张金龙
- 作品数：28 被引量：22H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 特异靶向AML1-ETO+细胞的渗透肽的表达纯化与筛选
- 细胞渗透肽(cell penetrating proteins,CPP)是一类由5～30个氨基酸组成的短肽,具有特殊的细胞膜穿透作用。研究发现其能够将药物大分子物质转运到细胞内,在细胞生物学和细胞免疫学,尤其是在药物开发...
- 赵陶然董韵竹张金龙吴诗坡侯利华赵兴卉徐俊杰陈薇
- 关键词：AML1-ETO白血病蛋白表达
- 文献传递
- 人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选被引量：3
- 2013年
- 目的构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv)。方法利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重叠PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段。将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库。以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体。scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性。采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值)。检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率。结果构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体。原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40%～45%。包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1 L培养物经纯化后可获得4～6 mg scFv蛋白。亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L。3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5%,58.6%和51.5%。结论人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：破伤风破伤风毒素单链抗体逆转录聚合酶链反应细菌噬菌体
- 利用SEC-HPLC测定鼠神经生长因子的纯度被引量：1
- 2013年
- 目的：建立检测鼠神经生长因子（mNGF）纯度的分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）。方法：利用TSK G3000 SWXL分析柱和Waters 2695/2487高效液相色谱系统检测mNGF标准品纯度，并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测限及耐用性等指标进行评估。结果：空白溶剂在mNGF积分范围内无特异峰出现；样品浓度与吸收峰之间线性回归系数R2=0.9998；6次进样峰面积相对标准偏差（RSD）为1.18%；中间精密度分析RSD为0.45%；检测限为0.2μg；耐用性实验表明磷酸盐浓度在0.2~0.3 mol/L之间变动对检测结果无影响。结论：各项指标符合规定，SEC-HPLC法可用于检测mNGF的纯度。
- 张金龙任军付玲宋晓红陈俭勤吕鹏侯利华
- 关键词：鼠神经生长因子纯度
- 重组人透明质酸酶促皮下注射扩散研究被引量：1
- 2017年
- 目的:探究重组人透明质酸酶(rHuPH20)促皮下注射药物的扩散能力,解决皮下快速给药和大体量给药难题。方法:以台盼蓝模拟联用药物作为可视化示踪剂,研究rHuPH20对皮下注射药物扩散速率的影响;用生理盐水造新西兰兔水肿模型,研究rHuPH20对皮下注射输液量的影响。结果:rHuPH20可极大地增加皮下注射药物的扩散速率和输液量。结论:rHuPH20作为扩散剂使用,可弥补传统皮下注射微小输液量的缺陷,满足皮下注射不同输液量的需求,在替代药物静脉输液方面具有潜在应用价值。
- 姜廷杨伟张金龙吕鹏侯利华陈薇
- 关键词：透明质酸透明质酸酶
- 一种以人复制缺陷腺病毒为载体的埃博拉病毒病疫苗
- 本发明公开了埃博拉病毒GP蛋白密码子优化的一种核苷酸序列，还公开了能够表达该核苷酸序列的人复制缺陷重组腺病毒及在制备预防埃博拉病毒病疫苗中的应用。所述核苷酸序列以E1、E3联合缺失的复制缺陷型人5型腺病毒为载体，以整合腺...
- 陈薇吴诗坡侯利华宋小红张金龙付玲
- 聚乙二醇化重组人干扰素ω偶合物
- 本发明公开了聚乙二醇化重组人干扰素ω偶合物及其制备工艺，相比未修饰的人干扰素ω，在人体内具有更长的半衰期，能够明显减少用药次数，降低毒副作用，特别适合于治疗对干扰素ω敏感的慢性病毒感染，临床上具有广泛的应用前景。
- 陈薇李建民侯利华付玲李冰徐春娥张金龙任军
- 文献传递
- 一种可在大肠杆菌可溶性高表达的白喉毒素突变体
- 本发明公开了一种核苷酸序列得到优化的白喉毒素突变体CRM197编码序列，合成后的编码序列经双酶切后连接入表达载体pET32a(+)中，并在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性高表达的重组CRM197。通过本发明制备的...
- 陈薇于蕊徐俊杰候利华于长明李建民付玲房婷张金龙宋小红刘树玲杨秀旭
- 人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达被引量：3
- 2013年
- 目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%。复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强。27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合。结论成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：原核表达
- 一种重组蛋白质的纯化方法
- 本发明公开了一种来源于CHO细胞的重组人透明质酸酶的纯化方法，所述方法包括如下步骤：将含有重组人透明质酸酶的CHO细胞培养液通过微滤澄清、超滤浓缩换液后，依次经过高流速季铵琼脂糖凝胶阴离子层析柱、高效苯基交联琼脂糖凝胶层...
- 陈薇侯利华张金龙杨伟吕鹏宋小红
- 文献传递
- 一种抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体，以及所述抗体在制备鼠疫治疗药物中的应用。本发明公开的抗体具有特异的抗原结合性、低免疫原性以及良好的动物保护功能。
- 陈薇李建民张金龙任军李冰宋小红于婷刘树玲
- 文献传递
