缪静
- 作品数：101 被引量：558H指数：11
- 供职机构：鲁东大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金烟台市科学技术发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生化学工程更多>>
- 亮氨酸拉链促进蛋白质剪接介导的双载体转凝血Ⅷ因子基因被引量：2
- 2012年
- 作者最近基于蛋白内含子(intein)的双载体转B区缺失型凝血Ⅷ因子(BDD-FⅧ)基因研究证明,表达后的重、轻链可通过蛋白质反式剪接成为共价连接的完整BDD-FⅧ分子并发挥凝血生物活性,但存在不完全剪接的前体蛋白。本文试图通过将具有特异性强相互作用的亮氨酸拉链引入intein序列,提高反式剪接的效率,用双载体系统向培养的COS-7细胞共转融合intein的重链和轻链基因,通过瞬时表达观察了细胞内BDD-FⅧ的剪接和分泌至培养上清液的剪接BDD-FⅧ量和生物活性。结果显示,Western blotting检测到共转基因细胞内明显增强的BDD-FⅧ剪接,表现为前体蛋白的减少;分别用ELISA和Coatest法分析共转基因细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性为(106±12)ng.mL-1和(0.89±0.11)U.mL-1,明显高于无亮氨酸拉链的intein融合重链和轻链基因共转基因细胞[(72±10)ng.mL-1和(0.62±0.07)U.mL-1],而且不依赖细胞机制的蛋白质剪接反应明显增强,表现为混合培养的转重链和轻链基因细胞上清液中增加的剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性[(36±11)ng.mL-1和(0.28±0.09)U.mL-1]。结果表明,亮氨酸拉链可通过增强融合于重链和轻链的intein间的相互作用提高蛋白质反式剪接的效率,改善基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因的效果,为进一步的动物体内基于蛋白质剪接的双腺相关病毒(AAV)载体转FⅧ基因研究提供了实验依据。
- 朱甫祥杨树德刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：INTEIN蛋白质反式剪接亮氨酸拉链
- Cys突变体凝血Ⅷ因子的蛋白质反式剪接
- 2012年
- 为改善蛋白质反式剪接效率,将B-区缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)重链的Tyr664和轻链的Thr1826突变为Cys,双载体共转COS-7细胞,观察了细胞内蛋白质剪接、二硫键形成和细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FVIII量和活性。Western blotting检测结果显示,Cys突变可在细胞内形成链间二硫键,剪接BDD-FVIII蛋白量明显增加;双夹心ELISA检测分泌的剪接BDD-FVIII为(128±24)ng.mL/1,明显高于对照(89±15)ng.mL/1;Coatest法检测结果显示,细胞分泌的凝血活性为(0.94±0.08)u.mL/1,也明显高于对照(0.62±0.15)u.mL/1。结果表明,链间二硫键形成可显著提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-Ⅷ基因作用,为进一步动物体内实验提供了依据。
- 朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：蛋白质反式剪接转基因
- 一种反刍动物固态饲料自动饲喂系统
- 本实用新型公开了一种反刍动物固态饲料自动饲喂系统，包括底座，所述底座通过摆动装置连接有若干储料仓，所述储料仓与底座之间相对倾斜设置，储料仓上设有进料口，相邻的两个储料仓之间固定连接，所述储料仓的侧壁上贯通连接有称量仓，所...
- 缪静高文俊程显好张玉香邹宁
- 文献传递
- 无花果果醋发酵工艺优化被引量：8
- 2014年
- 采用响应面分析法对无花果果醋的培养条件进行优化。在单因素试验的基础上,进行Box-Behnken中心组合设计,应用响应面法对影响无花果果醋发酵的3个因素(转速、温度、接种量)进行研究,考察各因素及其交互作用对无花果果醋发酵的影响。建立影响因素与响应值(醋酸产量)之间的回归方程,根据方程寻优得出最佳条件为转速220r/min,温度33℃,接种量5.39%。该条件下发酵,醋酸含量可以达到52g/L,与理论预测值吻合。
- 缪静殷曰彩冯志彬程仕伟
- 关键词：无花果果醋发酵
- 脱氧萎镰菌醇通过下调GRP78提高双链转FVⅢ基因细胞分泌重链和生物活性
- 2011年
- 双链转凝血VⅢ因子(FVⅢ)基因是克服AAV载体容量限制的有效方法,但重链分泌的低效性带来链不均衡性。本文旨在用脱氧萎镰菌醇(deoxynivalenol,DON)降解内质网分子伴侣蛋白GRP78,通过减少重链与GRP78的结合提高重链分泌,改善双链转FVⅢ基因的功效。用DON处理双链共转基因细胞,观察了双链转FVⅢ基因293细胞分泌的重链和FVⅢ活性。结果显示,用500 ng.mL-1 DON处理细胞3 h后,GRP78蛋白水平明显降低,细胞的生长不受明显影响;单独转FVIII重链基因的DON处理细胞分泌的重链量[(59±11)ng.mL-1]明显高于对照细胞[(15±4)ng.mL-1],双链共转基因时重链的分泌量进一步增加,为(146±34)ng.mL-1,活性达到(0.66±0.15)U.mL-1,明显高于双链转基因对照细胞[分别为(76±17)ng.mL-1和(0.35±0.09)U.mL-1]。结果表明,DON可通过下调GRP78改善重链的分泌性,提高双链转FVⅢ基因的功效,为进一步动物体内双AAV载体转FVⅢ基因提供了实验依据。
- 朱甫祥杨树德刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 壳聚糖酶产生菌筛选及产酶培养优化被引量：2
- 2013年
- 以胶体壳聚糖为唯一碳源和DNS酶活鉴定法从烟台近海土壤中分离得到一株高产壳聚糖酶菌株,初步鉴定为白色链霉菌.经发酵培养组分与条件优化,获得最佳培养组分(g.L-1):葡萄糖55,壳聚糖0.5,胰蛋白胨1,尿素8,(NH4)2SO42,NH4Cl 1,KH2PO43,FeSO4·7H2O 1,ZnSO4·7H2O 2,CaCl2·6H2O2,MnSO4·H2O2,NaCl2.最适产酶pH 7.0,温度28℃,装液量50 mL,接种量2%.优化后菌株培养48 h时产酶量为51.65 U.mL-1.
