张海滨
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“985工程”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人CTLA4Ig腺病毒载体的构建及其生物学功能研究被引量：4
- 2003年
- 目的:通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体,研究其生物学活性,并用于基因治疗诱导心脏移植耐受。方法:通过基因重组技术,将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中。然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组,经过293细胞包装,构建CTLA4Ig腺病毒载体。用RT-PcR、SDS-PAGE及Western blot等技术,检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌,通过体外实验,观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制作用。通过大鼠体内实验,检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后,CTLA4Ig在体内的表达。结果:CTLA4Ig腺病毒载体构建成功。体外实验证实,CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液,能够抑制异基因脾细胞的单向MLR。体内实验表明,经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体,能够诱导移植耐受,延长心脏移植物的存活。结论:构建的CTLA4Ig腺病毒载体,体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白。该蛋白可抑制T细胞的活化,CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受。
- 张庆殷金永柱谢蜀生张海滨
- 关键词：腺病毒载体生物学功能移植耐受
- 供体脾细胞输注增强CTLA4Ig致小鼠皮肤移植耐受的研究
- 2002年
- 目的 :研究联合应用供者特异性脾细胞输注 (donor specific spleen cell transfusion ,DST)与CTLA4Ig对促进小鼠皮肤移植物存活的作用。探索CTLA4Ig促进移植物存活的作用机制。方法 :单独或联合应用CTLA4Ig及供者特异性脾细胞输注 ,同时行皮肤移植 ,观察皮肤移植物存活时间并检测受者脾细胞对供者细胞的单向混合淋巴细胞反应。结果 :联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig使小鼠皮肤移植物的存活时间延长 ,并使受者脾细胞对供者细胞的反应性特异性降低 ,与未处理组、单用CTLA4Ig或供者特异性脾细胞输注处理组相比有显著性差异 (P <0 0 1 )。结论 :联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig可促进皮肤移植物的存活。
- 张海滨肖序仁张庆殷谢蜀生
- 关键词：供体脾细胞输注皮肤移植移植免疫学
- 腺病毒介导的CD40Ig基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植物的长期存活被引量：1
- 2003年
- 目的:通过腺病毒介导的CD40Ig基因治疗,阻断受体体内CD40/CD154共刺激途径,诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制。在将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠后,即经门静脉输注携带CD40Ig基因的腺病毒(AdCD40Ig,5×109 pfu)。观察、记录心脏移植物的存活时间。ELISA检测受体大鼠体内CD40Ig蛋白的表达。通过MLR,IL-2逆转实验及Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制。结果:与未处理对照组相比,携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdEGFP)给予组,移植物的存活时间未见明显延长;AdCD40Ig腺病毒给予组,异基因大鼠心脏移植物平均存活时间延长至(142.8±26.8)天。ELISA检测表明,CD40Ig蛋白在受体体内表达时间较长,但随时间的推移表达水平逐渐下降。Th1和Th2型细胞因子的检测结果显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子偏移的现象。MLR证明耐受大鼠对供体抗原表现为特异性低应答。IL-2逆转实验表明,该耐受形成的早期与克隆无能有关。结论:经.AdCD40Ig腺病毒基因治疗的受体大鼠可以产生特异性的移植耐受,使异基因大鼠心脏移植物长期存活。
- 金永柱张庆殷张海滨谢蜀生
- 关键词：心脏移植移植耐受腺病毒载体
- 供体骨髓细胞促进大鼠心脏移植耐受及机制的研究
- 2002年
- 经门静脉给予受体LEW大鼠3×108个DA大鼠供体脾细胞,2 d后腹腔注射80 mg/kg的环磷酰胺,第4天由舌静脉输注1×108骨髓细胞.2周后实施心脏移植手术.观察、记录移植物的存活时间,通过过继性转移实验,MLR、CTL活性测定及嵌合体分析,探讨耐受机制.结果表明,异基因心脏移植物的存活时间进一步延长;该耐受状态可被过继性转移;MLR、CTL活性表明,受体大鼠的免疫应答被特异性抑制;嵌合体水平提高.结论:异基因骨髓细胞输注可加深由脾细胞和环磷酰胺诱导的大鼠心脏移植耐受,该耐受与嵌合体水平、抑制细胞的存在有关.输注骨髓细胞对于改善、维持耐受状态,延长大鼠心脏移植物存活时间是一有效的方法.
