宋晓伟
- 作品数：29 被引量：40H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 建立BioID-质谱联用技术筛选细胞内蛋白质相互作用
- 2021年
- 目的通过BioID-质谱联用技术建立一种新的蛋白质相互作用的筛选系统,并采用免疫共沉淀-蛋白质印迹法验证与Yes相关蛋白1(YAP1)相互作用的蛋白质。方法构建YAP1-BirA*融合表达质粒,将质粒转染进293T细胞后,在细胞培养基中加入50μmol/L生物素,继续培养24 h后提取细胞总蛋白质。利用YAP1特异抗体,采用蛋白质印迹法检测YAP1-BirA*融合蛋白的表达。利用HRP偶联的亲和素检测细胞内蛋白质被生物素标记的水平。通过亲和素磁珠对细胞内生物素化的蛋白质进行亲和纯化,多次洗涤去除亲和素磁珠上非特异性结合的蛋白质后对亲和素磁珠纯化的蛋白质进行溶解。取40μg总蛋白行SDS-PAGE,然后采用蛋白质银染试剂盒对凝胶中的蛋白质进行染色,确定亲和素磁珠对生物素化蛋白的纯化效果。用非标记定量质谱法鉴定生物素化的蛋白质。针对鉴定得到的蛋白质,采用蛋白质印迹法对生物素化的SMAD家族成员3(SMAD3)进行验证。通过YAP1的免疫共沉淀-蛋白质印迹法确定SMAD3能否与YAP1相互作用。结果成功构建YAP1-BirA*融合表达质粒,该质粒在293T细胞中能够高效表达融合蛋白。在生物素存在的情况下,YAP1-BirA*融合蛋白能够利用生物素标记细胞内与YAP1-BirA*融合蛋白邻近的蛋白质。在细胞裂解后,这些在细胞内被生物素标记的蛋白质能够被偶联亲和素的磁珠纯化,经过多次洗涤,能够富集生物素标记的蛋白质。质谱鉴定显示,能够获得细胞内与YAP1在空间上相互靠近的蛋白质。免疫共沉淀-蛋白质印迹法结果证明SMAD3蛋白能与YAP1相互作用。结论BioID-质谱联用方法是一种能用于蛋白质相互作用筛选的简单、高效技术,与免疫共沉淀-蛋白质印迹法联合使用可以成为一种新的蛋白质相互作用研究体系。
- 赵峰唐文栋郭志福吴弘宋晓伟
- 关键词：蛋白质相互作用质谱分析法
- 防治心脏疾病的方法和试剂
- 本发明涉及防治心脏疾病的方法和试剂。公开了一种TWF-1抑制剂的用途，用于制备预防或治疗心脏疾病的组合物；还公开了miR-1的用途，用于制备抑制twf-1基因表达的组合物；还公开了筛选预防或治疗心脏疾病的潜在物质的方法。...
- 荆清李青宋晓伟邹俊
- miR-199a及其抑制剂的应用
- 本发明公开了miR-199a及其类似物在制备治疗心肌缺血损伤药物中的应用，以及miR-199a抑制剂在制备治疗抑制心肌细胞肥大及慢性心衰药物中的应用，并且在此基础上，公开了一种筛选预防或治疗心脏疾病的潜在物质的方法，包括...
