高启国
- 作品数：39 被引量：102H指数：6
- 供职机构：西南大学园艺园林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- eSRK_s酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用的检测
- 2011年
- 为研究甘蓝自交不亲和决定因子S位点富含半胱氨酸蛋白/S位点蛋白11(SCR/SP11)与S位点受体激酶(SRK)胞外域高变区(eSRKs)的相互作用,构建了eSRKs基因的酵母双杂交诱饵载体,检测其自激活作用,并验证是否适用于后续的相互作用研究.以甘蓝B3为材料,通过RT-PCR技术获得eSRKs目的基因片段,将其克隆到pGBKT7载体中,构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-eSRKs;测序正确后,将重组质粒转入Y2HGold,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性以及对报告基因有无自激活作用,结果获得了正确的eSRKs基因片段,并成功克隆到pGBKT7诱饵载体中,且转化在有诱饵载体pGBKT7-eSRKs的Y2HGold在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,表明表达产物对酵母细胞无毒性;显色反应结果表明对报告基因也无自激活作用,为下一步利用酵母双杂交系统检测SCR蛋白与SRK蛋白胞外域高变区的相互作用奠定基础.
- 杨红朱利泉彭一波罗兵杨昆张贺翠吴志刚黄丹高启国
- 关键词：酵母双杂交自激活作用
- 结球甘蓝AUX/IAA家族基因BoIAA2与BoIAA19的克隆与表达分析被引量：3
- 2017年
- 为了探究AUX/IAA家族基因在结球甘蓝叶片与茎尖发育过程中的功能,筛选出对甘蓝叶片与茎尖发育具重要影响的相关AUX/IAA基因。试验以结球甘蓝品系"519"为材料,通过对莲座期叶片与茎尖,结球期叶片与茎尖的转录组比较分析,筛选出在两个组织中均表达差异显著的2个AUX/IAA基因,分别为BoIAA2与BoIAA19。采用PCR技术分别获得基因BoIAA2与BoIAA19的编码序列,其CDS(coding sequence)全长分别为519 bp、585 bp,编码172、194个氨基酸;进一步序列分析发现BoIAA2、BoIAA19分别与大白菜BrIAA2、油菜BnIAA19氨基酸同源相似性均达99%,且均具有AUX/IAA蛋白的DomainⅠ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ特异性结构域。利用荧光定量PCR分析表明BoIAA2和BoIAA19在叶片、茎尖中的表达量均呈现出结球期高于莲座期的变化趋势,与转录组分析结果相符;对其结合蛋白基因BoTIR1和BoARF8进行表达分析,结果显示二者与BoIAA2、BoIAA19在叶片、茎尖中不同时期的表达量变化趋势一致;由此,推测BoIAA2和BoIAA19可能通过与BoTIR1和BoARF8的结合影响生长素信号转导,进而调控结球甘蓝叶片及茎尖的生长发育。
- 蒲全明施松梅张林成高启国任雪松向承勇杨鹏林帮民耿明明
- 关键词：结球甘蓝AUX/IAA基因克隆
- 甘蓝BoSU03蛋白基因的克隆及其与SRK相互作用分析被引量：2
- 2015年
