李斌元
- 作品数：42 被引量：98H指数：5
- 供职机构：南华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生文化科学化学工程更多>>
- 耐辐射奇球菌Dps-2蛋白的互作蛋白筛选
- 背景及目的:耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans,DR)是目前世界上已知最强的抗辐射生物之一,以其对于电离辐射等诸多逆境因素的超强耐受和抵抗力而著称,其抗性机理主要可归因于其特殊的物质结构和生存方...
- 马云何淑雅李斌元
- 关键词：耐辐射奇球菌氧化应激酵母双杂交
- 抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2006年
- 为了制备特异性抗人血栓调节蛋白(human thrombomodulin,hTM)的单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),利用脂质体Lipofectamine 2000将包含hTM全长cDNA序列的重组表达质粒pThr402转染CHO细胞,经G418筛选及相关鉴定后获得高效稳定表达hTM的CHO-TM5细胞株。将CHO-TM5细胞直接免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术,通过细胞ELISA (cellular enzyme-linked immunoabsorbent assay,CELISA)筛选出阳性克隆后,将杂交瘤细胞株腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水。用CELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及免疫印迹法对所获McAb的特异性进行鉴定。我们获得了1株可稳定分泌抗hTM的McAb的杂交瘤细胞株NH-1,其亚型为IgGl,McAb腹水效价为1×10^(-6),腹水抗体含量为20 mg/ml。NH-1对相应抗原具有较高的组织特异性,在体内与正常组织的交叉反应少,对人脐静脉内皮细胞、CHO-TM5有特异性结合反应,说明NH-1可特异性识别天然的hTM分子,为进一步应用此McAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了基础。
- 郭紫芬何淑雅朱炳阳严鹏科李斌元廖端芳
- 关键词：血栓调节蛋白单克隆抗体
- 脆性X综合征的研究进展
- 2003年
- 简述了脆性X综合征的发病机理、临床特征、遗传特征及其诊断方法 ,着重介绍了脆性X综合征发病机制的分子研究及其产物FMRP生物学功能研究的进展。
- 马云何淑雅李斌元
- 关键词：脆性X综合征基因诊断FMR-1基因FMRP
- 不同民族人群FMR1基因CGG重复序列检测与分析被引量：6
- 2007年
- 目的检测和分析脆性X综合征致病基因FMR1 CGG重复序列在汉族和壮族人群中的多态性分布。方法采用PCR扩增技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对1060例汉族人（男280人，女780人）和283例壮族人（男85人，女198人）FMR1基因CGG重复序列进行分析，并用Southern印迹技术对结果进行了验证。结果汉族人群中共检测到33种等位基因，其中CGG重复序列范围为6～43，壮族人群共检测到27种等位基因，CGG重复序列范围为6～57，两类人群中最常见的等位基因分别为28和29。结论应用PCR扩增技术进行了FMR1基因的大面积筛查，中国汉族和壮族人群中FMR1基因CGG重复序列变异分布略有差异。
- 马云何淑雅李斌元苏娇喻长顺刘慧婷徐向红
- 关键词：脆性X综合征FMR-1基因
- 耐辐射奇球菌pprM DNA结合域功能分析预测与基因敲除重组体的构建被引量：1
- 2013年
- 通过生物信息学分析发现,pprM基因含有冷休克DNA结合域。利用Overlap PCR方法获得pprM基因DNA结合域缺失的基因片段pprMΔCSD后,酶切扩增的片段和自杀质粒空载体pk18mobsacB,并将目的基因片段与自杀质粒载体连接构建重组载体pk18mobsacB-pprMΔCSD,将重组子转化大肠杆菌JM109感受态,筛选出阳性克隆,酶切及测序鉴定。成功构建pprM DNA结合域基因敲除重组体,且生物信息学分析预测结果显示pprM DNA结合域与耐辐射奇球菌抗辐射功能相关。
- 杨杰苏泽红李斌元马云肖潇范美婷李伟王秋岩何淑雅
- 关键词：耐辐射奇球菌重叠延伸PCR
- 生物科学专业基因工程教学改革初探被引量：6
- 2013年
