周顺 作品数:3 被引量:18 H指数:3 供职机构: 南京医科大学第二附属医院 更多>> 发文基金: 卫生部科学研究基金 南京医科大学科技发展基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
抗人生长转化因子15单克隆抗体制备及鉴定 被引量:5 2011年 目的:制备抗人生长转化因子15(GDF15)单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:构建GDF15原核表达载体pGEX-4T-2-gdf15,诱导表达并纯化GST-GDF15融合蛋白。以该融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠的脾细胞与同系小鼠Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行阳性杂交瘤细胞株的筛选及亚克隆,最终获得稳定分泌抗GDF15 mAb杂交瘤细胞株。以间接ELISA法检测抗体效价;Western blot鉴定抗体特异性;免疫共沉淀法初步检测在肝癌患者血清中GDF15表达水平。结果:获得1株稳定分泌抗人GDF15 mAb杂交瘤细胞株,命名为9G3;抗体免疫球蛋白亚类为IgG1,轻链为κ型;免疫共沉淀及质谱分析证实抗GDF15 mAb9G3能与肝癌患者血清中GDF15蛋白特异性结合并且GDF15水平在肝癌患者血清中较正常人显著升高。结论:成功制备了抗人GDF15mAb,为后期肝癌早期诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础。 詹峰 曾晓燕 张晓 周顺 徐言 张建平 焦永军关键词:GDF15 单克隆抗体 HCC 上皮间质转化相关蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达鉴定及其小分子RNA表达谱的研究 被引量:10 2011年 目的检测E-钙黏蛋白(E—cadhenn)和波形蛋白(vimentin)及其相应小分子RNA(miRNA)在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达。方法免疫组织化学检测32例HCC组织中E-cadherin和vimentin的表达,分析其与临床病理资料的关系。应用miRNA芯片筛选HCC转移相关差异表达miRNAs。选取部分差异表达miRNAs以实时定量逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)方法进行验证,利用在线靶基因预测软件对其靶基因进行预测。结果E—cadhefin在转移、低分化/未分化、大于3cm组中的阳性表达率分别为25.0%(2/8)、35.7%(5/14)、52.9%(9/17),vimentin在上述三组的阳性表达率分别为87.5%(7/8)、71.4%(10/14)、52.9%(9/17)。E—cadhefin表达下调、vimentin表达上调与HCC分化(低分4L/未分化)和转移明显相关(P〈0.05),而与其大小无关。miRNA芯片筛选获得36个HCC转移相关miRNAs(8个上调,28个下调)。在E—cadhefin(-)/vim—entin(+)转移HCC中,miR-21、miR-221的表达(2.22±1.79、2.36±1.05)明显高于E—cadhefin(+)/vimentin(-)无转移HCC(4.35±1.90、3.90±1.23,P〈0.05);miR-199a、miR-126的表达(4.424-0.61、3.62±0.54)明显低于E—cadhefin(+)/vimentin(-)无转移HCC(2.43±0.85、2.54±1.10,P〈0.05)。结论E-cadhefin(-)/vimentin(+)转移HCC与E-cadherin(+)/vimentin(-)无转移HCC的miRNA明显差异表达,其中部分差异表达miRNAs可能通过调控上皮间质转化相关分子的表达参与HCC的转移。 周顺 贾筱琴 喻春钊 詹峰 冯振卿 张建平关键词:肝细胞 小分子RNA 实时定量PCR SPP-1、GDF-15和CXCL-1在人小肝癌中表达的初步研究 被引量:3 2009年 目的:针对前期应用基因芯片(Affymetrix Rat Genome 230.2.0)筛选出的大鼠早期肝癌中高表达的人同源分泌蛋白基因SPP-1、GDF-15和CXCL-1,定量验证其在人小肝癌中mRNA和血清蛋白的表达水平,并探讨其临床应用价值。方法:应用实时定量PCR和双抗体夹心法ELISA,检测15例小肝癌及正常肝脏组织(癌旁正常肝脏组织)的mRNA水平及对应小肝癌血清和正常人血清中的蛋白表达水平。结果:①SPP-1、GDF-15和CXCL-1基因在小肝癌组织中较对照组表达显著上调,其差异有统计学意义(P<0.05);②SPP-1血清蛋白检测值与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);GDF-15血清蛋白含量在小肝癌组中表达水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);小肝癌组中CXCL-1血清蛋白含量较正常对照组表达下调,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:①NF-κB信号通路基因(CXCL-1)、P53信号通路基因(GDF-15)和SPP-1基因在人小肝癌组织中高表达,可能与肝癌发生的早期过程相关;②分泌性蛋白GDF-15和CXCL-1显示出小肝癌筛选诊断的潜在价值。 查斌山 刘开坤 刘悦芳 周顺 朱进 冯振卿 王轩 张建平关键词:小肝癌 肿瘤标志物 实时荧光定量PCR 双抗体夹心ELISA