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斑马鱼ISL1蛋白多克隆抗体的制备被引量：1: 2013年; 目的为了进一步研究ISL1作为第二生心区心脏前体细胞的分子标志在心脏发育中的功能,需要获得ISL1蛋白并制备其抗体。方法根据已报道的ISL1基因序列,以斑马鱼mRNA为模板进行PCR扩增得到ISL1部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。将重组质粒进行酶切测序鉴定,然后利用大肠杆菌E.coli BL21对该重组质粒进行表达。经过IPTG诱导,采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的his-ISL1融合蛋白免疫新西兰大白兔制备ISL1多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价。结果获得了ISL1原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗ISL1多克隆抗体。结论本实验为ISL1在斑马鱼心脏发育中的新功能的进一步研究奠定了基础。; 任恋唐超刘宪楚李容戴悦彭佩莹莫小阳; 关键词：斑马鱼融合蛋白多克隆抗体

HCMV 60-mer寡核苷酸诊断芯片的探针与微阵列设计被引量：1: 2006年; 目的设计用于人巨细胞病毒(HCM V)诊断的60-m er长链寡核苷酸探针及微阵列。方法利用生物学软件A rray D es igner2.0,针对HCM V特异且保守的序列设计60-m er探针,利用BLA ST功能将设计探针在G enB ank数据库进行序列比对分析,筛选得到HCM V特异性O ligo探针,根据各探针的属性特点设计芯片阵列。结果设计得到24条解链温度(Tm值)相近、长度均一的60-m er O ligo探针及其芯片阵列,拟打印成DNA芯片用于HCM V检测。结论利用病原体的生物信息学资料及A rray D es igner2.0生物软件,能有效的进行病毒检测芯片的设计。; 张亚莉马文丽赵海全莫小阳郑文岭; 关键词：人巨细胞病毒寡核苷酸序列分析基因芯片

KLHL31促进C2C12细胞的肌原分化被引量：2: 2010年; 人类KLHL31基因是本实验室已克隆的基因,其蛋白质含有保守的BTB和串连重复的Kelch结构域,已有报道表明其在人类成体骨骼肌和心肌组织中特异表达。RT-PCR分析表明在C2C12细胞肌原分化过程中过表达KLHL31能够提高肌原分化标志基因MyoD与Myogenin的转录水平;荧光报告系统分析发现过表达KLHL31能够增强肌原分化相关基因MCK启动子的活性,表明KLHL31能够促进C2C12细胞的肌原分化。; 梁洁刘仕杰宋怀婷邓云莫小阳万永奇李永青袁婺州江志钢吴秀山王跃群; 关键词：C2C12细胞 MYOD MYOGENIN

斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测被引量：1: 2013年; Fbxl5为F-box基因家族的一员,目前研究发现其与心脏的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体。通过桥式PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Fbxl5基因片段,将其克隆入表达载体pET-28a,转化至大肠杆菌Rosseta中。用IPTG诱导Fbxl5重组质粒得到His-Fbxl5的融合蛋白。这个融合蛋白用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化的His-Fbxl5融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用Western Blot检测,获得了Fbxl5原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Fbxl5多克隆抗体。随后检测了Fbxl5在斑马鱼胚胎和成体组织中蛋白的表达,通过基因芯片分析在Fbxl5-MO和Std胚胎样品的mRNA含量差异.所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Fbxl5多克隆抗体,为Fbxl5功能的进一步研究奠定了基础。; 盛力翔冯德峰罗世锋吴秀山戴国莫小阳; 关键词：融合蛋白多克隆抗体基因芯片

斑马鱼loc558117基因的多克隆抗体制备被引量：4: 2011年; loc558117基因是trim45在斑马鱼中的同源基因,小鼠及果蝇研究结果表明该基因与血细胞发育有关.利用PCR技术扩增斑马鱼loc558117基因部分编码区,并将其插入到原核表达载体pET-28a中,经过酶切和测序鉴定后,将重组质粒(pET-28a-loc558117)转入Rosseta感受态细胞,通过IPTG诱导表达融合蛋白,his柱子亲和纯化,将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体.获得了loc558117原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗loc558117多克隆抗体.为进一步研究loc558117功能提供了有力工具.; 李志姚立群雷孝锋王琨莫小阳吴秀山; 关键词：斑马鱼融合蛋白多克隆抗体

