翁敏杰
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市卫生局科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达被引量：5
- 2012年
- 目的检测胚胎期小鼠Tbx18在mRNA及蛋白水平的表达情况,了解Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的时空表达模式。方法用整体原位杂交技术检测小鼠整胚TBX18 mRNA的表达,用X-gal染色检测Tbx18-Cre/Rosa26R/LacZ双杂合基因谱系示踪模型小鼠胚胎的报告基因LacZ蛋白的表达,用荧光定量PCR检测小鼠胚胎期心脏mRNA的定量表达。结果发现在小鼠胚胎期9.5～10.5 d转录因子Tbx18主要在前体心外膜表达,由前体心外膜逐渐迁移定位于心外膜;在11.5～12.5 d的小鼠胚胎Tbx18主要定位于心脏、上下肢、体节及上下唇鄂区域;大于12.5 d的小鼠胚胎Tbx18除了上述部位外还定位于肾、输尿管、膀胱等区域。结论转录因子Tbx18在小鼠胚胎发育过程中的表达具有时空特异性,对小鼠心脏的发育可能起着至关重要的作用;同时在上下肢、体节、唇鄂、肾、输尿管、膀胱的发育中也可能起非常重要的作用。
- 蒲荻杜建霖李晓群翁敏杰佘强
- 关键词：整体原位杂交小鼠胚胎发育
- 成年小鼠实验性心肌梗死后胚胎基因Tbx18的表达情况
- 2013年
- 目的:检测实验性心肌梗死后成年小鼠胚胎基因Tbx18的表达情况,了解成年小鼠心肌损伤后胚胎基因Tbx18的时空表达特点。方法:90只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(sham组)及心梗组,用右侧卧位结扎冠状动脉左前降支的方法建立成年小鼠心肌梗死模型,分别用荧光定量PCR和Western blot检测小鼠心肌梗死后1、3、5、7 d心脏梗死和周边区Tbx18 mRNA及蛋白表达情况,并与假手术组相比较。结果:手术组梗死及周边区心肌组织Tbx18 mRNA在心梗后3 d及5 d较假手术组有明显升高(F值分别为2 778.88、462.36,P值均=0.000);心梗后小鼠心肌组织Tbx18蛋白表达水平在心梗后3 d及5 d明显升高(与心梗后1 d相比,t值分别为7.982、9.307,P值均=0.000),同PCR结果相符;心梗后3 d及5 d免疫荧光结果提示表达部位主要位于梗死区及其周边区域。结论:成年小鼠心肌梗死后胚胎基因Tbx18有一过性激活,心梗后3 d及5 d表达明显,其表达部位主要在梗死及周边区域。
- 汪浩李晓群翁敏杰高凌志杜建霖佘强
- 关键词：心肌梗死
- Tbx18-Cre基因敲入小鼠Cre基因保真性研究
- 2013年
- 目的揭示Tbx18-Cre基因敲入小鼠cre基因表达的保真性。方法用实时荧光定量PCR（Real—timePCR）快速检测基因敲入小鼠外源基因Cre的相对拷贝数；JunctionPCR验证基因敲入小鼠整合位点Th。18-Cre的纯合性：利用Tbx18Cre。一纯合子小鼠模型验证Cre基因对下游基因的影响；利用Tbx18-Cre／Rosa26R．LacZ示踪模型，通过检测LacZ的表达，验证Cre基因的时空保真性。结果实时荧光定量PCR验证rkl8基因敲入小鼠外源基因Cre的相对拷贝数准确，JunctionPCR验证其整合位点特异。Thx18Cre-/-纯合子小鼠模型能特异性阻断转录因子Tbx18的表达，引起信号下游基因CX40、CX43、CX45的表达明砂升高。Tbx18-Cre／Rosa26R—LacZ示踪模型LacZ蛋白表达部位与Tbx18mRNA表达部位一致。结论7阢18一Cre基因敲入小鼠中Cre基因具有高度准确的时空保真性和特异性。
