霍金柱
- 作品数：3 被引量：14H指数：3
- 供职机构：重庆师范大学生命科学学院昆虫与分子生物学研究所更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 纳豆激酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2011年
- 纳豆激酶纳是从日本传统食品纳豆中发现的一类具有溶栓效果的蛋白酶,由于其具有安全,高效,作用时间长,易吸收,廉价等优点,现在正成为一个开发治疗血栓类疾病药物的研究热点。从本实验室保存的一株高溶栓的纳豆杆菌N07出发,提取总基因组DNA,利用PCR手段扩增获得了纳豆激酶长为825bp的成熟肽基因片段。构建重组表达质粒pPICZaA-NK,经EcoR I、Xba I双酶切、PCR、测序验证得出重组表达质粒上的外源基因即为825bp的目的片段;将重组质粒pPICZaA-NK用内切酶Sac I线性化后电击导入毕赤酵母X33,通过含Zeocin的YPDS平板筛选获得重组酵母。重组酵母在BMMY培养基中发酵培养,用1%甲醇诱导目的蛋白表达。用纤维蛋白平板法检测发现发酵上清具有纤溶活性,经硫酸铵盐析、透析、Sephadex-G50过柱等步骤分离得到纳豆激酶蛋白,进行SDS-PAGE鉴定表明,表达的纳豆激酶蛋白分子量为27KD。以尿激酶为标准,实验所得纳豆激酶发酵上清液溶栓活性约为195U/mL。成功的将纳豆激酶成熟肽基因在毕赤酵母X33中表达,为纳豆激酶基因工程进一步研究奠定基础。
- 敬俊锋陈斌李莹何正波霍金柱
- 关键词：纳豆激酶基因毕赤酵母克隆
- 高效纳豆激酶菌株的筛选及纳豆生产
- 纳豆(natto)是日本传统的发酵食品，在日本已经有2000年的历史。在日本已发现纳豆中的生理活性物质有上百种之多。纳豆中优质的具有生理活性物质的小分子蛋白质、多肽、短肽及氨基酸类成份，是一类在生物体中具有特殊生理功能的...
- 霍金柱
- 关键词：纳豆激酶
- 文献传递
- 高效溶栓菌株的筛选鉴定及活性测定被引量：3
- 2011年
- 以日本纳豆、重庆江津豆豉、忠县豆腐乳为原料,采用酪蛋白平板初筛、摇瓶复筛,得到18株产溶栓酶的菌株.通过纤维蛋白平板实验,从忠县豆腐乳中筛选出1株具有较高溶栓活性的菌株FR-033(登录号:HQ009804),菌株经液体发酵后获得含酶发酵液,采用硫酸铵分段盐析及sephadexG-50凝胶层析进行纯化,获得较高纯度的溶栓酶,酶活力为2 163 IU/mL.进一步对FR-033菌株的形态和生理生化特征进行研究.利用细菌16S rDNA通用引物对16S rRNA进行PCR扩增并测序,得到1444 bp长度的DNA序列,通过BLAST软件在NCBI网站收索其同源性性序列,利用PAUP4.0和MAGE4软件绘制系统发育树,结果表明:菌株FR-033与枯草芽孢杆菌(Bacil-lus subtilis)的16S rRNA序列同源性达99%以上,在系统发育树中,菌株FR-033与枯草芽孢杆菌在同一支上,且遗传距离最短;FR-033的形态及大部分生理生化特征与枯草芽孢杆菌极为相似,表明该菌株是枯草芽孢杆菌(Ba-cillus subtilis)的一个高效的产溶栓酶菌株.
- 霍金柱陈斌李莹何正波敬俊锋
- 关键词：豆腐乳枯草芽孢杆菌活性测定RRNA
