李光富
- 作品数：30 被引量：116H指数：8
- 供职机构：南京医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划江苏省重点学科建设基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- Affymetrix基因芯片技术分析尖锐湿疣患者皮损局部免疫状态的研究被引量：2
- 2007年
- 目的探讨尖锐湿疣(CA)患者局部免疫状态,分析局部Th1/Th2的变化。方法采用Affymetrix基因芯片技术分析CA皮损局部多个细胞因子和抗体变化,并用Real-timeQ-PCR验证部分结果。结果CA皮损局部Th1细胞因子IFN-γ,IL-12,TNF-α较正常包皮明显降低,Th2细胞因子IL-4,IL-10较正常包皮升高,IL-6降低,IL-2,IL-5,IL-13无明显变化;sIgA,IgA,IgG,IgM较正常包皮高。结论CA患者局部Th1/Th2细胞失衡,Th细胞向Th2极化,CA局部处于Th2优势应答状态。
- 王飞相文中毕志刚李光富刘丰张兆松
- 关键词：尖锐湿疣基因芯片人乳头瘤病毒免疫
- 日本血吸虫副肌球蛋白T细胞表位的预测和鉴定被引量：8
- 2004年
- 目的鉴定日本血吸虫副肌球蛋白的T细胞表位。方法用SYFPEITHI软件预测日本血吸虫(中国大陆株)副肌球蛋白的T细胞表位,候选表位分别命名为P20、P21、P22、P23、P24。设计并合成候选表位的编码核苷酸,定向克隆入融合表达载体pET-32c(+),经酶切及测序鉴定出重组克隆。阳性克隆经IPTG诱导表达,表达产物以Ni2+-NTA柱亲和层析及透析纯化。纯化后的硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白体外刺激C3H/HeJ及C57BL/6小鼠腹股沟淋巴结或脾脏单个核细胞,3H-TdR掺入法检测其增殖。结果候选表位中P20、P21、P22、P23能有效刺激C3H鼠致敏淋巴细胞细胞增殖,P20、P22能刺激C57鼠致敏淋巴细胞增殖。结论P20和P22可能是日本血吸虫副肌球蛋白的通用性T细胞表位。
- 王新军张兆松王勇吴海玮张蕾李光富季旻珺朱翔蔡晓萍刘丰苏川吴观陵
- 关键词：日本血吸虫副肌球蛋白表位
- Sj28GST基因克隆和高效表达产物的纯化被引量：4
- 2004年
- 目的 从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中克隆 2 8kDa谷胱甘肽 -S -转移酶 (Sj2 8GST)基因 ,获得用于疫苗和T细胞表位研究的高纯度重组融合蛋白 2 8GST -TRX。方法 应用引物特异性PCR技术 ,从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中扩增Sj2 8GST基因 ,经琼脂糖凝胶电泳结合碱基序列分析鉴定后 ,采用定向克隆技术构建Sj2 8GST -TRX融合蛋白重组表达载体并诱导其在大肠杆菌BL2 1(DE3)的表达 ,用Western -blotting测定以融合蛋白方式表达的Sj2 8GST的免疫原性 ,通过包涵体纯化结合Ni+柱亲和层析获得高纯度重组融合蛋白。结果 Sj2 8GSTPCR产物为约 6 4 0bp ,其碱基序列 (6 33bp)和推导的氨基酸序列 (2 11aa)与GenBank报道一致 ;获得了Sj2 8GST -TRX重组质粒 ;2 8GST -TRX融合蛋白在大肠杆菌以包涵体形式高效表达 ;在分子量为约 4 3kDa处有一能与羊抗Sj2 8GST抗体产生特异性反应的含 2 8GST融合蛋白条带 ;包涵体纯化法结合Ni+ 亲和层析可获得高纯度的重组融合蛋白。结论 获得到了日本血吸虫中国大陆株 2 8GST分子的全长基因和高纯度重组 2 8GST -TRX融合蛋白 ,该融合蛋白具有天然Sj2 8GST免疫原性。
- 李光富张兆松王新军李春玲王勇季旻刘丰蔡晓萍朱翔
- 关键词：基因克隆纯化日本血吸虫
- 马立克氏病病毒核酸探针的研究 Ⅰ、Digoxigenin标记的马立克氏病病毒核酸探针的制备与应用 Ⅱ、MDV-L片段的亚克隆及部分序列分析
- 李光富
- 日本血吸虫病疫苗的免疫学与生物学基础研究
- 苏川季旻珺刘丰张兆松吴观陵张蕾陶芳芳胡雪梅吴海玮王勇李光富赵巍
- 血吸虫病(schistosomiasis)是一个严重的全球性公共卫生问题，在非洲、中东、南美洲和东南亚流行地区，有超过2亿人口被感染，近6亿人口受到共计6种血吸虫感染的威胁，估计每年至少2万人死于血吸虫病。在中国流行的是...
