任君琳
- 作品数：18 被引量：33H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向hTERT RNA干涉促进人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究被引量：2
- 2005年
- 目的:利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:将成功构建的针对hTERT的siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体转染HeLa细胞,通过透射电镜、免疫印迹和流式细胞术(FCM)等方法检测人宫颈癌HeLa细胞的凋亡情况。结果:构建的siRNA表达载体可以诱导HeLa细胞发生凋亡。结论:针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体稳定转染HeLa细胞,可诱导HeLa细胞发生凋亡。
- 赵英任君琳张瑞马龙洋鲍炜王成济杨安钢
- 关键词：RNA干涉人端粒酶逆转录酶凋亡HELA细胞
- 免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性杀伤HER2阳性SGC-7901胃癌细胞被引量：1
- 2016年
- 目的构建融合白喉毒素转位序列的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6的真核表达载体,真核表达纯化该重组蛋白后验证其对人表皮生长因子受体2(HER2)阳性细胞的选择性杀伤活性。方法把Kozak序列与单链抗体e23sfv、白喉毒素的促转位片段白喉毒素弗林蛋白酶识别位点(fdt)、caspase-6以及免疫球蛋白Ig G Fc段基因重组,克隆入真核表达载体pc DNA3.1(+)中,命名为pc DNA3.1(+)-AFC。瞬时转染CHO-S细胞,Western blot法检测上清中目的蛋白的表达;收集培养上清并利用蛋白A纯化柱对目的蛋白进行纯化;流式细胞术验证目的蛋白对HER2阳性SGC-7901细胞的杀伤作用。结果成功构建pc DNA3.1(+)-AFR真核表达载体;瞬时转染悬浮CHO-S细胞后,Western blot法证实目的蛋白可分泌性表达于细胞培养上清中,流式细胞术结果显示纯化后的目的蛋白可以显著促进HER2阳性SGC-7901细胞凋亡。结论真核细胞表达的免疫促凋亡蛋白Immuno-caspase-6可选择性高效杀伤HER2阳性SGC-7901细胞。
- 胡萍萍任君琳李玉芳陈旭席文锦杨安钢王涛崔立红
- 关键词：分子靶向治疗
- 人抗HBsAg单链抗体-Tat融合基因的构建、表达及表达产物的活性鉴定
- 2005年
- 目的:构建人抗HBsAg单链抗体Tat蛋白转导结构域(ScFvTat)融合基因,在大肠杆菌中进行表达,并分析ScFvTat融合蛋白的活性及内化情况.方法:设计引物扩增人抗HBsAg单链抗体基因,克隆入含有蛋白转导结构域Tat序列的原核表达载体pTATHA,在大肠杆菌BL2l(DE3)LysS内诱导融合蛋白表达.表达产物用SDSPAGE及Westernblot鉴定,用亲和层析柱纯化.间接ELISA和ELISA竞争抑制实验分析ScFvTat融合蛋白的亲和活性,将纯化蛋白与HBsAg阳性或阴性肝癌细胞共孵育后,免疫细胞化学染色分析ScFvTat融合蛋白的结合及内化情况.结果:成功地构建了人抗HBsAg单链抗体Tat融合蛋白的原核表达载体,在IPTG诱导下获得了表达,表达的ScFvTat融合蛋白具有与HBsAg结合的活性,并且能够特异性内化入HBsAg阳性肝癌细胞.结论:单链抗体与Tat蛋白转导结构域融合后,实现了ScFvTat融合蛋白的特异性内化,为该单链抗体的进一步应用奠定了基础.
- 孟艳玲温伟红薛茜贾林涛鲍炜刘家云任君琳薛采芳李英辉王成济杨安钢
- 关键词：单链抗体内化
- 免疫凋亡素e23sFv-Fdt-RC6对HER2阳性胶质瘤细胞U251的杀伤作用被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨靶向活性caspase-6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251的促凋亡作用。方法:利用白喉毒素furin酶识别序列(Fdt)连接抗HER2单链抗体基因e23sFv和重构型caspase-6(RC6)基因,连接入pCMV载体,构建重组基因的真核表达载体pCMV-e23sFv-Fdt-RC6。脂质体转染HER2阳性胶质瘤U251细胞系,Western blot检测目的蛋白的表达。流式细胞术(FCM)检测转染后U251细胞的凋亡率,MTT法检测目的基因转染后对U251细胞增殖的影响。结果:双酶切及基因测序证实,pCMV-e23sFv-Fdt-RC6载体被成功构建。Western blot检测到转染表达载体48h后的U251细胞中有活性caspase-6的表达。FCM检测到实验组细胞凋亡率比对照组显著增高。MTT实验观察到转染载体pCMV-e23sFv-Fdt-RC6的U251细胞的增殖被明显抑制。结论:e23sFv-Fdt-RC6融合蛋白对HER2阳性胶质瘤细胞系U251有明显的促凋亡作用。
- 张雷鸣任君琳孟艳玲杨双武许彦鸣杨安钢张剑宁
- 关键词：CASPASE-6胶质瘤
- ImmunoAIF△1-480融合蛋白对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用被引量：2
- 2008年
- 目的:观察免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用。方法:利用PCR的方法将九聚精氨酸编码序列(R9)与AIFC-末端结构域编码区重组,然后将R9-AIF△1-480基因与pCMV-e23sFv载体重组,构建免疫促凋亡分子ImmunoAIF△1-480真核表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,经G418筛选,建立稳定转染的细胞株,通过RT-PCR、Westernblot、流式细胞术(FCM)等方法检测重组基因在转染细胞中的表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的特异性杀伤活性。结果:经过酶切鉴定与测序证实,带有Im-munoAIF△1-480基因的真核表达载体构建成功,经RT-PCR、Westernblot可检测到培养上清中免疫促凋亡基因的表达,用FCM检测发现融合蛋白ImmunoAIF△1-480对HER2阳性肿瘤细胞SGC-7901和SKBR-3有明显的促凋亡活性,而对不表达HER2分子的ECV-304细胞几乎没有影响。结论:Immuno-AIF△1-480可以特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞。
