李彦芳
- 作品数：10 被引量：57H指数：4
- 供职机构：扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家科技重大专项江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 1株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/Jiangsu/022/2009的全基因测序及遗传进化分析被引量：7
- 2010年
- 目的对2009年分离自华东地区某活禽交易市场的1株国内未见报道的H6N6亚型禽流感病毒进行了全基因序列的测定,以探讨该病毒各基因片段的可能来源。方法通过常规的血清学试验确定病毒HA亚型,经RT-PCR方法扩增出各基因片段,连接到pGEM-Teasy载体上进行序列测定,利用BLAST进行序列的同源性分析,并结合GenBank中已收录的H6N6亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。结果 BLAST结果显示该H6N6病毒的HA基因与近年台湾分离株A/duck/Kingmen/E322/2004(H6N2)的核苷酸一致性最高(94.0%),推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-G,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列;NA基因与华东地区分离株A/duck/EasternChina/160/2002(H4N6)的亲缘关系最近(核苷酸一致性91.0%);而PB1基因与荷兰2003年间分离的H7N7亚型流感病毒关系密切;PA基因则与1999-2000年间意大利分离的H7N1亚型流感病毒亲缘关系较近;NS1蛋白在第218位提前引入终止密码子致使C末端缺失13个氨基酸。结论国内首次分离到的H6N6亚型禽流感病毒的基因组构成较为复杂,但8个基因片段均属于欧亚系,与分离自北美地区的H6N6病毒的遗传距离较远,分别位于不同的进化分支。
- 顾敏宋庆庆李彦芳徐全刚彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒基因组进化分析H7
- 一株野鸭源H4N6亚型禽流感病毒A/mallard/Yancheng/2005的全基因组克隆和序列分析被引量：6
- 2009年
- 应用流感病毒通用引物对盐城珍禽自然保护区野鸭泄殖腔棉拭子分离株禽流感病毒A/mallard/Yancheng/2005(简称Mallard/YC/2005)(H4N6)进行全基因组序列扩增,结合GenBank中的相关序列进行遗传进化分析。结果表明,Mallard/YC/2005(H4N6)HA基因与A/duck/Siberia/1701/1996(H4N6)的核苷酸同源性最高(97.5%),推导的氨基酸剪切位点序列为PEKASR,为典型低致病性禽流感病毒的特征序列;神经氨酸酶(NA)、非结构蛋白(NS)均没有氨基酸缺失;基质蛋白2(M2)与宿主特异性有关的位点及碱性聚合酶2(PB2)的627位都是亲禽类细胞的氨基酸;M基因与家鸭分离株A/duck/Yangzhou/02/2005(H8N4)的核苷酸同源性为99.4%,PA基因与家鸭分离株A/duck/Jiangxi/1286/2005(H5N2)的核苷酸同源性达98.9%,说明这2个基因已经在家鸭体内存在并参与了基因重排。
- 彭宜薛峰李彦芳陈浩彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒全基因组序列
- HA基因322位和329位氨基酸对H5N1亚型禽流感病毒毒力的影响被引量：7
- 2008年
- A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=0),是对麻鸭具有不同致病力的病毒。两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区322是Leu(L322),329位缺失(-329),而Y病毒322位是Gln(Q322),329位是Lys(K329)。根据这两个位点的差异,利用反向遗传系统,以S和Y病毒各自为骨架,拯救HA基因突变病毒,检测获救的突变病毒对麻鸭的毒力。可以得知,以S病毒为骨架,将S病毒HA基因322位Leu替换为Gln和(或)在329位添加Lys,以及用Y病毒的HA(Q322L,K329-)替换S病毒HA,获救的重组病毒对麻鸭亦完全无致病力;但以Y病毒为骨架,将Y病毒HA基因322位Gln替换为Leu和(或)在329位缺失Lys后,Y重组病毒对麻鸭的毒力上升。结果提示,S和Y病毒HA基因裂解位点区322和329氨基酸残基突变或缺失均影响病毒对麻鸭的致病力,且HA基因与其它基因的匹配性显著影响病毒对麻鸭的致病力。
- 唐应华吴培培孙庆彭大新张文俊李彦芳汪文斌龙进学张评浒刘秀梵
- 关键词：H5N1HA基因麻鸭致病力
- H5N1亚型禽流感病毒基因重排后毒力的变化被引量：3
- 2008年
- 【目的】为了探讨高致病性禽流感病毒对水禽致病性差异的分子致病机理。【方法】我们对从野鸭分离到的H5N1亚型禽流感病毒的生物学特性进行鉴定,其中A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)是对麻鸭无致病性病毒,而A/mallard/Huadong/S/2005(S)是对麻鸭高致病性病毒。利用反向遗传技术构建一系列单个和多个基因组合替换基因重排病毒,并验证重排病毒在麻鸭上的致病力。【结果】研究表明,PB2,PB1,PA(3P),HA单基因以及3P基因组合替换的使S病毒对麻鸭的毒力完全致弱,但相应的基因替换后仅使Y病毒对麻鸭的毒力略有上升。两病毒的其它基因对毒力影响较小。【结论】H5N1亚型禽流感病毒对麻鸭的致病力受多基因调控,且这种调控作用在不同病毒骨架上的影响不一致,强毒受影响程度远比弱毒的大。
