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大鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法的比较被引量：12: 2007年; 目的:探讨体外分离培养高纯度、高活力大鼠骨髓间充质干细胞(MMSC)的方法,为眼科组织工程提供种子细胞。方法:取清洁级SD大鼠,改良贴壁筛选法分离培养MMSC,采用MTT法检测MMSC活性,流式细胞术检测MMSC纯度。对比改良贴壁筛选法与密度梯度离心法,剪去干骺端法与骨干中间剪断法,不同月龄大鼠MMSC活性和纯度(CD44+CD34-,CD90+CD34-)的差别。结果:改良贴壁筛选法比密度梯度离心法获取的MMSC细胞数量多,细胞纯度差异无明显统计学意义。剪去干骺端法比骨干中间剪断法获取的MMSC细胞数量少,细胞纯度差异无明显统计学意义。在相同接种密度条件下,MMSC的增殖活力随大鼠年龄的增长而下降。结论:改良贴壁筛选法是一种简便易行的培养高活力、高纯度MMSC的方法。; 谢茂松徐国兴李琼肖紫云; 关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养

体外传代培养对人视网膜色素上皮细胞免疫调控能力的影响: 2008年; 目的:研究体外传代培养对人类视网膜色素上皮(human reti-nal pigment epithelialium,HRPE)细胞免疫调控能力的影响。方法:建立HRPE细胞与异体淋巴细胞共培养系统,采用流式细胞术检测原代及传代HRPE细胞(第1、2、3、4、5、6代)Fas表达以及诱导异体淋巴细胞凋亡能力的差异。结果:HRPE与淋巴细胞体外共培养时,HRPE细胞Fas表达随着传代逐渐减弱,Fas表达与传代代数呈负相关(阳性细胞率r=-0.859,P<0.01;平均荧光强度r=-0.880,P<0.01),HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡随着传代逐渐减弱,淋巴细胞凋亡率与传代代数呈负相关(r=-0.838,P<0.01),共培养时传代HRPE细胞Fas表达迅速下降,至第3代与第4代间Fas表达差异无统计学意义(P>0.05),共培养时传代HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡率迅速下降,至第3代与第4代间淋巴细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:体外传代培养的HRPE细胞,传代数越大细胞变异越大,第3代后细胞的免疫调控能力明显下降。; 徐国兴李琼陈瑾郑学栋郭健谢茂松; 关键词：视网膜色素上皮细胞传代培养淋巴细胞凋亡

人类视网膜色素上皮细胞体外培养的转分化被引量：1: 2008年; 目的:研究人类视网膜色素上皮细胞(human retinal pig-ment epithelium,HRPE)体外培养的转分化现象。方法:倒置显微镜观察体外培养HRPE细胞形态变化;采用免疫细胞化学染色方法检测HRPE细胞角蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化。结果:HRPE细胞体外培养时形态由上皮细胞特征变化成为间质样细胞;细胞角蛋白表达与传代代数呈负相关(r=-0.831,P<0.001),α-SMA表达与传代代数呈正相关(r=0.456,P=0.002);角蛋白18表达高密度组较低密度组强(t=2.591,P=0.027);而α-SMA表达高密度组较低密度组弱(t=2.938,P=0.015)。结论:HRPE细胞体外培养转分化主要是体内外环境差异引起。; 谢茂松徐国兴李琼郭健冯月兰; 关键词：细胞培养

视网膜血管内皮细胞的培养与纯化被引量：4: 2010年; 目的:探讨人视网膜血管内皮细胞的体外分离和选择性培养方法。方法:将人视网膜通过剪碎、匀浆、过筛、胶原酶消化处理后,结合密度梯度离心和物理刮除等分离方法获得较纯的视网膜血管内皮细胞,接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶中,并采用含内皮细胞生长因子和肝素的培养基促进内皮细胞贴壁生长,观察细胞生长状况,并应用免疫组化方法进行鉴定。结果:培养的细胞成典型的铺路石样生长,Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色为阳性,细胞纯度达98%以上。结论:本实验方法简单易行,培养出的人视网膜血管内皮细胞纯度高、生长状态良好,并可稳定传代,为视网膜血管疾病的基础研究提供有效的模型建立方法。; 徐国兴李琼谢茂松郭健王婷婷胡建章; 关键词：视网膜微血管内皮细胞细胞培养

大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养: 目的：探讨体外分离培养高纯度、高活力大鼠骨髓间充质干细胞(MMSCs)的方法,为眼科组织工程提供种子细胞。设计：实验研究。研究对象：大鼠 MMSCs。方法：采用 MTT 法检测 MMSCs 活性,流式细胞术检测 MMSC...; 徐国兴谢茂松李琼肖紫云; 文献传递

体外传代培养对人视网膜色素上皮细胞免疫调控能力的影响: 2009年; 目的研究体外传代培养对人类视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelialium,HRPE)细胞免疫调控能力的影响。方法建立HRPE细胞与异体淋巴细胞共培养系统,采用流式细胞术检测原代及传代HRPE细胞(第1、2、3、4、5、6代)Fas表达以及诱导异体淋巴细胞凋亡能力的差异。结果HRPE与淋巴细胞体外共培养时,HRPE细胞Fas表达随着传代逐渐减弱,Fas表达与传代代数呈负相关(阳性细胞率r=-0.859,P<0.001;平均荧光强度r=-0.880,P<0.001),HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡随着传代逐渐减弱,淋巴细胞凋亡率与传代代数呈负相关(r=-0.838,P<0.001),共培养时传代HRPE细胞Fas表达迅速下降,至第3代与第4代间Fas表达差异无统计学意义(P>0.05),共培养时传代HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡率迅速下降,至第3代与第4代间淋巴细胞凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外传代培养的HRPE细胞,传代数越大细胞变异越大,第3代后细胞的免疫调控能力明显下降。; 徐国兴李琼; 关键词：视网膜色素上皮细胞传代培养淋巴细胞凋亡

人视网膜血管内皮细胞的分离与培养: 2007年; 目的:探讨人视网膜血管内皮细胞的体外分离和选择性培养方法。方法:将人视网膜通过剪碎、匀浆、过筛、胶原酶消化处理后,结合密度梯度离心和物理刮除等分离方法获得较纯的视网膜血管内皮细胞,接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶中,并采用含内皮细胞生长因子和肝素的培养基促进内皮细胞贴壁生长,观察细胞生长状况,并应用免疫组化方法进行鉴定。结果:培养的细胞成典型的铺路石样生长,Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色为阳性,细胞纯度达98%以上。结论:本实验方法简单易行,培养出的人视网膜血管内皮细胞纯度高、生长状态良好,并可稳定传代,为视网膜血管疾病的基础研究提供有效的模型建立方法。; 李琼徐国兴; 关键词：视网膜微血管内皮细胞细胞培养

血管生成素在脉络膜新生血管中的作用: 2007年; 脉络膜新生血管与眼部许多疾病有关,是引起视力障碍的重要原因之一。血管生成素(Ang)是一类特异性作用于血管内皮细胞的细胞因子,其中Ang-1和Ang-2与血管生成素受体Tie-2结合后构成的Ang/Tie-2信号传导系统在脉络膜新生血管的发生过程中起着重要的作用。本文就血管生成素家族成员及其受体与脉络膜新生血管生成机制的关系综述如下。; 李琼徐国兴; 关键词：血管生成素脉络膜新生血管

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李琼