- 扩增了从甘蓝柱头蛋白质谱鉴定中获得的泛素蛋白BoSU03基因的编码序列。序列分析表明BoSU03与甘蓝泛素蛋白Bo1003815的核苷酸序列相似性最高,达98%,含有臂重复结构域,属于植物泛素蛋白家族。为探究BoSU03是否为自交不亲和S位点受体激酶(SRK)下游的互作蛋白,以SRK与ARC1相互作用为对照,利用GAL酵母双杂交系统对SRK与BoSU03进行了相互作用验证,结果表明,BoSRK/BoSU03的转化酵母在四缺平板SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/x-α-gal/25 mmol 3-AT上长势较好,显色较深,进一步检测发现BoSRK/BoSU03转化酵母的β-半乳糖苷酶活性值大于BoSRK/BoARCl转化酵母的活性值,这为进一步分析鉴定BoSU03是否参与SRK下游信号传导过程提供了依据。
- 毕云龙高启国施松梅刘晓欢蒲全明张莹张林成廉小平柳菁朱利泉
- 关键词：甘蓝酵母双杂交系统
- 甘蓝自交不亲和信号转导元件ARC1与EXO70A1的相互作用被引量：3
- 2011年
- 从甘蓝型油菜与羽衣甘蓝柱头中克隆出ARC1与EXO70A1基因的编码区,序列分析显示推导的甘蓝型油菜ARC1比羽衣甘蓝ARC1少编码2个氨基酸,ARC1蛋白在羽衣甘蓝与甘蓝型油菜中存在45个氨基酸的差异,其序列相似度与一致性分别达到95.9%和93.9%;推导的EXO70A1在2种植物中仅有6个氨基酸的差异,其序列相似度与一致性分别达到99.4%和98.9%;EXO70A1蛋白在种内和物种间都保持着高度的保守性,其保守的程度高于ARC1。应用酵母双杂交系统检测2种蛋白质的相互作用,发现在二倍体酵母细胞中,全长的ARC1与EXO70A1之间存在较强的相互作用,能激活4个报告基因(ADE2、HIS3、AUR1-C和MEL1)的表达;去除C-端(包括臂重复区)316个氨基酸残基后的ARC1N与EXO70A1之间表现出较弱的相互作用,只能激活3个报告基因(ADE2、AUR1-C和MEL1)的表达,表明ARC1的臂重复区可能并不位于ARC1与EXO70A1的互作界面的核心区段,ARC1的N-端结构域对ARC1与EXO70A1互作起关键作用;同时发现不同ARC1-EXO70A1组合的互作强度相当,其可能原因是ARC1和EXO70A1在甘蓝与甘蓝型油菜中存在的这些序列差异并未影响ARC1-EXO70A1互作界面的构象。
- 杨昆张贺翠Richard CONVERSE朱利泉杨永军薛丽琰罗兵常登龙高启国王小佳
- 关键词：自交不亲和蛋白质相互作用酵母双杂交
- 析《园艺植物育种学》教学改革被引量：4
- 2010年
- 结合《园艺植物育种学》教学实践和教学改革中的体会,总结指出通过以下几个方面改革能够有效地提高教学质量:(1)注重主讲教师选拔,构建合理教学团队;(2)完善课程体系,优化教学内容;(3)改进教学手段,完善教学方法;(4)重视实验教学,提高学生综合能力;(5)加强强网络课件建设,拓宽学生学习渠道。
- 高启国王小佳
- 关键词：园艺植物育种学教学改革教学质量
- 甘蓝eSRK重组体的构建及其与SCR的相互作用
- 2012年
- SRK与SCR是甘蓝自交不亲和雌雄性决定因子,两者间相互作具有单倍型特异性。为了探讨HVI/II区域在SRK单倍型特异性及其与SCR互作中的作用,采用重组技术构建甘蓝不同单倍型eSRK(SRKE与SRKF)间的重组体eSRKE-1、eSRKE-2和eSRKE-3,用酵母双杂交系统3检测各eSRK重组体与SCR之间的相互作用。结果表明:SCRE能与eSRKE作用,而不能与eSRKF作用,说明eSRKE、eSRKF属于不同单倍型;SCRE与重组体eSRKE-1、eSRKE-2、eSRKE-3均不发生作用,HVI和HVII区域内差异的氨基酸位点共同参与了与SCR的作用;SCRF不能与eSRKE-1、eSRKE-2、eSRKE-3作用,替换HVI/II区域后并不能改变SRK的单倍型。
