任丽莉
- 作品数：16 被引量：32H指数：5
- 供职机构：辽宁医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省科学技术计划项目辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及其定位被引量：6
- 2013年
- 目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期中蛋白激酶Wee1B的表达水平及其定位水平,初步阐明Wee1B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B的mRNA和蛋白表达水平;放射自显影测定Wee1B活性;间接免疫荧光观察Wee1B在各个细胞时期的定位。结果:小鼠1-细胞期受精卵G1、S、G2和M期Wee1BmRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05);S、G2和M期Wee1B蛋白表达量与G1期比较差异有统计学意义(P<0.01);与G1期比较,S、G2期Wee1B活性逐渐增高(P>0.05,P<0.01),M期Wee1B活性迅速下降(P<0.01)。G1期和S期细胞Wee1B蛋白偶联的红色荧光信号主要集中分布于细胞核,但在G2期细胞红色荧光信号弥散分布于细胞浆,在M末期和2-细胞期可见红色荧光信号又重新分布于细胞核,细胞浆内荧光减弱。结论:蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期动态表达,Wee1B蛋白存在核浆转位,Wee1B的定位变化可能调控小鼠受精卵有丝分裂。
- 刘超肖建英任丽莉刘洋马浚仁于秉治
- 关键词：小鼠合子蛋白表达蛋白定位
- Wee1B蛋白S15位点突变抑制小鼠1-细胞期受精卵的发育被引量：3
- 2014年
- 为研究小鼠Wee1B蛋白S15位点磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,构建pcDNA3.1/V5-His-TOPO-Wee1B-S15A(Ser突变成Ala)/D(Ser突变成Asp)突变体,体外转录成mRNAs.对小鼠进行超排卵后当晚与雄鼠1∶1合笼,第2 d早取受精卵后培养至S期,显微注射Wee1B-WT(野生型)/KD(激酶失活型)-mRNAs和突变体Wee1B-S15A/D-mRNAs,观察其对受精卵发育、有丝分裂促进因子(MPF)活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果表明,过表达Wee1B-WT和Wee1B-S15A/D可有效抑制受精卵有丝分裂进程,明显降低卵裂率.过表达模拟磷酸化的突变明显抑制MPF的活性,CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Wee1B蛋白S15位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式.
- 刘超肖建英任丽莉于秉治
- 关键词：蛋白激酶A小鼠受精卵
- 下调蛋白激酶Wee1B表达对小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂的促进作用被引量：3
- 2014年
- 目的:利用特异性发夹结构Wee1BshRNA,探讨蛋白激酶Wee1B对小鼠受精卵早期发育的影响。方法:超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵并显微注射质粒,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、Control shRNA注射组和Wee1BshRNA注射组,收集各组卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测Wee1B shRNA的干涉效能;荧光显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定Wee1B活性。结果:与TE缓冲液和Control shRNA注射组比较,Wee1BshRNA注射组小鼠1-细胞期受精卵Wee1BmRNA水平和蛋白表达显著降低;与其他3组比较,Wee1BshRNA注射组Wee1B的激酶活性明显降低;未注射组、TE缓冲液注射组和Control shRNA注射组在hCG注射33h后1-细胞期受精卵的卵裂率分别为71.91%±1.74%、72.90%±2.25%和72.28%±2.06%,3组间比较差异无统计学意义(P>0.05);而Wee1BshRNA注射组的卵裂率提高18.00%,为90.00%±0.77%,与其他3组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:Wee1B表达沉默可提高小鼠1-细胞期受精卵的卵裂率,说明Wee1B负调控小鼠受精卵有丝分裂的进程。
- 任丽莉刘超刘乙蒙孟智超孙静于秉治肖建英
- 关键词：短发夹RNA有丝分裂受精卵小鼠
- 蛋白激酶CK2β小干扰RNA促进小鼠受精卵早期发育被引量：1
- 2012年