H1N1流感病毒感染心肌细胞对Wnt信号途径的影响: 为了揭示流感病毒H1N1通过Wnt信号调控心肌炎发生的致病机制,我们建立了A/PuertoRico/8/34(H1N1)流感病毒感染H9C2细胞模型,采用灭活的病毒感染H9C2细胞系作为对照组,通过细胞组织学形态和RT-...; 刘宪楚陈则吴秀山莫小阳唐超任恋李容史艳江志钢常海燕方芳李永青

小鼠Lbh抗体的制备和鉴定: 2010年; 利用小鼠作为模式动物进一步研究人类Lbh(Limb-bud-and-heart)在心脏发育中的功能。提取正常成年小鼠的心脏总RNA,RT-PCR扩增小鼠Lbh的全长开放阅读框,构建原核表达重组质粒pGEX4T-1-Lbh。转化大肠杆菌BL21后,摇菌培养到OD_(600)为0.5～0.6时,加IPTG诱导融合蛋白的表达。将纯化的GST-Lbh融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。免疫印迹法检测表明该抗体有较好的特异性,可用于该基因结构和功能的研究。; 谭小华王跃群邓云万永奇莫小阳李永青吴秀山; 关键词：抗体原核表达

湖南省两栖类新记录——桂北琴蛙及其系统发育分析: 2024年; 2023年4月21日,在湖南南山国家公园开展野生动物多样性调查过程中,于白云湖(26°18′36.23″N,110°20′05.43″E;海拔606 m)采集到2号蛙类标本(1雌1雄),经初步形态鉴定,其与桂北琴蛙(Nidirana guibeiensis)特征相似。对采集标本的线粒体16S r RNA进行PCR扩增测序后,构建琴蛙属(Nidirana)部分物种贝叶斯系统发育树,结果显示该蛙类标本与桂北琴蛙聚为一支,且具有较高的支持率(1.00);基于Kimura双参数模型估算,该标本与广西兴安县采集的桂北琴蛙标本间的遗传距离为0,远小于琴蛙属不同种间的遗传距离(3.2%~8.7%)。经形态特征鉴定和系统发育分析,确定该蛙类标本为无尾目(Anura)蛙科(Ranidae)琴蛙属(Nidirana)桂北琴蛙,为湖南省两栖动物新记录种。; 马艺涵李辉朱乐强刘佳昱刘五洲张荣华聂美红张志强莫小阳; 关键词：新记录种

CXXC5多克隆抗体的制备及表达研究被引量：1: 2011年; CXXC5基因是从人类胚胎心脏的cDNA文库中克隆出来的一个人类锌指基因,包含zf-CXXC5结构域,该基因编码322个氨基酸,在物种进化上高度保守。为了进一步研究该基因的功能,需要获得CXXC5蛋白并制备其抗体.通过PCR扩增方法扩增得到了CXXC5部分编码区序列,然后将其连接到PGEX-4T-1上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,再通过自身诱导法诱导表达重组质粒的融合蛋白.通过割胶回收纯化融合蛋白。免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western blot检测抗体活性。结果表明,实验获得了高质量的多克隆抗体。; 王西君廖鹏王跃群邓云莫小阳袁婺洲万永奇吴秀山李永青; 关键词：融合蛋白多克隆抗体

人巨细胞病毒诱导ECV304血管内皮样细胞凋亡被引量：2: 2006年; 目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染ECV304血管内皮样细胞的致病机制。方法常规方法传代细胞和接种病毒。以PCR法和间接免疫荧光法检测病毒即刻早期基因(IE gene)及其蛋白表达;相差显微镜及电子显微镜观察病毒感染后细胞和细胞器形态变化;DNA梯度法和流式细胞术检测细胞凋亡。结果病毒感染后72 h开始出现胞体变圆、缩小、脱壁,胞质内颗粒增多,细胞边缘模糊不清的特征,可明显检测出病毒特异IE gene及其蛋白表达;电镜结果显示病毒感染96 h后,胞质内明显空泡化,细胞膜微绒毛减少,核染色质浓集、边缘化,线粒体出现溶酶体化、空泡化和自噬现象,呈早期凋亡特征;DNA梯度电泳结果显示感染细胞DNA片段化特征的条带;流式细胞仪检测发现感染4 d和6 d时,细胞调亡率分别为4.1%和45.7%。结论巨细胞病毒在体外细胞培养中可诱导ECV304血管内皮样细胞的凋亡。; 张亚莉马文丽莫小阳赵海全柯昌文郑焕英郑文岭; 关键词：人巨细胞病毒 ECV304细胞

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莫小阳

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