向莹
- 作品数：25 被引量：49H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导扩增和鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的体外诱导扩增获取大量高纯度的小鼠骨髓来源树突状细胞(DC),并研究不同生长状态的DC成熟情况及进行生物学特性鉴定。方法以重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4),体外诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,脂多糖(LPS)刺激24h,倒置显微镜动态观察细胞形态学变化,并分别收集悬浮细胞、贴壁细胞,流式细胞术(FACS)分析DC细胞表面分子CD11c、MHCⅡ类分子、CD80和CD86的表达水平,并应用混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激异基因淋巴细胞增殖的能力。结果经体外诱导培养第3天即可见大量细胞集落形成;培养至第9天,细胞形态不规则,具有典型DC形态。同组悬浮DC表面MHCⅡ类分子和共刺激分子CD80、CD86的表达水平高于贴壁DC。LPS刺激24h后,DC表面MHCⅡ类分子、CD80、CD86的表达水平显著升高,同时可以显著刺激同种异基因淋巴细胞增殖。结论体外简易诱导培养可以获得高纯度小鼠骨髓来源的各具特性的DC,为开展DC的相关实验研究提供大量稳定的细胞来源。
- 马东霞赵越向莹刘斌
- 关键词：树突状细胞
- 输注胰岛抗原特异性Treg细胞延长同系NOD小鼠移植胰岛的存活时间被引量：1
- 2013年
- 目的探讨输注胰岛抗原特异性调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对非肥胖糖尿病（NOD）小鼠同系胰岛移植物存活时间的影响。方法n以未成熟树突状细胞（imDc）联合谷氨酸脱羧酶一65在体外诱导童贞T淋巴细胞分化成胰岛抗原特异性Treg细胞。以已发生糖尿病的NOD小鼠为受者，将分离得到的尚未进展为糖尿病的NOD小鼠的胰岛（500胰岛当量）移植至受者的肾包膜下，对照组不行移植，只观察血糖变化；单纯胰岛移植组只进行胰岛移植，不输注胰岛抗原特异性Treg细胞；实验组于术前1d静脉输注1×10^6个胰岛抗原特异性Treg细胞，然后进行胰岛移植。术后检测受者的血糖，以判断移植胰岛的存活时间，观察胰岛移植物的病理学变化。结果对照组血糖持续高于11．1m01／L；单纯胰岛移植组小鼠的血糖于术后1～2d降至正常，到7～17d时开始陆续升高，并维持在术前水平，移植物存活时间为（12．2±2．6）d；实验组小鼠的血糖于术后1～2d降至正常，至第27天开始有小鼠血糖升高超过11．1mmol／L第43天时，所有小鼠的血糖均超过11．1mmol／L，移植物的存活时间为（35．2±4．3）d，明显长于单纯胰岛移植组（P〈0．01）。单纯胰岛移植组的移植胰岛有明显的淋巴细胞浸润，并伴有胰岛细胞严重破坏，胰岛素染色未见完整的胰岛存在，仅有极少量残存的分泌胰岛素的胰岛细胞；实验组第15天时移植胰岛形态完整，仅有少量淋巴细胞浸润，分泌胰岛素的胰岛大量存在。结论体外诱导产生的胰岛抗原特异性Treg细胞可以延缓自身免疫系统对移植胰岛的破坏，明显延长NOD小鼠移植胰岛的存活时间。
- 李永海张淦水丽君房爱芳郭峰向莹张伟杰
- 关键词：胰岛移植
- 大鼠脂肪来源干细胞抵抗人血清介导的异种体液免疫杀伤作用及其机制被引量：1
- 2014年
- 目的研究大鼠脂肪来源干细胞（rASC）抵抗人血清介导的异种体液性杀伤的作用及其主要机制。方法分离培养SD大鼠ASC，将2～8代的rASC作为实验材料，以大鼠淋巴细胞（rLC）作为对照。采用流式细胞技术，检测两种细胞异种抗原”Gal的表达情况，体积分数20％正常人血清对两种细胞的杀伤作用、两种细胞分别与正常人血清中天然抗体IgM和IgG的结合情况，以及与正常人血清作用后补体C3c、CAc,CSb-9在两种细胞上的沉积情况。结果成功分离和培养rASC，rASC表面标志检测呈CD44阳性、CD45阴性、CD90阳性及主要组织相容性抗原Ⅱ阴性，并成功诱导rASC向成脂细胞和成骨细胞分化。相对于rLC，rASC对人血清介导的异种体液性杀伤具有明显的抵抗作用，其几何平均荧光强度（Gmean）值为（20．42±2．80）％，低于rLC的（51．84±6．70）Vo（P〈0．01）；rASC上α-Gal的表达量为13．97±0．33，显著低于rLC的24．47±3．03（P〈0．05）；rASC与人血清中IgG和IgM的结合量分别为9．4±2．0和5．73±1．0，显著低于rLC的107．2±4．8和27．49±3．9（P〈0．01）；与正常人血清作用后，rLC可见显著的C3c、CAc和C5b-9沉积（Gmean值分别为1924±509．4、177．3±37．17和37．05±7．4），但rASC仅有较少C3c和CAc沉积（Gmean值分别为294．6±38．02和35．23±3．1），C5b-9沉积几乎为阴性（Gmean值为5．63±1．74），两种细胞间比较，差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论rASC能明显抵抗人血清介导的异种体液免疫杀伤作用，其机制可能与rASC低表达异种抗原α-Gal及抑制了补体攻膜复合物形成有关。
