郭永龙
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂肪干细胞的三维球形培养被引量：2
- 2014年
- 背景:大多哺乳类细胞在正常生理状态下多以三维结构存在,为还原细胞本身在体内的自然状态,很多研究者开始尝试在体外对细胞进行三维培养,球形培养是一种常见的三维培养模式。目的:尝试用3种不同的方法在体外对人脂肪干细胞进行球形培养,并观察其生物学特征。方法:对提取的脂肪来源细胞进行表面Marker流式检测以及成脂成骨诱导鉴定后,证实为脂肪干细胞。先后用低黏附培养法、hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法3种方法在体外对脂肪干细胞进行球形培养,对3种方法形成球形的特点进行比较分析,并通过Imagej软件计算出3组多细胞球体的平均面积,利用Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live&Dead Cells试剂盒对3组多细胞球体进行活力检测。结果与结论:①通过流式细胞术鉴定细胞表型标志物,其中CD29,CD44,CD59完全阳性,同时成脂成骨诱导也为阳性,证实提取的细胞为脂肪干细胞。3代以内脂肪干细胞多呈长梭形,并克隆状生长。②低黏附培养法、hanging-drop培养法、Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞聚集成球形生长,但所成多细胞球形有所差异。低黏附培养法所形成的细胞球形大小不一,不易控制;而hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞形成大小均一的球形,但在大小和形成时间上有所不同。③3种不同方法所形成的球形细胞均保持较好的细胞活力。
- 王婵戴应郭永龙杨艳刘庆陈建苏
- 关键词：干细胞脂肪干细胞诱导分化国家自然科学基金
- 一种立体开睑器
- 一种立体开睑器，包括连接器、上下两个支撑臂，上下两个三维开睑结构，所述支撑臂一端与连接器一端连接，另一端与三维开睑结构连接，所述开睑器通过三维开睑结构在水平方向将眼睑打开，在竖直方向减小眼睑与眼球的贴合程度。本实用新型可...
- 谢梦圆张军陈建苏崔泽凯郭永龙
- 文献传递
- 一种无支架视网膜色素上皮细胞片的制备方法
- 本发明提供了一种三维悬浮培养多能干细胞分化为视网膜色素上皮细胞的方法属于生物科技技术领域。本发明方法包括如下步骤：将人诱导多能干细胞消化、重悬，得到单散细胞；将单散细胞接种至U/V型低粘附培养材料上，依次用视网膜神经祖细...
- 郭永龙陈建苏崔泽凯苏婷薛芸霞
- 文献传递
- Transwell 接触共培养促进单散iPSCs 生长及分化被引量：2
- 2014年
- 目的：观察Transwell接触共培养促进单散人诱导多能干细胞（inducedpluripotentstemcells， iPSCs）生长及分化的作用。方法：将1～2代牛角膜内皮细胞（corneal endothelial cells， CECs）接种在Transwell 小室底面培养8 h后，应用Accutase消化及40μm过滤处理获得单散iPSCs，将其接种到已有CECs的Transwell小室内共培养14 d，前3 d使用mTeSR1培养基，第4天开始用含10％胎牛血清的低糖DMEM培养基。分别进行实时荧光定量聚合酶链式反应（ real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction ， qPCR ）、免疫荧光、死活细胞染色及碱性磷酸酶（ alkaline phosphatase ， ALP）染色，对iPSCs多能特性表达及分化进行鉴定。设定单散iPSCs共培养组为实验组，常规培养iPSCs组为对照组（一），非共培养单散iPSCs组为对照组（二）。结果：培养牛CECs形态呈典型的六边形铺路石样外观。人iPSCs呈克隆样生长，共培养3 d后iPSCs贴壁呈单散细胞生长，免疫荧光检测未分化标志Nanog和Oct4呈阳性。 qPCR检测Nanog、Oct4和Sox2 mRNA表达，实验组与对照组（一）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。死活细胞染色显示，实验组死细胞明显减少，与对照组（二）比较差异有统计学意义（P＜0.01）。共培养14 d后，人iPSCs形态比较均一，呈多边形，体积增大，无明显克隆团块；ALP染色阴性；免疫荧光染色ZO-1、AQP1和CD31表达阳性，CD34和CD133表达阴性。 qPCR检测Oct4、Nanog和Sox2 mRNA表达明显下调，与对照组（一）比较差异有统计学意义（P＜0．01）。结论：与牛CECs共培养可增强人单散iPSCs活性，使iPSCs形态上向内皮样细胞转化，表达部分CECs的标志。 Transwell接触共培养模型可以促进单散iPSCs生长及分化。
- 刘庆郭永龙郭晓令连瑞玲陈建苏
- 关键词：诱导多能干细胞角膜内皮细胞
- 非基因重编程及生物模拟诱导促进ADSC直接重编程为角膜内皮细胞
- 第一部分 ROCK抑制剂对牛角膜内皮细胞球注射移植的影响 目的：3D球形培养和ROCK抑制剂对提高细胞活力，促进细胞增殖有很好的作用，本研究的目的是探索ROCK抑制剂对牛角膜内皮细胞（B-CECs）在体外的生长，可注射...
- 郭永龙
- 关键词：角膜内皮细胞脂肪来源干细胞注射移植
- 文献传递
- 活细胞仿生角膜前板层及其制备方法
- 本发明公开了一种活细胞仿生角膜前板层及其制备方法，包括如下步骤：A1、混合角膜基质细胞和胶原蛋白，制备具有有序胶原蛋白的仿生角膜基质层；A2、在仿生角膜基质层表面上布置细胞外基质蛋白；A3、打印上皮细胞球，培养获得活细胞...