- 关键词：
- 关键词：血吸虫病生物制剂
- 人乳头瘤病毒11型E7蛋白基因重组腺病毒载体的构建及表达被引量：4
- 2005年
- 目的构建人乳头瘤病毒11型(HPV11)E7蛋白基因腺病毒载体,并在真核细胞表达。方法用PCR法,扩增出HPV11E7基因,定向克隆至pENTR-TOPO载体形成重组质粒TOPO-E7。TOPO-E7与腺病毒载体pAD/CMV/V5-DESTTM重组反应,E7基因被重组到腺病毒载体上。该载体经PacI酶切,脂质体法转染人胚肾293A细胞,获得重组腺病毒载体pAD-E7。pAD-E7转染人HaCaT细胞,激光共聚焦显微镜分析E7蛋白表达情况。结果经酶切及序列分析鉴定,重组质粒TOPO-E7成功构建。重组子pAD-E7转染293A细胞后,获得滴度为1.4×107pfu/mL的重组腺病毒载体。该载体转染HaCaT细胞,48h后激光共聚焦显微镜下可见细胞内E7蛋白表达。结论重组腺病毒载体能有效介导HPV11E7基因在真核细胞的表达。
- 王飞毕志刚李光富吴海玮王群刘丰王新军张兆松
- 关键词：人乳头瘤病毒11型基因重组腺病毒载体HPV11真核细胞表达脂质体法人胚肾
- 人乳头瘤病毒11型E7蛋白基因的克隆和表达被引量：2
- 2004年
- 目的从尖锐湿疣皮损标本中扩增出人乳头瘤病毒11型(HPV11)E7蛋白基因,并进行表达、纯化和鉴定。方法用PCR法,从尖锐湿疣标本中扩增出HPV11E7蛋白基因,与pGEX-6P-1载体连接成重组表达质粒pGEX-6P-1/E7;重组质粒转入BL21大肠杆菌,经诱导表达融合蛋白GST-E7;该蛋白经剪刀酶切除GST,GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化,SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测鉴定。结果经酶切及序列分析鉴定,重组质粒pGEX-6P-1/E7成功构建,诱导后高表达GST-E7融合蛋白并得到纯化,蛋白质印迹证实表达蛋白为E7蛋白。结论获得高表达、高纯度的HPV11E7蛋白,为该蛋白的功能及免疫学分析及尖锐湿疣疫苗研究打下了基础。
- 王飞毕志刚王群李光富王新军张兆松
- 关键词：人乳头瘤病毒11型基因克隆基因表达人乳头瘤病毒感染尖锐湿疣
- 干扰素-γ对感染日本血吸虫小鼠GTP酶表达的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 探讨干扰素 γ(IFN γ)对小鼠抗日本血吸虫感染保护力的机制。 方法 采用高密度寡核苷酸芯片 (Affymetrix芯片 )结合半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR )方法 ,对BALB/c小鼠感染日本血吸虫过程中脾脏CD4+ T细胞进行基因转录水平分析 ,获得IFN γ诱导鸟苷三磷酸 (GTP)酶家族成员的变化图谱 ;并对其中IFN γ诱导GTP酶 (IGTP)进行分子克隆和序列测定。 结果 小鼠自然感染日本血吸虫过程中 ,IFN γ诱导GTP酶家族成员的基因表达呈现特征性变化 ,感染后 3wk ,基因表达上调或变化不显著 ;感染后 6wk至 13wk ,基因表达持续受到抑制。这种变化特征经RT PCR方法所证实。从小鼠脾脏可扩增出IGTP全长基因 ,但退火温度降低时出现IGTP基因转录缺失。 结论 小鼠急性感染日本血吸虫后 ,体内IFN γ通路逐步受到抑制 ,针对血吸虫感染的依赖IFN
- 季旻珺蔡晓萍苏川吴海玮李光富王勇朱翔王新军张兆松吴观陵
- 关键词：干扰素-Γ日本血吸虫病小鼠GTP酶
- 桥粒芯胶蛋白3前导肽基因的克隆和原核表达
- 2004年
- 目的 :克隆人桥粒芯胶蛋白 3前导肽 (Dc3p)基因 ,并进行表达、纯化和鉴定。方法 :用PCR法从桥粒芯胶蛋白 (Dc)cD NA文库中扩增出Dc3p基因 ,与pGEX 4T 2载体连接成重组表达质粒pGEX 4T 2 Dc3p ;重组质粒转入BL2 1大肠杆菌 ,经诱导表达谷胱甘肽S 转移酶 Dc3p(GST Dc3p)融合蛋白 ,该蛋白经GlutathioneSepharose 4B亲和层析柱纯化 ,SDS PAGE和免疫印迹法检测鉴定。结果 :经酶切及序列分析鉴定 ,重组质粒pGEX 4T 2 Dc3p成功构建 ,诱导后高表达GST Dc3p融合蛋白并得到纯化 ,免疫印迹法证实表达蛋白为GST Dc3p。结论 :获得高表达、高纯度的GST Dc3p融合蛋白 ,为Dc3p的功能及免疫学分析打下基础。
- 王飞潘永正李光富David R. Garrod
- 关键词：基因克隆基因表达免疫印迹法
- HPV-11 E7重组腺病毒体外转染树突细胞对其功能的影响
- 2007年
- 目的研究腺病毒载体介导HPV-11 E7基因转染树突细胞（DC）对其表型和功能的影响。方法用最佳感染滴度（MOI）重组腺病毒pAD—E7转染成熟DC，流式细胞仪检测转染前后DC表型变化,并用^3H—TdR掺入法检测转染前后DC刺激同种淋巴细胞增殖的能力及ELISA检测DC、T细胞共同培养上清中细胞因子的水平。结果MOI100为pAD—E7转染DC最佳滴度，pAD—E7转染成熟DC前后对细胞表面的特征性表型CD1a、CD83及CD40、HLA—DR无影响，转染后的DC仍具有较强的刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力，能刺激T细胞分泌大量IFN-γ、IL-12。结论pAD—E7转染成熟DC对其功能无明显影响．转染后的DC与T细胞共孵育能诱导T细胞向Th1细胞极化。
- 王飞相文忠毕志刚李光富刘丰吴海玮张兆松
- 关键词：尖锐湿疣乳头状瘤病毒树突细胞