- 赵越王璐阮永乐王筱啸贾钰向莹陈刚
- 关键词：脂肪干细胞体液免疫异种抗原
- 两种不同免疫抑制方案对肾移植受者免疫状态的影响被引量：4
- 2014年
- 目的通过比较两种不同免疫抑制方案对肾移植术后受者免疫状态的影响,以寻找有利于移植物长期存活的免疫抑制方案。方法研究纳入亲属活体肾移植受者18例,肾功能稳定。根据应用免疫抑制方案的不同分为两组:西罗莫司(SRL)组8例,方案为SRL+吗替麦考酚酯(MMF)+泼尼松(Pred);他克莫司(TAC)组10例,方案为TAC+MMF+Pred;两组用药时间均超过1年。相应的亲属活体肾移植供者作为空白对照。采用流式细胞技术检测3组外周血调节性T细胞(Treg)(CD4+CD25+Foxp3+)、调节性B细胞(Breg)(CD19+CD5+CD1d+)占外周血淋巴细胞的比例,采用酶联斑点免疫试验(ELISPOT)检测SRL组、TAC组肾移植受者外周血淋巴细胞经其相应供者外周血淋巴细胞特异刺激后,分泌特异性细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)的单个细胞频数。结果 SRL组肾移植受者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg占总CD4+T细胞的比例为(6.68±0.42)%,TAC组为(3.59±0.47)%,空白对照组为(6.59±0.36)%,SRL组和空白对照组显著高于TAC组(均P<0.05),SRL组与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。SRL组外周血Breg(CD19+CD5+CD1d+)占CD19+B细胞的比例为(16.43±3.56)%,TAC组为(13.09±1.64)%,空白对照组为(16.58±1.31)%,3组之间两两比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。ELISPOT检测SRL组分泌IFN-γ的细胞频数为(117.00±21.54)/500 000,TAC组为(126.00±24.08)/500 000;分泌IL-10的细胞频数SRL组为(347.00±55.29)/500 000,TAC组为(249.00±58.97)/500 000,两组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论长期应用以SRL为基础的免疫抑制方案并不影响Treg占外周血淋巴细胞的比例,而应用以TAC为基础的免疫抑制方案会降低外周血Treg的数量;两种方案都不影响Breg占外周血CD19+B细胞的比例,而且也不影响受者对供者的特异性反应性。
- 房爱芳张淦李永海向莹明长生张伟杰
- 关键词：西罗莫司调节性B细胞免疫状态
- 胃癌SGC7901/OXA细胞耐药与侧群细胞比例及Mdr1、ERCC1基因表达的关系被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨胃癌耐药细胞系SGC7901/OXA获得性耐药的发生机制.方法:利用间歇增加剂量方法诱导成功的SGC7901/OXA细胞株作为观察组,亲代细胞株SGC7901为对照组,采用MTT的方法观察OXA对两组的抑制率,计算IC50和耐药指数(RI);采用RT-PCR和Westernblot的方法分别检测两组多药耐药1(Mdr1)mRNA浓度和切除修复交叉互补基因组1(ERCC1)的蛋白浓度;采用流式细胞仪检测两组细胞中侧群(SP)细胞的比例.结果:SGC7901/OXA细胞各浓度抑制率较SGC7901明显降低,两者IC50分别为38.23μmol/L和7.12μmol/L,RI为5.37;Mdr1mRNA与β-actinmRNA光密度比值在两组中分别为0.468±0.147和0.427±0.136(n=5),两者差异无明显统计学意义(P=0.079);ERCC1蛋白浓度在SGC7901/OXA细胞较SGC7901细胞中明显增加;SGC7901中SP细胞的比例为1.8%,SGC7901/OXA中SP细胞的比例达到了6.1%,较SGC7901细胞明显升高(P<0.05).结论:SGC7901/OXA较SGC7901对OXA明显耐药,其获得性耐药的机制可能与ERCC1蛋白浓度以及SP细胞比例的变化有关,而Mdr1基因的作用不明显.