- 张军陈建苏朱德良谢梦圆郭永龙
- 重编程诱导多功能干细胞的研究进展被引量：4
- 2014年
- 诱导多功能干细胞（ induced pluripotent stem cells，iPSCs），即通过不同的转导方法，将影响重编程的关键转录因子、RNA、蛋白或小分子化合物导入到成体细胞，使其＂返老还童＂回到胚胎干细胞状态，并能够被诱导分化产生不同的细胞类型。 iPSCs 的问世，对干细胞的发展具有划时代的意义，使得患者来源的体细胞可以被诱导成iPSCs，用于相关疾病的检测分析与干细胞治疗，规避了免疫排斥和道德论理等问题。但是由于iPSCs诱导的低效性和致瘤性，使得这个＂新星＂在临床中的应用被质疑，目前科学家一直围绕这2个核心问题展开研究，通过改进转导途径，改变重编程方法来提高它的安全性和效率，并取得了一系列喜人的结果，从而使iPSCs未来用于临床的前景变得越来越光明。
- 郭晓令刘庆王婵郭永龙余榕捷陈建苏
- 关键词：安全性有效性
- Maxadilan对人脂肪干细胞的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:探讨垂体腺苷酸环化酶激活肽Ⅰ型受体(PAC1受体)特异激动剂maxadilan对人脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)的增殖、凋亡和分化潜能的作用。方法:取人脂肪组织通过酶消化法分离培养ASCs。流式细胞术鉴定ASCs表面标志物,并进行ASCs向成骨成脂定向诱导。CCK-8法和流式细胞术检测maxadilan对ASCs活性的影响。采用波长为254 nm的紫外线(ultraviolet C,UVC)照射ASCs,CCK-8法测定不同剂量的UVC诱导ASCs凋亡后的吸光度。选择剂量为702 J/m2的UVC照射ASCs 24 h后,用流式细胞术和caspase 3和caspase 9试剂盒检测maxadilan对ASCs凋亡的影响。结果:流式细胞术检测表明细胞CD29、CD44、CD59和CD105表面抗原阳性,证实所提取的细胞是ASCs。CCK-8法检测发现80 nmol/L浓度的maxadilan对ASCs促增殖作用最强,流式细胞术分析也证实80 nmol/L maxadilan处理显著促进ASCs的增殖,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。与仅被702 J/m2UVC照射的ASCs比较,80 nmol/L maxadilan显著抑制同等剂量UVC照射ASCs所诱导的、与caspase 3和caspase 9活性相关的细胞凋亡,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。同时,2组细胞成骨和成脂的诱导分化均为阳性。结论:Maxadilan促进ASCs增殖,抑制ASCs凋亡,且不改变细胞向成骨和成脂诱导分化的潜能。Maxadilan有利于ASCs的体外生长与扩增。
- 连瑞玲郭晓令郭永龙刘庆陈建苏
- 关键词：MAXADILAN短波紫外线脂肪干细胞
- 一种带冲洗喷雾功能的开睑器
- 一种带冲洗喷雾功能的开睑器，包括连接器、两个支撑臂，两个用于打开眼睑的开睑结构以及冲洗导管，所述支撑臂一端与连接器一端连接，另一端与开睑结构连接，所述冲洗导管不止一条且并排设置。所述开睑器通过开睑结构在将上下眼睑打开，并...
- 谢梦圆张军陈建苏崔泽凯郭永龙
- 文献传递
- 损伤角膜修复重建中的ROCK抑制剂:促进角膜细胞增殖、迁移和黏附被引量：3
- 2015年
- 背景:随着人们对Rho/ROCK通路的生物学功能的了解的不断加深,新的ROCK抑制剂不断被发现,且ROCK抑制剂在角膜细胞存活、增殖和迁移中表现出良好的促进效果,ROCK抑制剂的研究能为再生医学和临床细胞移植提供更多的良好供体材料或种子细胞。目的:总结并探讨ROCK抑制剂Y-39983和Y-27632在角膜病的治疗和应用的研究进展。方法:应用计算机检索Pub Med数据库和中国知网数据库内相关文章,检索时间为2008至2015年,检索词为"corneal endothelial cell,corneal epithelial cell,ROCK inhibitor,Y-39983,Y-27632,ROCK抑制剂,角膜",从中筛选出与主题相关的部分文献。结果与结论:初检得到264篇文章,按主题相关性对文献进一步筛选,最终纳入45篇文章进行讨论。应用到眼科的ROCK抑制剂主要有两种:Y-27632和Y-39983,两者的应用主要还是基础研究与临床试验阶段。Y-27632可促进角膜缘上皮干细胞增殖及提高冻存复苏后的活性;Y-39983作为一种新型的ROCK抑制剂,其比Y-27632更有效地抑制ROCK激酶的活性,从而能更有效地促进角膜内皮的愈合。目前ROCK抑制剂在角膜治疗的研究较多,但是没有建立一种稳定的获得种子细胞的方法,每一种治疗方法都各有优缺点,而克服这些缺点以及找到快速稳定获得种子细胞的方法是今后的发展方向。
- 张仕祺朱芸菲郭永龙郑佳富陈建苏
- 关键词：角膜内皮细胞眼表重建国家自然科学基金