- 张庆殷郝洁蒋激扬张海滨谢蜀生
- 关键词：移植耐受骨髓细胞脾细胞心脏移植
- CTLA-4 Ig腺病毒基因治疗联合供体细胞输注诱导混合嵌合体和大鼠心脏移植耐受被引量：6
- 2003年
- 目的 在心脏移植手术中实施CTLA 4Ig腺病毒基因治疗并联合术后输注供体骨髓细胞 ,诱导异基因大鼠心脏移植耐受 ,并对相关机制进行研究。方法 将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠 ,同时经门静脉输注供体DA的脾细胞 (SC ,3× 10 8)、CTLA 4Ig腺病毒 [( 1～ 5 )× 10 9PFU ml],第 4天由舌静脉输注DA的骨髓细胞 (BMC ,3× 10 8)。观察、记录心脏移植物的存活时间。并对皮肤移植的受体作同样处理 ,观察皮肤移植存活情况。通过MLR、IL 2逆转实验及嵌合体的测定 ,探讨耐受机理 ,并检测了CTLA 4Ig的体内表达、TH1 TH2型细胞因子的表达。结果 单用CTLA 4Ig腺病毒基因治疗 ,或CTLA 4Ig腺病毒基因治疗联合单独的供体脾细胞或骨髓细胞能不同程度地延长异基因心脏移植物的存活 ,但不能延长皮肤移植物的存活。脾细胞、CTLA 4Ig腺病毒和骨髓细胞(SC Ad BMC)处理组的心脏移植物存活时间明显超过其它各耐受诱导组 ,并且能够诱导皮肤耐受。RT PCR实验证明 ,在受体内不同的组织CTLA 4Ig基因的表达量有所不同 ,并且随着时间的推移表达下降。TH1和TH2型细胞因子的检测显示 ,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象。MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性降低 ,IL 2逆转实验、嵌合体检测表明 ,该耐受可能与?
- 张庆殷金永柱张海滨谢蜀生
- 关键词：混合嵌合体心脏移植移植耐受
- CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植耐受
- 2002年
- 目的 :通过CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受 ,并探讨相关机制。 方法 :将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠 ,同时经门静脉输注CTLA4Ig腺病毒 (1× 10 9～ 5× 10 9pfu·ml-1)。通过RT PCR检测CTLA4Ig的体内表达 ,观察记录心脏移植物的存活时间 ,通过MLR、IL 2逆转实验 ,Th1/Th2型细胞因子表达的检测 ,研究耐受的机制。结果 :用LacZ腺病毒载体 (AdLacZ)治疗组 ,不能延长移植物的存活 ,用CTLA4Ig腺病毒基因治疗组 ,DA大鼠的心脏移植物明显延长。RT PCR实验证明 ,CTLA4Ig基因在受体内不同的组织表达量有所不同 ,并且随着时间的推移表达下降。Th1和Th2型细胞因子的检测显示 ,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象。MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性 ,IL 2逆转实验表明 ,该耐受与克隆失活有关。结论 :在手术中给予CTLA4Ig腺病毒进行基因治疗 ,可诱导异基因大鼠间的心脏移植耐受 ,延长心脏移植物存活 ,该移植耐受表现为供体特异性 ,其形成与克隆失活有关 。
- 张庆殷金永柱张海滨谢蜀生
- 关键词：移植耐受CTLA4IG腺病毒载体心脏移植病毒
