孙俊峰
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
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- 细粒棘球蚴中国大陆株铁蛋白生物信息学的初步分析及其结构和功能预测被引量：1
- 2010年
- 目的应用生物信息学分析软件预测细粒棘球蚴中国大陆株铁蛋白(Eg.ferritin)氨基酸序列的结构与功能。方法利用DNAman、NCBI/BLAST公共数据库对目的基因的同源性进行比较分析。应用DNAstar、Bi-osun等生物分析软件对铁蛋白的二级结构、抗原表位进行预测分析,应用SWISSMODEL对蛋白的三维结构进行模拟。结果检索Eg.ferritin氨基酸序列在其功能区的130AA内同源性为97.7%。不同生物间的同源性平均达40.79%。生物软件预测:Eg.ferritin的分子量约16.7 kD,含非极性氨基酸68个,预测其抗原表位肽段为7N-12E,36H-43V,55S-62H,69Q-76R,82A-89E,102I-107E,117A-124S,129L-136T。结论 Eg.ferritin的结构和功能及其抗原表位的预测对选取有价值的抗原肽段提供了依据。
- 雄英王娅娜李宗吉孙俊峰棘怀庆赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴中国大陆株铁蛋白生物信息学
- 细粒棘球绦虫重组Egmyophilin蛋白诱导免疫小鼠脾细胞增殖及细胞因子水平的变化被引量：2
- 2012年
- 目的探讨细粒棘球蚴绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)亲肌肉抗原重组疫苗(Egmyophilin)诱导ICR小鼠产生免疫保护机制。方法将亲肌肉抗原重组疫苗皮下注射免疫ICR小鼠,同时设空质粒组及PBS对照组。末次免疫后8w,用棘球绦虫原头节腹腔注射进行攻击感染,感染后20w剖杀小鼠,取脾,脾细胞悬液加入EgAg、ConA(刀豆蛋白A)或脂多糖(LPS)刺激培养后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖情况;Annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法检测脾细胞的凋亡发生率;常规ELISA法检测脾细胞培养上清液中IL-2、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果与空质粒组及PBS对照组相比,脾细胞凋亡发生率明显降低,脾T淋巴细胞增殖水平显著升高,脾细胞培养上清液中IL-2、IFN-γ和TNF-α水平显著增高,IL-10水平明显降低。结论棘球蚴绦虫亲肌肉抗原重组疫苗可诱导免疫鼠脾T淋巴细胞增殖,以诱导Th1型免疫应答为主,对抗Eg原头蚴攻击感染。
- 马锐师志云王娅娜李宗吉孙俊峰赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴细胞因子
- 细粒棘球绦虫亲肌肉抗原重组蛋白诱导小鼠免疫应答的研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)亲肌肉抗原重组蛋白诱导ICR小鼠产生的免疫应答及其对Eg原头节攻击感染的保护性作用。方法 36只雄性ICR小鼠随机分为A(重组蛋白免疫组)、B(空质粒蛋白免疫组)和C(PBS对照组)等3组,每组12只。3组小鼠分别经皮下注射重组蛋白(10μg/只)、空质粒蛋白(10μg/只)和PBS(100μl/只),第2和4周同法加强免疫2次。末次免疫后2周,每只小鼠腹腔接种细粒棘球蚴原头节50个进行攻击感染。感染后20周,剖杀小鼠,分离并称重细粒棘球蚴组织,计算囊重减少率。取脾脏,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾脏CD4+T和CD8+T淋巴细胞亚群百分比。脾细胞体外经脾细胞悬液、Eg粗抗原(EgAg)和伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激培养4～5 h后,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测T淋巴细胞增殖情况。结果感染后20周,A组小鼠包囊质量[(0.019±0.036)g]明显低于C组[(0.058±0.057)g](P<0.05),囊重减少率为69.1%;CD4+T和CD8+T细胞亚群百分比分别为(29.7±0.9)%和(9.7±0.8)%,均高于C组[(11.6±1.4)%和(7.8±0.2)%](P<0.01和P<0.05),CD4+/CD8+比值(3.061±0.015)也显著高于C组(1.487±0.106)(P<0.01)。未经刺激时,A组小鼠脾T淋巴细胞增殖水平(0.237±0.009)高于C组(0.159±0.005)(P<0.01);用EgAg和ConA刺激后,A组小鼠脾T淋巴细胞增殖水平[(0.283±0.008)和(0.325±0.025)]均高于C组[(0.203±0.002)和(0.244±0.006)](P<0.01)。结论棘球蚴亲肌肉抗原重组蛋白可诱导免疫小鼠脾脏T淋巴细胞增殖,CD4+T细胞亚群在重组蛋白诱导的小鼠抗Eg原头节攻击感染的保护性免疫机制中起一定作用。
- 马锐师志云王娅娜李宗吉孙俊峰赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴脾细胞免疫保护
- 细粒棘球蚴重组EgP-29诱导免疫小鼠脾细胞增殖及细胞因子水平的变化被引量：3
- 2009年
- 目的探讨细粒棘球蚴重组抗原(rEgP-29)接种小鼠后的免疫保护机制。方法ICR小鼠随机分为免疫组和对照组,采用rEgP-29免疫、Eg原头蚴攻击感染小鼠后20周,以MTT法检测经刀豆蛋白(ConA)和rEgP-29刺激后T淋巴细胞增殖水平,ELISA法检测体外脾细胞诱生的IL-2、IL-4和IFN-γ水平。结果MTT法检测证实rEgP-29免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖水平明显高于对照组(P<0.05);ELISA法检测表明,免疫组小鼠经ConA或rEgP-29诱生的IL-2、IFN-γ水平与对照组相比显著增加(P<0.05),而IL-4水平无明显变化。结论rEgP-29可能诱导Th1型免疫应答为主,对抗Eg原头蚴攻击感染。
- 罗永云李昭宇师志云棘怀庆雄英孙俊峰赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴细胞因子
- 细粒棘球绦虫(中国大陆株)14-3-3重组蛋白的免疫保护力被引量：6
- 2012年
- 目的探讨细粒棘球蚴Eg14-3-3重组蛋白的免疫保护性及其伴随的免疫反应。方法 ICR小鼠随机分为rEg14-3-3蛋白免疫组和PBS佐剂对照组,每隔2周背部皮下免疫1次,连续免疫3次。在第3次免疫后6周,用细粒棘球蚴活的原头蚴进行攻击感染,感染后24周杀鼠取脾,分离培养脾细胞,MTT检测淋巴细胞增殖率,用试剂盒检测脾细胞培养上清液的IL-2、IFN-γ、IL-10和IL-4水平,同时检获棘球蚴包囊数并计算减囊率,用ELISA法测定血清中IgG及其亚型和IgE水平。结果与佐剂对照组比较,rEg14-3-3蛋白免疫组小鼠的免疫保护力为84.47%,rEg14-3-3蛋白免疫组小鼠血清IgG、IgG1、IgG2a抗体水平高于对照组(P<0.05);IgE略低,但两组间差异无统计学意义;淋巴细胞增殖实验结果显示rEg14-3-3免疫组小鼠脾淋巴细胞特异抗原刺激后增殖显著,免疫组淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2分泌水平显著高于对照组,而IL-4、IL-10在两组间差异无统计学意义。结论 rEg14-3-3蛋白能诱导小鼠产生高水平的免疫保护力,是潜在的疫苗候选抗原分子。
- 李宗吉雄英孙俊峰赵巍
- 关键词：细粒棘球蚴免疫保护力IL-4IGE