- 《基因工程》是我校生物科学专业的主干课程之一。该课程是一门具有很强实践性的技术学科,本课程教学质量的好坏将直接关系到学生的专业素质、动手能力以及创新能力的培养。本教研室从教学内容、教学方法和手段、构建网络教学平台,实验教学和考核方式等五个方面入手,对《基因工程》传统的教学模式进行了一系列的改革,实践证明取得了一定的成效。
- 苏泽红练高建何淑雅尹卫东李斌元
- 关键词：基因工程生物科学网络教学
- 利用hTM表达细胞株制备抗人血栓调节蛋白单克隆抗体被引量：2
- 2009年
- 为了研制抗人血栓调节蛋白(hTM)的单克隆抗体(mAb),给经CHO细胞免疫的BALB/c小鼠腹腔注射环磷酰胺诱导其对CHO和CHO-TM5细胞的共同抗原表位产生免疫耐受,再用高效表达hTM的CHO-TM5常规免疫小鼠.细胞融合后,ELISA筛选分泌抗hTM的特异性mAb阳性克隆,并将其腹腔注射BALB/c小鼠诱生腹水.腹水中的mAb经亲和层析纯化后,采用ELISA、流式细胞术、免疫组织化学染色法及Westernblotting对其进行特异性鉴定.结果显示,共获得了5株阳性克隆,其中2F7可稳定分泌IgG1亚型的mAb,腹水抗体效价为1×10-6,含量为19.56g/L.2F7在体内与正常组织的交叉反应极少,对HUVEC、CHO-TM5有特异性结合,并可识别细胞裂解液还原条件下分子质量为105ku左右的蛋白质多肽.2F7的解离常数Kd约为1.22×10-9mol/L.实验结果表明,通过采用新的技术路线,直接应用hTM表达细胞株免疫小鼠,成功制备了具有高度特异性与高亲和力的抗hTMmAb,为其他来源困难的蛋白质mAb制备提供了可借鉴的技术方案,同时2F7的研究鉴定为进一步应用抗hTMmAb进行hTM生物学功能及临床意义研究提供了新的物质基础.
- 郭紫芬何淑雅朱炳阳李斌元廖端芳
- 关键词：免疫耐受环磷酰胺血栓调节蛋白单克隆抗体
- 酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白被引量：5
- 2006年
- 目的应用酵母双杂交系统筛选CLN8P相互作用蛋白质,通过对相互作用蛋白质的筛选及研究,探讨CLN8的功能,为CLN8和NCLs疾病群的发病机制研究提供线索,并为疾病的蛋白质相互作用网络提供资料。方法应用酵母双杂交技术,以pLexA-CLN8为诱饵质粒筛选人胎脑cDNA文库,得到Leu+LacZ+阳性克隆,进一步进行验证,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果从人胎脑cDNA文库中筛选得到60个Leu+LacZ+阳性克隆;将获得的具有外源性片段的文库质粒与诱饵质粒一对一重新转入酵母体内对相互作用进行验证,共获得阳性克隆22个;对验证后阳性克隆测序并进行同源性分析,共获得不同的候选基因序列5个。结论应用酵母双杂交系统,共筛选得到5个不同的基因,其编码蛋白与CLN8P有相互作用,可能与NCLs发病机制相关。
- 何淑雅肖卫纯李洁李斌元孙春莉闵凌峰ZHONG Nanbert
- 关键词：酵母双杂交技术蛋白质相互作用
- 丹参、川芎、SOD防治再灌注肾功能衰竭的实验研究被引量：10
- 1994年
- 本文报道丹参(SM)、川芎嗪(TMP)、超氧化物歧化酶(SOD)防治肾缺血再灌注自由基对肾脏损伤的实验研究.实验分预防及治疗二部分,分别阻断肾血流60分钟及120分钟再灌注30分钟,前者在阻断前8分钟静脉给药,后者再灌注前8分钟静脉给药.结果表明肾缺血再灌注产生大量脂质过氧化物(LPO),SOD活性明显降低,肾超微结构及肾功能严重受损.而上述药物能清除LPO,增加SOD活力,保护肾功能,具有防治再灌注急性肾功能衰竭的作用.
- 李解芳罗志刚刘振湘陈兰林何科明张秋桂陈书舜李春朱淑媛李斌元范高峰
- 关键词：肾功能衰竭丹参川芎超氧化物歧化酶
- Battenin相互作用蛋白的筛选与初步鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的寻找Battenin相互作用蛋白的筛选方法,并对筛选出的Battenin相互作用蛋白进行初步鉴定。方法将编码Battenin相互作用蛋白肽段的cDNA序列与plexA质粒的DNA结合结构域基因重组作为诱饵,应用MATCHMAKERLexA酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与Battenin相互作用蛋白再发生相互作用的蛋白质的cDNA,并进行生物信息学分析。结果从胎脑cDNA文库中筛选得到7个阳性克隆,其中一个基因与人TEGT基因有99%的同源性,TEGT编码蛋白为Bax抑制子1。结论Battenin相互作用蛋白与Bax抑制子1或类似物相互作用,Bax抑制子1具有反式调控因子特性,二者都可能参与基因表达调控。
- 李斌元王桂良马云肖卫纯李洁孙春莉闵凌峰虞佳Nanbert Zhong何淑雅
- 关键词：分子生物学蛋白质相互作用酵母双杂交