- 荆清秦永文宋晓伟袁文俊李青
- 槐定碱对心肌梗死大鼠心功能及心肌细胞超微结构的影响被引量：3
- 2012年
- 目的研究槐定碱对心肌梗死大鼠心功能及心肌细胞超微结构的影响。方法采用结扎冠状动脉左前降支方法制备SD大鼠心肌梗死模型,随机分为模型对照组和槐定碱低、中、高(5、10、20 mg/kg)剂量组,另设假手术组,每组10只。实验结束后测定左室舒张末压(LVEDP),左室内压最大上升、下降速率(±dp/dtmax)和心脏质量指数(HM/BM),用透射电子显微镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构的变化。结果与假手术组相比,模型对照组的±dp/dtmax降低,LVEDP升高,HM/BM升高(P均<0.01);与模型对照组相比,加药各组的±dp/dtmax升高,LVEDP降低,HM/BM降低,除低剂量组-dp/dtmax外,余者与模型对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);电镜结果显示假手术组大鼠心肌细胞肌丝排列整齐,线粒体结构正常。模型对照组大鼠心肌细胞肌丝溶解,线粒体肿胀,嵴模糊不清,有显著的病理学改变;槐定碱低剂量组的肌丝溶解有轻微恢复,中、高剂量组肌丝溶解现象消失,肌丝排列整齐。结论槐定碱能改善心肌梗死大鼠的心功能,减轻心肌细胞超微结构的损伤。
- 路红沈亚峰曹密宋晓伟汤莹杨勇骥
- 关键词：槐定碱心脏功能超微结构
- miR-1在心肌细胞生长中的调节作用被引量：1
- 2010年
- 目的构建并鉴定microRNA-1(miR-1)的腺病毒表达载体,并探讨其在心肌肥厚中的介导作用。方法 PCR扩增含大鼠miR-1前体的DNA片段,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack。pAdTrack经PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组。重组质粒pAd-precusor-miR-1线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到重组腺病毒颗粒Ad-miR-1。Ad-miR-1与Ad-GFP病毒转染培养的乳鼠心肌细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测miR-1的表达效率,并分析心肌细胞表面积及肥厚标志物ANP(Nppa)、β-MHC(myh7)的基因表达变化。结果基因测序及酶切鉴定证实重组Ad-precursor-miR-1腺病毒载体构建成功,腺病毒Ad-miR-1转染心肌细胞后,实时荧光定量PCR方法证实腺病毒Ad-miR-1能够显著提高心肌细胞内miR-1的表达水平,减小心肌细胞表面积及Nppa、myh7的表达。结论利用同源重组方法构建的miR-1腺病毒能够提高心肌细胞内miR-1的表达,抑制心肌细胞生长。
- 许旭东宋晓伟秦永文
- 关键词：心肌细胞腺病毒MICRORNASMIR-1
- MicroRNA在血小板产生和激活中的作用被引量：3
- 2013年
- MicroRNA(miRNA)是调节蛋白表达的小分子非编码RNA在各种生理和病理过程中发挥重要作用。最近研究表明,大量的miRNAs如miR-150、miR-155、miR-146a、miR-27a等,在巨核细胞细胞核的分化成熟、巨核细胞胞浆内颗粒脱落形成血小板、血小板成熟并具有活性的过程中发挥重要作用。由于血小板中也具有功能完整的miRNA调控机制,因此某些miRNA在血小板的表达水平与血小板特异性激动以及病理状态的反应性相协调。该文对miRNA在巨核细胞分化和血小板功能中的研究进行概述。
- 丁雪燕宋晓伟荆清秦永文
- 关键词：MICRORNA巨核细胞血小板
- 斑马鱼在血小板研究中的应用被引量：1
- 2013年
- 斑马鱼是心血管生理病理研究中常用的模式生物。斑马鱼血小板与人类血小板具有高度相似性,而且斑马鱼具有体外受精、繁殖力强、胚胎透明等优点,越来越多关于血小板的研究利用斑马鱼作为模式生物,并取得了一定的进展。此文简要概述了斑马鱼血小板与人类血小板的相似性,以及利用斑马鱼作为模式生物研究血小板的一些进展。
- 李国然单冬凯宋晓伟荆清赵仙先
- 关键词：斑马鱼血小板模式生物
- 微小RNA-199a对大鼠心肌肥厚的影响被引量：5
- 2011年
