基因组中甲基化位点的发现、检测及甲基化"图谱"的认识发展迅速。本文拟就DNA甲基化分析方法和相关应用进行初步总结和探讨,以期指导各方法的进一步完善,为表观遗传、基因印迹、肿瘤等疾病的研究提供强有力的技术支持。
- 李金慧张波朱伟
- 关键词：DNA甲基化表观遗传学焦磷酸测序分析方法
- 3,3'-二吲哚甲烷对过氧化氢诱导人角质形成细胞氧化应激的预防作用及其机制被引量：1
- 2015年
- 目的：探究3，3＇-二吲哚甲烷（DIM）对过氧化氢（H2O2）诱导人角质形成细胞（HaCaT）氧化应激作用的预防效应及可能机制。方法：体外培养HacCaT细胞，用H2O2建立氧化应激模型。采用CCK-8法检测不同浓度（1～20μmol／L）DIM对HaCaT细胞生长的抑制作用；流式细胞术检测DIM作用前后细胞内活性氧自由基（ROS）含量的变化；Western blot检测不同浓度DIM（0、5、10μmol／L）对HaCaT氧化应激相关蛋白核因子（NF-kB）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）磷酸化表达水平的影响。结果：成功建立了HacaT氧化应激模型。CCK-8法研究结果显示1～10μmol／LDIM对HacaT细胞无明显毒性作用（P〉0．05）；流式细胞术检测结果表明10μmol／DIM预处理可有效预防由H2O2诱导的HacaT内ROS产生（P〈0．05）；Western blot检测结果显示，随着DIM浓度的增加，HaCaT中p38-MAPK、JNK和NF—kB磷酸化蛋白表达水平均逐渐降低（P均〈0．05）。结论：DIM预处理可减弱HaCaT中由H2O2引起的氧化应激，其机制可能是通过抑制ROS的产生及对NF—kB、MAPK家族等氧化应激相关蛋白表达的调控作用来实现的，提示DIM可作为预防或改善氧化应激型皮肤细胞损伤的一种有效药物。
- 殷花李文学李梦承邓宇婷李金慧李军涛吴锦银杨光宇林忠宁朱伟
- 关键词：HACAT细胞氧化应激
- 镉亚急性暴露对小鼠肝肾功能及甲基化水平的影响被引量：6
- 2015年
- [目的]初步探讨氯化镉(cadmium chloride,Cd Cl2)亚急性暴露(4周染毒)对小鼠肝肾功能、全基因组甲基化水平及去甲基化酶Tet1表达的影响。[方法]将48只SPF级KM小鼠(昆明小鼠,雌雄各半)随机分为4组:对照组(dd H2O)、Cd Cl2 17.5 mg/kg组、25 mg/kg组、35 mg/kg组。经口灌胃染毒(每天1次、每周5 d),共染毒4周,CO2麻醉法处死动物。测定肝脏和肾脏的脏器系数、血液常规及血液生化检查、肝肾组织病理学检查、全基因组DNA甲基化水平及Tet1酶表达水平。[结果]35 mg/kg染毒组小鼠活动度及精神状态较差。小鼠体重在各染毒周期和染毒剂量组间差异均有统计学意义,且存在交互作用(P<0.05)。与对照组相比,雄性小鼠肝脏质量和肝脏脏器系数在25 mg/kg和35 mg/kg剂量组差异具有统计学意义(P<0.05);血液常规检查结果显示,雌、雄性小鼠35 mg/kg染毒组血液白细胞(WBC)、血小板(PLT)、淋巴细胞(LYM)计数,均高于对照组(P<0.05);雄性小鼠在各个染毒剂量组间,WBC、PLT、LYM、RBC计数差异有统计学意义(P<0.05)。此外,血生化实验结果显示,各剂量组雄性和雌性小鼠中肝功能的主要指标谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)差异有统计学意义(P<0.05),肾功能的主要指标尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CR)差异均有统计学意义(P<0.05)。组织病理学分析发现25 mg/kg和35 mg/kg组雄性小鼠肝脏及肾脏呈现明显的病理性改变。Tet1 m RNA及其蛋白表达水平仅在雄性小鼠的肝脏、肾脏中表达的差异有统计学意义(P<0.05)。焦磷酸测序结果显示,雄性小鼠肝脏、肾脏甲基化水平表达差异有统计学意义(P<0.05),且其与Tet1 m RNA表达呈负相关(r=-0.473,P<0.05;r=-0.134,P<0.05)。[结论]Cd Cl2亚急性染毒可以诱导小鼠肝肾功能损伤,且对全基因组甲基化水平和去甲基化酶Tet1表达呈现出性别差异影响,雄性小鼠的肝肾组织Tet1表达参与调控全基因组DNA甲基化水平改�
- 李金慧李文学李军涛马艳吴燕殷花苏艺伟张波朱伟
- 关键词：镉DNA甲基化肾功能小鼠
- 镉亚急性暴露对小鼠肝肾功能及甲基化水平的影响
- ：初步探讨氯化镉亚急性染毒对小鼠肝肾功能及基因组甲基化水平及去甲基化酶Tet1表达的影响. 方法：将48只SPF级KM小鼠(雌雄各半)随机分为四组:对照组、氯化镉低剂量组(17.8mg/kg)、氯化镉中剂量组(25...
- 李金慧李文学李军涛马艳昊燕殷花苏艺伟张波朱伟
- 关键词：肝肾功能脱氧核糖核酸甲基化水平
- TET酶调控镉致HEK293细胞毒性作用中DNA甲基化的初步研究
- 目的观察去甲基化酶(Ten-Eleven Translocation Enzymes,TETs)在氯化镉(Cadmium Chloride,ClCd2)短期高剂量暴露于人胚肾细胞(HEK293)中表达的改变及对DNA甲基...
- 李金慧李文学殷花张波朱伟
- 文献传递