- 颜玉玲翁敏杰杜建霖佘强
- 关键词：整合位点
- Tbx18-Cre基因敲入小鼠的繁殖、鉴定及其应用被引量：1
- 2012年
- 为了探讨Tbx18-Cre基因敲入小鼠(Tbx18:Cre knock-in Mus musculus)的繁殖、鉴定及Tbx18基因敲除小鼠和遗传示踪小鼠模型的应用,将Tbx18-Cre基因敲入杂合子小鼠进行繁殖,应用PCR法鉴定其子代基因型。将子代雌雄杂合子小鼠互交,应用H.E染色观察Tbx18基因敲除胚鼠心的形态学变化。将杂合子小鼠与RosaEYFP报告小鼠交配,应用心冰冻切片技术观察Tbx18:Cre/Rosa26REYFP双转基因遗传示踪胚鼠心内Tbx18阳性心外膜祖细胞发育命运。结果表明,用于繁殖、基因敲除研究及基因遗传示踪的子代基因型均符合孟德尔遗传规律。同时心H.E染色和心冰冻切片发现,Tbx18敲除小鼠心窦房结发育存在缺陷,而Tbx18阳性心外膜祖细胞是心发育重要的祖细胞来源。研究结果揭示,Tbx18-Cre基因敲除小鼠是研究先天性心脏病发病机制的理想模式动物,Tbx18阳性心外膜祖细胞可能是心脏病患者心脏修复和再生潜在的种子细胞。
- 张进刘亚杰翁敏杰佘强
- 关键词：基因敲入
- 小鼠Tbx18+心外膜祖细胞向血管平滑肌细胞分化潜能的实验研究
- 第一部分，Tbx18-Cre基因敲入小鼠Cre重组酶保真性研究 目的：揭示Tbx18-Cre基因敲入小鼠中Cre重组酶表达的保真性。 方法：利用实时荧光定量PCR法快速检测不同基因型小鼠中Cre基因的相对拷贝数差异及...
- 翁敏杰
- 关键词：定向分化心肌组织
- 文献传递
- 高效建立成年小鼠心肌梗死模型被引量：1
- 2012年
- 目的探讨高效建立小鼠心肌梗死模型的方法。方法分别采用右侧卧位及仰卧位两种方法来建立模型,通过观察心电图变化、检测cTNT、病理检测等方法来证明模型成功,并以比较其存活率、手术时间、出血量、肺损伤率等来评价两种方法的高效性。结果结扎后心肌局部变苍白,心电图ST-T段抬高,cTNT呈阳性,心肌纤维化,右侧卧位方法建模小鼠存活率显著提高。结论右侧卧位横切口开胸结扎冠脉是一种更高效的建模方法。
- 李晓群高凌志张进杜建霖蒲荻刘亚杰翁敏杰佘强
- 关键词：心肌梗死右侧卧位纤维化
- 一管酒精法提取转基因小鼠胚胎组织基因组的实验方法及应用被引量：2
- 2012年
- 目的:优化提取基因组的方法,建立高效、简便、快速提取基因组DNA的方法,用于大批量转基因小鼠鉴定。方法:用一管酒精基因组DNA抽提法抽提基因组DNA。结果:经过分光光度法检测基因组DNA浓度、纯度及电泳分析DNA质量,显示一管酒精抽提法提取的基因组与经典酚/氯仿提取法提取的基因组产量、纯度及质量没有明显差别;酶切全基因组后,2种方法获得的基因组都可以被酶完全切开;两者模板都能成功应用PCR扩增来鉴定基因敲入小鼠并可应用于基因组测序及Real-time PCR检测基因敲入小鼠中外源基因并鉴定其相对拷贝数。结论:一管酒精基因组抽提法得到的DNA质量可靠,可高效、简便、快速鉴定转基因小鼠及进行基因组DNA酶切、测序、Real-time PCR等后续实验。
- 翁敏杰杜建霖蒲荻张进李晓群刘亚杰佘强
- 关键词：基因敲入基因组DNA