- 目的 探讨微小RNA（miRNA）-199a在心肌肥厚中的作用.方法 （1）Sprague-Dawley （SD）大鼠12只,分为腹主动脉缩窄（abdominal aortic constriction,AAC）组（AAC组,n=6）和假手术组（n=6）.AAC组通过腹主动脉缩窄术建立大鼠心肌肥厚模型.实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测心肌中部分miRNA表达的变化.（2）SD乳鼠心肌细胞分为两组,即miRNA-199a重组腺病毒（Ad-miRNA-199a）组（n=8）和腺病毒载体（Ad-vector）组（n=8）,分别转染SD乳鼠心肌细胞48 h后qRT-PCR检测心肌细胞中miRNA-199a以及心肌肥厚标志分子α肌球蛋白重链（α-myosin heavy chain,αMHC）、β肌球蛋白重链（β-myosin heavy chain,βMHC）、心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）编码基因myh6、myh7、Nppa的表达变化,并利用免疫荧光分析检测细胞表面积的变化.（3）SD乳鼠心肌细胞分为两组,即miRNA-199a的反义寡核苷酸（As-miRNA-199a）组（n=8）和混杂寡核苷酸（As-ctl）组（n=8）,分别转染SD乳鼠心肌细胞48 h后qRT-PCR检测心肌细胞中miRNA-199a的表达变化.（4）SD乳鼠心肌细胞分为4组,即空白对照组（n=8）、苯肾上腺素组（phenylephrine,PE）（n=8）、PE＋As-cd组（n=8）和PE＋As-miRNA-199a绀（n=8）,分别转染SD乳鼠心肌细胞48 h,qRT-PCR检测心肌肥厚标志分子编码基因的表达变化,免疫荧光检测细胞表面积的变化.结果 （1）qRT-PCR结果显示,AAC组大鼠造模后1周miRNA-1、miRNA-133、miRNA-181a及miRNA-499的表达均显著低于假手术组,而miRNA-199a表达显著高于假手术组.（2）qRT-PCR结果显示,AdmiRNA-199a组SD乳鼠心肌细胞中miRNA-199a的表达显著高于Ad-vector组,myh7的表达亦显著高于Ad-vector组,而myh6的表达低于Ad-vector组.免疫荧光显示Ad-miRNA-199a组SD乳鼠心肌细胞的表面积大于Ad-vector组,P〈0.05.（3）qRT-PCR结果显示,As-miRNA-199a组SD乳鼠心肌细胞中miRNA-199a的表达显著低于As-ctl组,P〈0.05.（4）qRT-PCR
- 许旭东宋晓伟荆清秦永文
- 关键词：心肌微RNAS
- 大鼠心肌肥厚过程中microRNAs的表达变化被引量：3
- 2010年
- 目的:分析大鼠心肌肥厚过程中microRNAs(miRNAs)的表达变化。方法:通过肾上腹主动脉缩窄(abdominal aorticconstriction,AAC)的方法建立大鼠心肌肥厚模型。实时定量PCR检测大鼠肥厚心肌中miRNAs的表达变化。结果:大鼠AAC后1周,心重/体重比以及心肌肥厚标志分子心房钠尿肽、β-重链肌球蛋白的编码基因Nppa、myh7表达明显升高,表明心肌肥厚模型建立成功;对肥厚心肌的miRNAs表达检测表明,miR-199a表达显著升高,miR-1、miR-133、miR-181a及miR-499表达显著降低。AAC后4周,miR-21、miR-24和miR-214表达显著升高,miR-181a表达显著降低,miR-23a、miR-133、miR-145、miR-199a和miR-499表达无明显改变。结论:心肌肥厚后miRNAs表达发生改变,可能在心肌肥厚病理过程中发挥着重要的调节作用。
- 许旭东宋晓伟荆清秦永文
- 关键词：MICRORNAS
- miR-1腺病毒载体的构建及表达分析被引量：1
- 2010年
- 目的构建并鉴定microRNA-1(miR-1)的腺病毒表达载体。方法 PCR扩增含大鼠miR-1前体的DNA片断,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack。pAdTrack经PmeI酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组。重组质粒pAdprecusor-miR-1线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到重组腺病毒颗粒Ad-miR-1。Ad-miR-1与Ad-GFP病毒转染培养的乳鼠心肌细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测miR-1的表达效率。结果基因测序及酶切鉴定证实重组Adprecursor-miR-1腺病毒载体构建成功;腺病毒Ad-miR-1转染心肌细胞后,实时荧光定量PCR方法证实腺病毒Ad-miR-1能够显著提高心肌细胞内miR-1的表达水平。结论利用同源重组的方法构建的miR-1腺病毒能够提高心肌细胞内miR-1的表达水平。
- 许旭东宋晓伟李青林丽袁文俊荆清秦永文
- 关键词：心肌细胞腺病毒MICRORNASMIR-1
