时宿妹
- 作品数：4 被引量：18H指数：2
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 过表达Runx2促进C2C12细胞成骨分化被引量：5
- 2010年
- 利用Tet-on(Tetracycline-on)基因表达系统,通过强力霉素(doxycycline,DOX)诱导Runx2基因在C2C12细胞中的表达,探究Runx2促成骨分化功能,为其分子机制的研究提供一个理想的实验平台.先后将调控质粒pTet-on和反应质粒pTRE-Flag-Runx2转染入C2C12细胞,并用G418和潮霉素分别进行2轮筛选,运用实时荧光定量PCR选择对强力霉素诱导敏感的细胞克隆.用不同浓度DOX诱导C2C12/Tet/pTRE-Flag-Runx2细胞,蛋白免疫印迹检测Runx2的表达,确定DOX的最佳诱导浓度与时间,并检测C2C12细胞的成骨分化能力.结果表明,诱导细胞最佳DOX浓度为10μg/ml;最佳诱导时间为12h;诱导后Runx2基因高表达,C2C12细胞向成骨方向分化(P<0.05).成功建立Tet调控Runx2基因表达C2C12细胞系,为进一步研究Runx2基因功能分子机制提供理想的细胞模型.
- 李萍余守和陈迪高忠平申健时宿妹孙奋勇
- 关键词：RUNX2C2C12细胞成骨分化
- 人血小板源性生长因子受体β启动子的结构与功能分析被引量：2
- 2010年
- 通过PCR扩增人血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)基因启动子片段,经双酶切后克隆到pGL3-basic载体构建了5个PDGFR-β基因启动子5′系列缺失重组载体,与作为内参的pRL-TK共转染人脐静脉内皮细胞(ECV304,HUVEC)后,通过荧光素酶活性检测鉴定出人PDGFR-β启动子中具有转录调控作用的2个活性区(-983～+53)和(+540～+1457),前者执行正调控,后者则起负调控作用.这2个转录活性区分别含有在人、大鼠、小鼠PDGFR-β基因启动子区都高度保守的区域A-box、B-box和C-box,凝胶迁移或电泳迁移率检测(EMSA)证实,核因子能与B-box*、C-box*特异结合.
- 张传宇孙奋勇时宿妹马纪谢秋玲
- 关键词：人脐静脉内皮细胞启动子血管生成
- 2种微小RNA实时定量PCR检测方法的比较被引量：11
- 2010年
- 目的:对目前最常用的检测微小RNA(miRNA)的茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法进行比较。方法:分别用茎环实时定量PCR法和PAP实时定量PCR法检测人乳腺癌细胞MCF-7中U6和23种miRNA的表达,利用定量PCR分析软件和琼脂糖凝胶电泳方法,将2种方法在引物设计难度、特异性与灵敏度,以及检测通量方面进行比较。结果:茎环法的特异性和灵敏度比PAP法高,但引物设计难度大,检测通量低;PAP法引物设计难度较低,检测通量较高,但特异性和灵敏度较差。结论:茎环法实时定量PCR适于有针对性地检测小规模miRNA,而PAP法则适于大规模miRNA筛选实验。
- 时宿妹张越张传宇孙奋勇
- 关键词：微小RNA
- 基于Tet-on系统的Osterix调控表达模型的构建和功能鉴定
- 目的：利用Tet-on真核表达系统,建立DOX诱导可调控表达Osterix小鼠前成肌细胞C2C12株,并探究成骨相关转录因子Osterix的生物学功能并为进一步研究Osterix的下游基因提供有效的细胞模型。方法：PCR...
- 时宿妹
- 关键词：OSTERIX
- 文献传递
