孙涛
- 作品数：10 被引量：29H指数：3
- 供职机构：四川农业大学更多>>
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- 一种防治猪细菌性肺炎的中药组合物及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种防治猪细菌性肺炎的中药组合物及其制备方法和应用。该中药组合物包括以下组分：麻黄、杏仁、石膏、黄芪、知母、栀子、滑石、甘草、金银花、连翘、大黄、芒硝、前胡和葛根。本发明通过应用传统制备工艺与现代化制备工艺相...
- 尹念春王印陈斌孙涛冯建国陆富贵杨洪春罗秋继尹攀黄平全
- 鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析被引量：4
- 2008年
- 根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒(DPV)dUTPase基因(GenBank登录号DQ486149)序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a(+)原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU。然后将其转化至E.coliBL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66.8 ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36.2%,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接ELISA效价为1∶409 600。通过免疫荧光技术进行DPV dUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4 h的胞质中检测到特异性荧光,12 h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24 h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48 h胞核和胞质荧光均显著减弱。本研究为DPV dUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。
- 招丽婵程安春汪铭书袁桂萍贾仁勇周登春葛菡孙涛陈孝跃
- 关键词：鸭瘟病毒克隆亚细胞定位
- 鸭瘟病毒UL51基因在感染宿主细胞中的定位和转录特征
- 2010年
- 对鸭瘟病毒(DPV)UL51基因在感染宿主细胞内的定位和转录时相进行分析,为进一步研究该基因的特性和功能提供有用的试验数据和材料。构建pET32a-UL51原核表达载体,将其转化至E.coliBL21(DE3)中进行IPTG诱导表达后,用Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱层析法纯化该表达产物。以纯化的重组蛋白为抗原免疫兔子,制备兔抗UL51多克隆抗血清,通过间接免疫荧光和RT-PCR法检测该基因在DPV感染的鸭胚成纤维细胞(DEF)内的定位和转录情况。间接免疫荧光结果显示,最早可在感染后8h的胞浆中检测到特异性荧光点,24～36h有大量绿色荧光团块聚集于近核区域,之后随着细胞病变的增强,胞浆中的绿色荧光开始减弱,且在感染晚期的胞核中也出现了少量弥散的绿色荧光。RT-PCR结果显示,DPVU L51基因从感染后4h开始转录,其后转录量不断增大,从6～48h一直保持在较高水平,之后又降低。DPVU L51蛋白主要定位于感染的宿主细胞的胞浆中特别是近核区域,与其在α-疱疹病毒中的同源物的定位结果一致;并且与其他几种α-疱疹病毒的转录情况对比后,可认为该基因是一个晚期(γ类)基因。
- 沈婵娟程安春汪铭书文明招丽婵贾仁勇徐超孙涛葛菡周登春余波陈孝跃
- 关键词：鸭瘟病毒原核表达间接免疫荧光RT-PCR
- 鸭瘟病毒UL6基因主要抗原域基因工程重组亚单位疫苗的研制及免疫原性研究
- 将经纯化、复性的鸭瘟病毒UL6基因原核表达蛋白与等量弗氏佐剂混合制备重组蛋白疫苗，免疫7日龄雏鸭，并在免疫后3、5、7、10、14、21、28、35、42、49、56、70、84、98d分别血清检测ELIS A效价，并于...
- 孙涛程安春汪铭书郭宇飞贾仁勇沈婵娟
- 关键词：鸭瘟病毒强毒感染亚单位疫苗免疫原性
- 文献传递
- 壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因在雏鸭体内的抗原表达和分布被引量：3
- 2011年
- 【目的】以DPV gC基因疫苗(pcDNA-DPV-gC)为模型,采用复凝法制备壳聚糖/pcDNA-DPV-gC纳米微球,对其在雏鸭体内的抗原表达和分布进行初步研究。【方法】将壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗以肌注、滴鼻和口服3种途径免疫20日龄雏鸭,于免疫后不同时间点(4h、12h、1d、3d、5d、7d、2 w、4 w、6 w和10 w)分别随机宰杀2只雏鸭,采集肝、脾、肺、肾、胰、脑、胸腺、哈氏腺、法氏囊、食道、十二指肠、盲肠和直肠,应用间接免疫组化检测DPV gC基因在雏鸭体内的抗原表达和分布。【结果】①肌注组免疫雏鸭1 d,肝脏、法氏囊、十二指肠、盲肠和直肠检测到DPV gC蛋白;滴鼻组免疫雏鸭12 h,肺脏出现阳性信号,1 d哈氏腺和法氏囊检测到DPV gC蛋白;口服组免疫雏鸭12 h,食道出现中等强度的阳性信号,1 d法氏囊、十二指肠、盲肠和直肠检测到DPV gC蛋白;②在3种免疫途径中,肝脏、肺脏、法氏囊、哈氏腺、食道、十二指肠、盲肠和直肠是DPV gC抗原表达的主要器官;阳性信号主要在肝细胞、肺上皮细胞、法氏囊和哈氏腺淋巴细胞、食道上皮细胞和肠道粘膜上皮细胞及固有层细胞等部位;③不同免疫途径免疫的壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗在雏鸭体内的抗原表达量和持续时间的总体表达规律为:肌注组>滴鼻组>口服组。【结论】壳聚糖能促进DPV gC基因在雏鸭体内的表达和分布,肌肉注射是壳聚糖/pcDNA-DPV-gC基因疫苗首选的免疫方式。
- 沈福晓蒋金凤程安春汪铭书路立婷贾仁勇朱德康陈孝跃孙涛
- 关键词：壳聚糖抗原表达
- 鸭瘟病毒UL-6基因主要抗原域的原核表达和应用
- 此文对本研究小组发现的鸭瘟病毒/(DPV/)UL6基因/(GenBank登录号EF055890/)开展了以下系列研究:DPV UL6基因密码子偏爱性分析及多肽抗原表位预测,主要抗原域的克隆、原核表达和抗体制备,利用表达蛋...