- 韦静宜高启国任雪松王小佳李成琼宋明
- 关键词：SRKSCR酵母双杂交
- 甘蓝柱头蛋白质双向电泳体系的建立被引量：1
- 2012年
- 蛋白质提取方法和电泳条件是蛋白质组学研究中双向电泳的关键。为建立适合甘蓝柱头总蛋白质的双向电泳体系,本试验以甘蓝柱头为材料,采用改良TCA/丙酮沉淀法提取柱头总蛋白质,通过对IPG胶条、上样量、聚焦程序、SDS-PAGE胶浓度等的优化,建立了甘蓝柱头总蛋白质双向电泳体系,即选用长17cm、pH3～10NL的IPG胶条,上样量150μg,按照聚焦程序Ⅰ进行等电聚焦,第二向SDS-PAGE胶浓度选用12%,得到了分辨率高、重复性好的双向电泳图片。
- 曾静陈松朱利泉高启国王小佳杨晓红
- 关键词：自交不亲和蛋白质双向电泳
- 结球甘蓝叶片卷曲过程中6个生长素相关基因的克隆与表达分析被引量：2
- 2015年
- 生长素在结球甘蓝球叶向上、向内自然卷曲的过程中发挥着重要的调控作用。为挖掘重要的影响结球甘蓝叶片卷曲的生长素相关基因,通过对结球甘蓝莲座期叶片与结球期叶片的转录组进行对比分析,筛选出6个显著差异表达的生长素相关基因,分别为调控生长素动态平衡的Bo ILL6、Bo ASA1基因,控制极性运输的Bo SF21、Bo PIN4基因,参与信号转导的Bo ARF8、Bo GH3.5基因。对上述6个基因进行同源克隆,分别获得全长c DNA序列,序列分析发现6个基因均含有生长素相关的结构域。分子进化树分析发现各基因与芜菁的对应基因遗传关系最近,拟南芥次之。荧光定量PCR检测结果显示,Bo ILL6、Bo ASA1与Bo SF21的表达量变化最为显著,结球期叶片相对莲座期叶片的表达量差异均高达12倍以上,变化趋势与转录组数据分析结果基本一致,说明这3个基因可能与结球甘蓝叶片的卷曲发育密切相关。
- 蒲全明高启国张林成施松梅刘晓欢张莹毕云龙任雪松刘豫东朱利泉
- 关键词：结球甘蓝基因克隆
- ^(60)Co-γ射线辐射对花魔芋性状影响初探被引量：20
- 2004年
- 为了探索魔芋新的育种途径,采用不同剂量的60Co-γ照射已萌动花魔芋球茎,栽植后出现矮化、黄化、蕨叶、白化、叶色深绿的性状变异植株。同时,初步得到照射花魔芋半致死剂量LD50为1.5KR。
- 张盛林李川刘佩瑛高启国
- 关键词：花魔芋生物学性状诱变育种
- 甘蓝自交不亲和基因MLPK与SSP的FISH定位被引量：7
- 2009年
- 利用FISH技术,对自交不亲和基因MLPK与SSP在甘蓝有丝分裂前中期染色体、减数分裂早粗线期染色体以及伸长DNA纤维等3种分辨率水平的靶DNA载体上进行物理定位。结果表明,在有丝分裂前中期,MLPK探针信号位于一对近中着丝粒同源染色体的短臂中部,距着丝粒的百分距离约为53.41±3.16;SSP探针信号位于一对具有随体的近端着丝粒同源染色体的长臂端部,距着丝粒的百分距离约为78.36±4.26。综合3种载体上的FISH结果表明,MLPK与SSP在甘蓝染色体组中可能都只有一个同源序列座位,具有在单倍体基因组中的单拷贝性。重复FISH杂交表明,MLPK与5SrDNA位于同一对染色体。依据Armstrong的核型分析标准,初步判断MLPK与SSP可能分别位于甘蓝的2号和7号染色体,与S位点不存在连锁关系。另从比较基因组学角度对定位结果进行了讨论。
- 荣小营朱利泉王永高启国陈晓丹杨洋王小佳
- 关键词：甘蓝荧光原位杂交自交不亲和性