- 陈刚王清睿邱红柯善栋向莹胡少明
- 关键词：耐药侧群细胞
- 猕猴预致敏后肾移植加速性排斥反应的免疫学及病理学特点
- 2009年
- 目的观察猕猴预致敏后肾移植加速性排斥反应的免疫学及病理学变化特点。方法建立猕猴皮肤预致敏后肾移植加速性排斥反应模型（供、受者各3只）。检测3只受者皮肤移植预致敏前、后及肾移植后血清内供者特异性抗体的变化，并在发生排斥反应时对移植肾进行免疫组织化学（测定补体、抗体的沉积及各类型淋巴细胞浸润情况）及病理学分析。结果3只受者均发生了加速性排斥反应。其中2只受者在预致敏后血清中供者特异性抗体明显增加，对供者的淋巴毒反应明显升高；肾移植后受者血清中供者特异性抗体及针对供者的淋巴毒进一步升高。苏木精－伊红染色显示排斥反应的移植肾内有明显的动脉坏死、血栓形成、间质出血、中性粒细胞浸润；免疫组织化学及荧光染色显示移植肾内有大量的补体、抗体沉积（主要为IgG），而各种类型的淋巴细胞浸润少见。另1只受者体内的供者特异性抗体及对供者淋巴毒反应的升高程度不如前2只明显，病理学变化以肾小管损伤为主。结论皮肤移植预致敏可以诱导受者产生程度不等的预存抗体，导致大多数移植肾在术后早期发生主要由抗体和补体介导的严重的急性体液性排斥反应。
- 陈松李俊华向莹钟山郭晖王虹吴瑛朱建国陈实陈刚
- 关键词：肾移植皮肤移植
- 猪Sertoli细胞在异种移植模型中对人免疫细胞功能的影响被引量：1
- 2008年
- 目的通过体外实验,研究猪睾丸支持细胞Sertoli细胞对猪-人异种移植模型中人外周血单个核细胞(PB-MCs)功能的影响,以探讨Sertoli细胞在诱导异种移植免疫耐受中的潜在作用。方法采用改良酶消化法获取新生猪睾丸Sertoli细胞,纯化后培养,检测分离的原代猪Sertoli细胞纯度,并在光学显微镜和电子显微镜下对猪Sertoli细胞进行形态学测定。采集新鲜人血液,分离外周血单个核细胞(PBMCs),将原代猪Sertoli细胞与人PBMCs共同孵育,观察Sertoli细胞对人PBMCs凋亡率的影响,并与人PBMCs自身凋亡率进行比较。在体外,用3H-TdR摄入法检测人PB-MCs的增殖,对照组用刀豆蛋白A(ConA)刺激活化人PBMCs,实验组则将猪原代Sertoli细胞与ConA活化的人PB-MCs共同培养,连续4d检测人PBMCs的增殖变化。结果采用该实验改良法分离的新生猪Sertoli细胞,经检测纯度超过93%。光学显微镜及电子显微镜下均可见Sertoli细胞胞体多突起、胞核内多核仁、胞质内多脂滴等典型特征。经Annexin-Ⅴ/PI染色,流式细胞仪检测,猪Sertoli细胞可诱导人PBMCs凋亡率升高(8.92±1.75)%,高于人PBMCs的自身凋亡率(3.09±0.75)%(P<0.01)。并且猪Sertoli细胞能够延迟ConA刺激的人PBMCs体外增殖峰的出现(对照组增殖峰在第2天出现,实验组增殖峰在第3天出现),但是两组增殖峰峰值间的差异没有统计学意义。结论采用该法可以获得高纯度的猪Sertoli细胞。在猪-人异种移植体外实验中,新生猪Sertoli细胞能够诱导人PBMCs凋亡,并且能够延迟ConA活化的人PBMCs增殖反应,对人PBMCs的活化增殖有一定程度的抑制作用。
- 谢林尹注增胡枫王璐朱珉向莹陈刚陈实
- 关键词：异种移植人外周血单个核细胞
- 应用改良流式法检测猕猴和食蟹猴体内血型抗体水平的分布情况被引量：2
- 2011年
- 绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人IgM或IgG二抗,对收集的实验用猕猴及食蟹猴的血清样本进行检测,以人类健康受试者的血清样本为对照,比较两者血型抗体水平的差异。结果显示:预先用人O型浓缩红细胞吸附猴血清中所含种属间非特异性抗体后,FCM法能够准确检测其血型抗体水平及分型,并且发现猴血清中天然血型抗体的水平明显低于健康人(P<0.05)。由此得出:通过预处理清除非特异性抗体的干扰后,FCM法同样适用于灵长类动物血清中血型抗体的检测,也为构建灵长类动物模拟人ABO血型不合器官移植模型提供了技术保障和实验数据。
- 张弛王筱啸王璐向莹魏晴王婉瑜熊郁良陈实陈刚
- 关键词：ABO血型抗体猕猴食蟹猴