- 韩涛张勇孙书明任君琳李伟郭张燕孟艳玲杨安钢
- 关键词：凋亡诱导因子细胞凋亡
- 免疫促凋亡分子靶向杀伤肿瘤的研究进展
- 2013年
- 免疫促凋亡分子是肿瘤特异性表面标记物的单链抗体与具有转位及杀伤功能的活性片段融合表达的重组蛋白，具有靶向识别、高效杀伤肿瘤细胞的特点。免疫促凋亡分子由免疫毒素发展而来，免疫毒素虽然具有较强的杀伤活性和特异性，但是由于其转运、杀伤结构域来源于细菌或植物毒素，临床试验中产生了中和抗体并伴有较强副作用，限制了其应用的范围。第二代免疫促凋亡分子利用人内源性杀伤分子替换了免疫毒素的杀伤结构域，部分解决了免疫毒素的免疫原性问题，但是其未被替代的天然毒素转位结构域仍具有免疫原性且转位效率有限。最新一代免疫促凋亡分子进一步用furin位点替代了毒素的转位结构域，在保证特异性及杀伤活性的同时，提高了转位能力并极大地降低了免疫原性，因而具有广泛的临床应用前景。
- 王涛任君琳贾林涛杨安钢
- 关键词：肿瘤靶向杀伤
- RNA干涉CD44基因抑制脑胶质瘤细胞U251的增殖与侵袭性研究被引量：3
- 2014年
- 目的通过合成靶向分化抗原簇44(CD44)基因的siRNA片段,下调CD44在脑胶质瘤细胞U251中的表达,揭示其在胶质瘤增殖、迁移和侵袭中所起的作用。方法根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段转染U251细胞,利用荧光实时定量(qRT-PCR)检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化;蛋白印迹实验(Western blot)检测CD44基因蛋白水平的变化;四甲基偶氮唑蓝染色(methyhhiazolyl tetrazolium,MTT)法检测U251细胞增殖;单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U251细胞的迁移与侵袭能力变化。结果体外合成的CD44-siRNA能有效抑制U251细胞中CD44基因在mRNA水平与蛋白水平的表达(P<0.05),并抑制细胞的增殖(P<0.05)和迁移侵袭能力(P<0.05)。结论 CD44-siRNA能够有效抑制U251脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的肿瘤基因治疗奠定了基础。
- 董超张剑宁杨安钢任君琳张雷鸣方丹东陈晓燕杨韬郭张燕
- 关键词：CD44RNA干涉U251
- 重组抗HER2ScFv/FPE/caspase-6基因的表达及其对乳腺癌SKBr-3细胞的促凋亡作用
- 目的：构建重组抗HER2 ScFv/FPE/caspase-6基因的表达载体,转染SKBr-3乳腺癌细胞后观察其促凋亡作用.方法：采用重组PCR法,将抗HER2的单链抗体(e23sFv)、绿脓杆菌外毒素中furin识别序...
- 任君琳王涛孟艳玲韩涛杨安钢
- 关键词：CASPASE-6FURIN
- hTERT siRNA表达载体的构建及对转染的HeLa细胞生长抑制作用被引量：7
- 2005年
- 目的:通过RNA干涉技术抑制肿瘤细胞端粒酶表达,探讨干涉后对肿瘤细胞生长的抑制作用.方法:根据人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA编码序列,设计RNA干涉靶点,构建siRNA(smallinterferencingRNA)表达载体,并转染HeLa细胞,通过RT PCR法观察重组质粒转染肿瘤细胞后端粒酶mRNA、蛋白含量及细胞生长情况.结果:构建的siRNA表达载体可以使HeLa细胞端粒酶逆转录酶mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度减慢.结论:成功构建了针对人端粒酶逆转录酶的siRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中端粒酶的表达,并引起细胞生长抑制.
- 赵英任君琳孟艳玲张瑞马龙洋鲍炜王成济杨安钢
- 关键词：RNA干涉端粒酶HELA细胞
- 人抗HBsAg单链抗体/鱼精蛋白截短体融合蛋白基因的构建、表达及活性鉴定被引量：5
- 2006年
- 目的:构建人抗HBsAg单链抗体(ScFv)/鱼精蛋白截短体(truncated protam ine,tP)融合基因,在大肠杆菌中进行表达纯化并分析ScFv/tP融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HBsAg ScFvHBs15基因,在其3′端引物引入tP的编码基因,PCR扩增获得ScFv/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET-32 a后,在大肠杆菌BL2 l(DE3)LysS内诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及W estern b lot鉴定后,用N i-NTA螯合层析介质纯化.间接ELISA分析ScFv/tP融合蛋白的亲和活性,凝胶迁移阻滞实验检测ScFv/tP融合蛋白与DNA结合的情况.结果:成功获得人抗HBsAg ScFv/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中表达,表达的ScFv/tP融合蛋白不仅保持了与HBsAg结合的能力,同时具有DNA结合活性.结论:ScFv与tP融合后,同时具有与抗原和DNA结合的活性,为该ScFv的进一步应用奠定了基础.
- 孟艳玲温伟红薛茜张勇张巍鲍炜任君琳贾林涛王成济杨安钢
- 关键词：单链抗体乙型鱼精蛋白类
