詹骞
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 供职机构：武汉生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划“九五”国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 人源抗乙型肝炎病毒表面抗原基因工程IgG全抗体的表达、纯化及初步鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的对人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体进行表达、纯化及初步鉴定。方法用含Fc片段抗-HBsAg Fab抗体基因的载体pAC-HBs-Fc,与杆状病毒线性DNA共转染昆虫细胞sf9,产生重组抗-HBsAg的全抗体。以不同浓度的HBsAg包被酶标板孔,用间接ELISA法检测培养上清中抗体的表达及特异性;用蛋白G亲和层析柱进行抗体的纯化,并对纯化的抗体进行SDS-PAGE、Western blot和竞争性ELISA分析。结果上清中表达的重组IgG抗体仅与HBsAg呈阳性反应,特异性良好,纯化后其纯度达97.1%。经SDS-PAGE和Western blot分析可见,IgG抗体轻链和重链的相对分子质量分别约为27000和55000,为人源IgG抗体。CHO表达的HBsAg和血源性HBsAg能竞争性抑制该重组IgG抗体与E.coli表达的HBsAg反应,其抑制率分别为55.9%和81.9%。结论人源抗乙型肝炎病毒表面抗原的基因工程IgG全抗体可在杆状病毒载体表达系统中成功表达。
- 黄仕和周志军彭祥兵詹骞张爱华闭兰余模松梁米芳
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原基因工程抗体杆状病毒纯化
- 大规模提取体内治疗用单克隆抗体的工艺被引量：1
- 1998年
- 用两步法从WuT3细胞培养上清中提取WuT3单克隆抗体（McAb），首先将培养上清直接上SP离子交换柱，再上DEAE柱，获取提纯的McAb。该工艺的确定及放大均在Pharmacia产Biopilot中试纯化系统上进行。一次投料20L，纯化规模达2g，纯化的McAb经SDS－PAGE测定，纯度基本达到95％，免疫荧光活性为66±9％。热原质合格，支原体、残余DNA均为阴性，达到体内制剂质控要求。
- 詹骞邹昌勇雷继军冷武军陈明洁刘建朱俊铭喻远祥陈晓玲董之昌
- 关键词：单克隆抗体
- 荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体被引量：3
- 2006年
- 以R-藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体,形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4单抗,用DTT使经SPDP活化后的R-PE巯基化,再与用SMCC活化的CD4单抗交联。使用NEM终止交联反应,经Sephacryl S-300柱在AKTA FPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化。结果用R-PE标记的抗CD4单抗,检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达,经流式细胞仪(简称FACS)分析表明,R-PE标记的CD4抗体特异性保持完好,荧光强度较高,还可与用FITC标记的其它CD系列单抗配伍成双标或多标试剂。使用SPDP,SMCC异双功能交联试剂和DTT还原剂,成功地偶联了R-藻红蛋白和CD4单克隆抗体,可应用于流式细胞仪检测分析。
- 赵亚杰闭兰孙可芳端义坤詹骞金玉玲吕兰君张爱华
- 关键词：R-藻红蛋白
- 应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体被引量：6
- 1998年
- 用3．5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞，结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞，在1％人血清培养液中添加适当营养成分，可达到10％小牛血清浓度下的细胞浓度（1．5×106／ml）和单抗产量（大于50μg／ml）。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养，建立了中试培养工艺流程和质控点，收获时细胞浓度为1.0×106～1．5×106／ml，单抗产量为40～70μg／ml，平均日产单抗达1g。在3．5L、14L、75L逐级放大培养过程中，细胞支原体为阴性，收获上清中单抗免疫活性合格，热原试验合格。
- 邹昌勇杜厚明冷武军朱俊铭喻远祥雷继军陈明洁齐建新杨明詹骞刘建陈晓玲董之昌
- 关键词：杂交瘤细胞单克隆抗体生物反应器