- 诱导供者胰岛细胞高表达血红素加氧酶-1延长大鼠胰岛移植物的存活时间
- 2009年
- 目的探讨钴原卟啉（CoPP）诱导大鼠胰岛细胞高表达血红素加氧酶－1（HO-1）后，对延长胰岛移植物存活时间的作用。方法（1）将分离和纯化的供者（BN大鼠）胰岛细胞分为CoPP诱导组和未诱导组。CoPP诱导组供者在分离胰岛细胞前3天和前1天腹腔注射2．5mg／kg的CoPP，未诱导组不注射CoPP。诱导后，采用免疫荧光法及Western免疫印迹法检测两组胰岛细胞中HO-1的表达情况，采用酶联免疫吸附试验（EUSA）和葡萄糖刺激试验检测胰岛细胞的胰岛素释放水平。（2）Lewis大鼠经四氧嘧啶静脉注射后建立糖尿病模型，取10只成功建立糖尿病模型的大鼠作为胰岛细胞移植的受者，随机平均将受者分为实验组和对照组，分别移植经CoPP诱导和未经诱导的供者胰岛细胞。移植后，观察和比较两组受者胰岛移植物的存活时间和发生排斥反应后胰岛移植物的组织病理学变化。结果CoPP诱导组胰岛细胞高表达HO-1，而未诱导组不表达HO－1；CoPP诱导组和未诱导组供者胰岛细胞胰岛素分泌量，在低糖刺激下分别为（15．65±0．89）mU／L和（12．28±0．89）mU／L（P〉0．05），在高糖刺激下分别为（46．60±1．13）mU／L和（19．01±1．49）mU／L（P〈0．05），刺激指数分别为2．98±0．10和1．55±0．01（P〈0．05）。实验组和对照组胰岛移植物平均存活时间分别为（12．20±5．67）d和（5．60±1．14）d（P〈0．05）；当受者发生排斥反应时，对照组胰岛移植物周边可见明显的淋巴细胞、成纤维细胞以及单个核细胞浸润，而实验组细胞浸润的程度明显较轻。结论CoPP可诱导大鼠胰岛细胞高表达HO-1，其对胰岛细胞有明显保护作用。移植高表达HO-I的胰岛细胞能显著延长胰岛移植物的存活时间。
- 侯凌尹注增向莹李俊华陈实陈刚罗小平
- 关键词：胰岛移植血红素加氧酶-1
- 钴原卟啉诱导血红素氧合酶-1高表达减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤被引量：1
- 2008年
- 目的 探讨钴原卟啉（CoPP）诱导血红素氧合酶-1（HO-1）高表达对大鼠肾脏缺血再灌注损伤（IRI）的影响及其机理。方法 以Wistar大鼠为实验对象，CoPP组分别于左肾血流阻断前48h和24h腹腔注射CoPP2．5mg／kg，然后阻断左肾血流47min，恢复左肾血流的同时切取大鼠右肾，采用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测其HO-1的表达。在再灌注24h后，处死大鼠，取其下腔静脉血和左肾，测定血肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）浓度，观察肾组织学变化，检测肾组织中HO-1的表达。IRI组除不用CoPP处理外，其余同CoPP组。CoPP组和IRI组另有部分大鼠的血流阻断时间延长至80min，恢复血流后不处死，观察14d，记录其存活情况。结果 IRI组血清Cr及BUN分别为（134．37±24．26）μmol／L和（30．10±3．09）mmol／L，明显高于CoPP组的（48．92±12．92）μmol／L和（13．99±5．00）mmol／L（P〈0．05）。IRI组肾小管细胞大片坏死，管型形成，与之相比，CoPP组肾小管坏死范围稍小，但肾小管病变范围仍较广泛，肾小管上皮细胞多处于水变性阶段，“缺血样”肾小球减少，管型形成较少。缺血前及再灌注24h后，CoPP组的肾组织中HO-1均为高表达，主要位于肾间质的毛细血管处，IRI组再灌注24h后也见肾组织中HO-1为高表达。术后14d内，IRI组的6只大鼠中有4只死亡，而CoPP组的5只大鼠全部存活，两组大鼠存活率的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论缺血前使用CoPP可减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤，该保护作用可能是通过CoPP诱导肾脏高表达HO-1来实现的。
- 肖芳陈刚李俊华向莹陈松陈实
- 关键词：缺血再灌注损伤