- 唐应华吴培培彭大新龙进学张评浒张文俊李彦芳汪文斌刘秀梵
- 关键词：H5N1致病力麻鸭
- 鸭源H5N1亚型禽流感疫苗候选株的构建
- 2009年
- H5N1亚型clade 2.3.4为我国南方地区的优势毒株。A/mallard/Huadong/S/2005(S)病毒在遗传进化上属于clade 2.3.4,而A/mallard/Huadong/Y/2003(Y)病毒属于clade 2。通过删除S病毒和Y病毒的HA多碱性氨基酸序列,S病毒由PLRERRRKRGL改变为PLREGRGL,Y病毒由PQR-ERRKKRGL改变为PQREGRGL,使之成为低致病性特征的HA基因。将S病毒和Y病毒的NA基因和突变的HA基因分别组合,由A/Puerto Rico/8/34(PR8)病毒提供6个内部基因,进行拯救,共获得4个致弱病毒(SS,SY,YS,YY)。这4个致弱病毒对SPF鸡的静脉内致病指数(IVPI)为0,对10日龄SPF鸡胚无致病性。SS、SY、YS、YY病毒第10代鸡胚尿囊液的HA效价分别为9、11、111、1 lb。
- 唐应华吴培培彭大新张文俊李彦芳汪文斌刘秀梵
- 关键词：H5N1
- H5N1亚型禽流感病毒进化的研究进展被引量：2
- 2013年
- H5N1亚型禽流感病毒是重要的人兽共患病病原,其基因组为分节段的负股单链RNA,这种特殊的基因组结构使得流感病毒的进化机制跟其他病毒有所不同。本文对流感病毒的进化机制、H5N1亚型禽流感病毒的进化规律和生物信息学在流感病毒进化中应用等方面的研究进展予以综述。
- 李彦芳彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒H5N1亚型进化生物信息学
- 全球H5N1亚型流感病毒NA和NS基因进化趋势
- 2014年
- 为了探讨全球H5N1亚型流感病毒(IV)NA和NS基因的分子流行病学特点,本文从NCBI下载1996-2013年全球H5N1 IV的NA、NS基因序列并进行进化分析。结果显示NA和NS双基因部分缺失株在H5N1亚型IV中占有绝对的优势,NA和NS基因部分缺失能显著影响毒株间的遗传距离,2010年后分离的H5N1亚型IV的NA基因优势流行基因型是Group-6 like,NS基因优势流行基因型为Group-2 like。
- 李彦芳张治业宋庆庆顾敏陈素娟彭大新刘秀梵
- 关键词：H5N1亚型流感病毒NA基因NS基因
- 2006--2008年华东地区家禽不同HA亚型低致病性禽流感的病原学监测被引量：26
- 2009年
- 目的采用血清学试验和RT-PCR方法在2006-2008年5月期间从华东地区家禽中分离到473株禽流感病毒(AIVs),其中家鸭AIVs的分离率最高(14.7%),鸡AIVs分离率最低(2.92%)。共分离到H1、H3、H4、H6、H9、H10、H11七种HA亚型低致病性禽流感病毒(LPAIVs),其中H3亚型LPAIVs在家禽中的分布占优势。禽流感病毒的分离呈现一定的季节性,一般春秋冬三个季节分离率相对较高。
- 彭宜张伟薛峰汪文斌李彦芳孟春春张文俊刘秀梵
- 关键词：低致病性禽流感病毒分离率
- H5N1亚型禽流感病毒HA糖基化位点缺失突变株的构建及生物学特性被引量：4
- 2013年
- 不同H5亚型禽流感(AIV)HA上糖基化位点的分布是不同的,然而不同糖基化位点对病毒的作用仍不十分清楚。本研究利用定点突变和反向遗传操作构建了3个不同糖基化位点单缺失突变病毒,并对其增殖特性和毒力进行了测定。结果表明,通过HA基因序列测定和免疫印迹分析证实已成功去除了特定糖基化位点。158位糖基化位点缺失突变株rS△158在鸡胚中的EID50和MDCK细胞上TCID50比野生型rS略低,空斑直径显著减小;而单独去除169位和290位糖基化位点的rS△169和rS△290的EID50和TCID50略高于野生型rS,空斑直径相近,但空斑数要比后者高出10倍以上。所有突变株及野生型病毒在CEF上增殖速率相同,对SPF鸡均是高致病性的。因此,糖基化位点可影响病毒的体外增殖,但结果因细胞而异。
- 张晓剑李彦芳熊丽平陈素娟彭大新刘秀梵
- 关键词：H5N1亚型禽流感HA
- 4株野鸭源H5N1亚型禽流感病毒的全基因组鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的为了解H5N1病毒对基因进化情况,方法对4株野鸭源的H5N1禽流感病毒(A/mallard/Huadong/S/2005(S),A/mallard/Huadong/lk/2005(lk),A/mallard/Huadong/Y/2003(Y),A/mallard/Huadong/hn/2005(hn))进行全基因组测序分析,并鉴定对非免疫麻鸭的毒力。结果4株病毒全基因组序列及其氨基酸序列无明显差异,仅在HA裂解位点区,S和lk病毒的322位是Leu,329位缺失,而Y和hn在此两处分别是Gln和Lys。在遗传距离上,Y和hn比较接近,S与lk比较接近。结论根据H5亚型病毒最新分类规则,S和lk的与clade 2.3.4一致,而Y属于clade 2,hn位于clade 3。对麻鸭致病性试验表明,Y和hn是低致病性病毒,而S及lk是高致病性病毒。HA的322位的Leu和329位缺失可能是clade 2.3.4这类病毒的一个遗传进化标志。
- 唐应华吴培培彭大新张评浒龙进学张文俊李彦芳刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒野鸭遗传进化