- 孙涛
- 关键词：鸭瘟原核表达ELISA间接免疫荧光
- 文献传递
- 不同剂量鸭瘟病毒gC基因疫苗在雏鸭体内的表达时相和分布规律被引量：3
- 2010年
- 本研究利用已建立的间接免疫组化方法检测鸭瘟病毒(DPV)gC基因疫苗(pcDNA-DPV-gC)免疫雏鸭后其表达蛋白在雏鸭体内的表达时相和分布规律,为DPV gC基因疫苗的进一步研究和应用提供基础数据。将不同剂量(50、100和200μg)DPV gC基因疫苗免疫3周龄天府肉鸭,于免疫后不同时间点(4h、12h、1d、3d、5d、7d、2周、4周、6周和10周)分别随机宰杀2只雏鸭,采集肝、脾、肺、肾、胰、脑、胸腺、哈氏腺、法氏囊、十二指肠、盲肠、直肠以及注射部位肌肉,应用间接免疫组化方法检测pcDNA-DPV-gC在雏鸭体内的表达时相和分布规律。结果显示:①各剂量免疫组第1天在肝、十二指肠、盲肠、直肠和注射部位肌肉检测到DPV gC蛋白,其中注射部位肌肉的阳性信号最强;第2周时各组织中的抗原表达量达到高峰,随着时间推移,阳性信号以不同速度逐渐衰减;第10周时各剂量免疫组仍在肝、脑、十二指肠、盲肠和直肠发现持续表达DPV gC蛋白;而胰在所有时间点均未检出阳性信号;②pcDNA-DPV-gC在不同组织的表达量也存在差异,肝、脾、法氏囊、脑、十二指肠、盲肠和直肠是DPV gC蛋白主要的分布器官;阳性信号主要出现在肠黏膜固有层细胞、脾白髓或红髓区的淋巴细胞以及脑皮质神经胶质细胞等部位;③根据各组织的阳性信号强度和持续时间的情况,得到pcDNA-DPV-gC在雏鸭各组织的总体表达规律:十二指肠、盲肠、直肠>肝脏>法氏囊>脾>脑>注射部位肌肉>胸腺>肺>哈氏腺>肾脏>胰脏;④不同剂量pcDNA-DPV-gC免疫雏鸭后各组织中抗原表达量和持续时间的总体规律依次为200μg组>100μg组>50μg组。结果表明不同剂量pcDNA-DPV-gC免疫后1d即可在雏鸭体内发现阳性信号,持续存在10周仍可检测到DPV gC蛋白,预示pcDNA-DPV-gC免疫期可持续较长时间。
- 沈福晓程安春汪铭书蒋金凤贾仁勇朱德康陈孝跃孙涛杨金龙
- 关键词：DPV
- 鸭肠炎病毒UL6基因B细胞抗原表位预测、主要抗原域蛋白原核及其抗体制备
- 采用软件DNAStar Protean程序，综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数，对本实验室所发现的鸭肠炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）CHv毒株UL6基因（GenBank登录号E...
- 孙涛程安春汪铭书郭宇飞贾仁勇沈婵娟
- 关键词：鸭病毒性肠炎病毒B细胞表位预测抗体制备
- 文献传递
- 蛋白质B细胞抗原表位测定方法的研究进展被引量：10
- 2008年
- 孙涛程安春汪铭书
- 关键词：抗原表位蛋白质B细胞合成多肽体液免疫细胞免疫
- 鸭肠炎病毒UL6基因B细胞表位的预测及其主要抗原域的原核表达被引量：9
- 2008年
- 采用DNAStar Protean程序，综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数，对鸭肠炎病毒（DEV）CHv毒株UL6基因（GenBank登录号EF055890）的氨基酸序列进行了B细胞表位预测。结果显示，UL6蛋白羧基端第Thr507～Gln515、Thr521～Met529、Asp531～Phe539、Gly544～Asn562、Thr568～Gln585、Lys592～Val604、A1a681～Ala778和Tyr780～Lys790区域内含有优势B细胞表位。以DEV CHv毒株基因组作为PCR模板，利用Oligo6．0软件设计了1对引物，整体扩增涵盖上述具有优势表位的基因片段，将其亚克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，获得表达载体pET-32a—UL6M，再将其转化至E．coli Rosetta（DE3），经IPTG诱导，外源基因获得了良好表达。以免抗DEV多克隆血清进行Western blot分析，抗血清可与该融合蛋白发生特异性反应。提示，该氨基酸片段可能含有软件预测的线性表位区。
- 孙涛程安春汪铭书郭宇飞贾仁勇沈婵娟
- 关键词：鸭肠炎病毒B细胞表位预测原核表达