- 目的:利用特异性小发夹RNA(siRNA)寡核苷酸片段,研究蛋白激酶CK2调节亚基CK2β对小鼠受精卵早期发育的影响,阐明调控小鼠受精卵早期发育的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,分别显微注射TE缓冲液、scramble siRNA和CK2βsiRNA,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测CK2βsiRNA的干涉效能;相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定M期促进因子(MPF)活性。结果:与TE缓冲液和scramble siRNA组比较,CK2βsiRNA组CK2β的mRNA水平和蛋白表达显著降低(P<0.01),MPF的活性明显升高(P<0.01),在人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后28.5h达到高峰;受精卵第一次有丝分裂加速,CK2βsiRNA组在hCG注射后28.5h大多数受精卵已经分裂为2-细胞期胚胎;hCG注射后32.0h卵裂率为89.5%,与TE缓冲液和scramble siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CK2βsiRNA通过提前激活MPF活性,进而促进小鼠1-细胞期受精卵的发育。
- 刘超任丽莉刘洋肖建英
- 关键词：SIRNA小鼠受精卵
- 蛋白激酶A抑制剂H-89通过Wee1B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育
- 2016年
- 目的：探讨蛋白激酶A（PKA）抑制剂H-89通过调控小鼠蛋白激酶WeelB蛋白S15位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育。方法：超排卵方法获得小鼠1-细胞期受精卵，经H-89预处理后显微注射WeelB-mRNAs，相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率；放射自显影测定M期促进因子（MPF）活性；免疫印迹检测WeelB蛋白表达、CDC2-pTyr15和WeelB-pSer15磷酸化及WeelB-pSerl5非磷酸化状态。结果：H-89持续存在时，在受精卵G1和S期检测到WeelB-Ser15的磷酸化条带，在G2期和M期检测到WeelB-Serl5的非磷酸化条带；小鼠受精卵有丝分裂进程加快，但过表达WeelB-WT和过表达突变体weelBSl5A／D均能延缓受精卵有丝分裂进程，逆转由H-89引起的促进分裂作用。结论：H-89抑制PKA活性，从而抑制WeelB蛋白S15位点的磷酸化状态，但过表达WeelB-S15A／D有效逆转H-89加速的G2／M期转换，使受精卵的分裂延迟。提示weelB蛋白的S15位点可能是PKA作用的生理靶点。
- 张苧兮刘超任丽莉刘乙蒙齐川于秉治肖建英
- 关键词：蛋白激酶A受精卵小鼠
- 蛋白激酶WEE2负调控小鼠1-细胞期受精卵的发育
- 目的:通过对昆明系小鼠1-细胞期受精卵各个细胞周期（G1期、S期、G2期和M期）中蛋白激酶WEE2的表达、活性及其定位进行初步分析,并过表达和降低WEE2,观察小鼠1-细胞期受精卵的卵裂,为进一步研究WEE2对哺乳动物受...
- 刘超任丽莉孟智超刘乙蒙肖建英
- 关键词：小鼠受精卵有丝分裂蛋白定位
- 文献传递
- TBB通过WNT/β-catenin通路抑制甲状腺滤泡状癌细胞FTC133的增殖与迁移被引量：5
- 2014年
- 目的观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺滤泡状癌细胞系FTC133的CK2α、β-catenin和SURVIVIN的mRNA和蛋白表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法体外培养FTC133细胞,分对照组(DMSO组)和TBB组(终浓度为12.5、25和50μmol/L),MTT法测定细胞增殖抑制率;划痕实验测定细胞迁移;RT-PCR和Western blot法分别检测FTC133细胞CK2α、β-catenin和SURVIVIN的mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,TBB呈剂量依赖性抑制FTC133细胞的增殖和迁移。各TBB处理组CK2αmRNA表达水平明显降低(P<0.01);TBB组随着浓度的逐渐加大,CK2α、β-catenin和SURVIVIN蛋白表达下降(P<0.01)。结论 TBB在一定浓度范围内抑制甲状腺滤泡状癌细胞系FTC133的增殖和迁移,其机制可能与TBB下调CK2α表达进而抑制WNT/β-catenin信号通路有关。
- 王翠瑶刘超任丽莉张晓玉孙静肖建英
- 关键词：甲状腺滤泡状癌Β-CATENIN
- 蛋白激酶Wee1B在小鼠1-细胞期受精卵中的表达及定位
- 刘超任丽莉刘洋马浚仁肖建英
- 从人卵巢cDNA文库中筛选与蛋白激酶Wee2互作蛋白及在小鼠1-细胞期受精卵中的功能验证
- 【目的】筛选与蛋白激酶Wee2相互作用的候选分子,证实该蛋白与Wee2的相互作用及作用机制,并进一步探讨其对小鼠受精卵早期发育的影响,本研究对揭示小鼠受精卵早期发育的分子机制和生殖机理具有十分重要的意义,为优化人类辅助生...
- 刘超任丽莉刘乙蒙孟智超肖建英
- 关键词：酵母双杂交小鼠受精卵
- 文献传递
- 酵母双杂交技术筛选与蛋白激酶Wee1相互作用的蛋白被引量：5
- 2016年
- 目的应用酵母双杂交技术筛选出与Wee1蛋白激酶相互作用的候选分子,为进一步研究Wee1的分子功能提供理论基础。方法利用分子克隆的方法重组酵母双杂交质粒p GBKT7-Wee1,并验证其在酵母中的毒性、自激活能力和表达。利用酵母双杂交技术从人卵巢c DNA文库中筛选出与Wee1蛋白相互作用的蛋白,并在酵母中重新验证其相互作用。结果成功构建p GBKT7-Wee1诱饵质粒,验证了其无毒性及自激活能力,且可以在酵母中表达,可进一步进行酵母双杂交的筛选工作。结论利用酵母双杂交系统筛选出与Wee1相互作用的候选分子30个,为揭示蛋白激酶Wee1可能通过与其他蛋白相互作用进而调控细胞周期进程。
- 刘超刘乙蒙栾治东任丽莉孟智超肖建英
- 关键词：酵母双杂交