- 百日咳毒素单克隆抗体的制备及其ELISA定量检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 目的制备百日咳毒素(Pertussis toxin,PT)的单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA用于检测PT的含量。方法采用杂交瘤技术制备PT的单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证;应用建立的方法检测武汉生物制品研究所有限责任公司(简称武汉公司)73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT含量。结果获得4株稳定的抗PT杂交瘤细胞株,抗体亚型均为IgG2a,抗体腹水ELISA效价达1∶106以上,均能与PT发生特异反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉和破伤风类毒素未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA的线性检测范围在2.50～80.00 ng/mL之间,酶标板内和板间变异系数均小于10%;PT的高、中、低浓度的回收率分别为97.41%、106.60%和89.98%;73批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中的PT质量浓度在50.00～150.00 ng/mL之间波动,说明中间产物的批间一致性及稳定性趋势良好。结论已成功制备了抗PT的单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测PT的双抗体夹心ELISA,可用于无细胞百日咳疫苗生产中PT的定量检测。
- 詹骞刘志飞彭祥兵宁浩然陈雯张爱华杨晓明
- 关键词：百日咳毒素单克隆抗体酶联免疫吸附试验
- WuT3无血清培养上清中单抗的纯化工艺建立
- 目的：对WuT3杂交瘤细胞无血清生物反应器培养上清中单克隆抗体进行分离纯化，建立中试分离纯化工艺。
方法：采用二步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化wul3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后，进行中量放大和...
- 詹骞齐建新王志友董之昌邹昌勇杜厚明冷武军雷继军杨明端义坤孙可芳侯胜桐
- 关键词：无血清培养离子交换层析纯化生物制品
- 文献传递
- 百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备及ELISA定量检测方法的建立
- 目的:制备百日咳丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA法用于FHA含量的检测。方法:采用杂交瘤技术制备FHA McAbs,并对其进行鉴定;优化ELI...
- 彭祥兵陈雯詹骞项美娟张爱华杨晓明
- 关键词：无细胞百日咳疫苗丝状血凝素单克隆抗体ELISA双抗体夹心
- 文献传递
- WuT3无血清培养上清中单克隆抗体纯化工艺的建立被引量：2
- 2007年
- 目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。
- 詹骞邹昌勇杜厚明冷武军雷继军杨明端义坤孙可芳侯胜桐齐建新王志友董之昌
- 关键词：无血清培养杂交瘤细胞单克隆抗体纯化工艺
- 百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备及ELISA定量检测方法的建立被引量：3
- 2011年
- 目的制备百日咳丝状血凝素(Filamentous hemagglutinin,FHA)单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA法用于检测FHA的含量。方法采用杂交瘤技术制备FHA单抗,并对其进行鉴定;优化ELISA系统反应条件,建立FHA双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行精密性及准确性验证;应用建立的方法检测本所12批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中FHA的含量。结果获得4株稳定分泌抗FHA单抗的杂交瘤细胞株,抗体亚型分别为IgG1和IgG2b,抗体腹水ELISA效价达1∶105～1∶106,均能与FHA发生特异性反应,而与百日咳毒素和流感病毒血凝素未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法的线性检测范围在1.56～100.00 ng/ml之间,板内和板间变异系数均小于10%;FHA高、中、低浓度的回收率分别为94.73%、108.67%和116.37%;12批无细胞百日咳疫苗生产中间样品中FHA的含量在X±2SD范围内比较稳定。结论已成功制备了抗FHA单抗,并建立了精密性和准确性均较好的定量检测FHA的双抗体夹心ELISA法,可用于无细胞百日咳疫苗生产中间产品中FHA的定量检测。
- 彭祥兵陈雯詹骞项美娟张爱华杨晓明
- 关键词：无细胞百日咳疫苗丝状血凝素酶联免疫吸附测定
- 应用无血清培养中试的三批WuT3单抗的质量分析
- 2001年
- 邹昌勇冷武军杜厚明詹骞邱义安孙可芳赵亚杰赵良
- 关键词：无血清培养