- 程仕伟杨立红洪波缪静
- 关键词：壳聚糖酶菌株筛选白色链霉菌发酵优化
- 液态发酵法生产云芝胞内糖肽被引量：8
- 2004年
- 通过筛选比较 6株云芝菌种 ,获得液态发酵生产云芝糖肽较佳菌株CV S和CV H ,经优化摇瓶发酵 ,将菌株CV S放大至 3 0L罐发酵 ,2 8℃发酵 4d ,菌丝体干重达 2 4 9g/L ,菌丝体破碎后 ,超滤浓缩 ,醇沉干燥后 ,云芝胞内糖肽产率达 2 2 3 g/L ,糖肽总糖为 5 5 5 8% ,肽 3 3 5 3 % ,经HPLC检测其分子质量高于 1 0ku的有 2个组分 ,分别为 742 2和 2 5 2ku ,所提取的产品 ,其出峰时间与标准品基本一致 ,总糖、单糖、肽含量符合国家药品标准WS—XG 0 2 1 2 0 0 2的要求。
- 余晓斌缪静胡卫珍陈坤濮文林
- 关键词：国家药品标准云芝糖肽CV总糖液态发酵法
- 一种蜜环菌子实体的人工栽培方法、其培养基及其应用
- 本发明公开了一种蜜环菌子实体栽培的方法，其步骤包括：准备蜜环菌菌种；配制培养基：其配方重量比组分为：18~25％的粮食作物，75~82％的水；在种子培养基中培养蜜环菌，获得的蜜环菌种子接种到制得的培养基上，15~30℃下...
- 程显好刘林德刘静葛宜和高兴喜张秋胜缪静屈慧鸽
- 文献传递
- 大肠杆菌BL21(DE3)中DnaE intein介导ABCA1蛋白的连接
- 2009年
- 【目的】利用SspDnaEintein的蛋白质反式剪接技术研究在大肠杆菌中对ABCA1基因表达产物的连接作用。【方法】将ABCA1的cDNA于满足剪接所需的保守性氨基酸Cys978密码子前断裂为N端和C端两部分,分别与天然存在的反式作用SspDnaEintein的123个氨基酸的N端和36个氨基酸的C端编码序列融合,构建到原核表达载体pET-28a(+)。转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞,诱导表达后观察重组蛋白的表达和ABCA1的连接。【结果】转化菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析显示预期大小的ABCA1剪接蛋白条带,并进一步为His-Tag抗体进行的Western blotting证实。【结论】结果表明SspDnaEintein可有效催化ABCA1的连接,为进一步研究利用双腺相关病毒(AAV)载体转运ABCA1基因,克服单个AAV载体容量限制进行由ABCA1基因突变所致Tangier病的基因治疗奠定了基础。
- 朱甫祥缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：INTEIN蛋白质反式剪接ABCA1
- 斑玉蕈酸性磷酸酯酶的酶学性质研究被引量：8
- 2011年
- 以斑玉蕈为材料分别从菌盖和菌柄中提取一种酸性磷酸酯酶(ACPase,EC.3.1.3.2),进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,从菌盖中分离到3个酶组分,从菌柄中分离到4个酶组分,分别对菌盖和菌柄的酶Ⅰ和酶Ⅰ′进行聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳纯度鉴定,均呈现单一酶蛋白带。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定酶Ⅰ和酶Ⅰ′的相对分子量均为65kDa,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤测定分析,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均为单亚基蛋白。紫外吸收光谱(UV)测定结果表明,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均呈现两个吸收峰,分别在220nm和280nm处;酶Ⅰ和酶Ⅰ′等电点(pI)分别为5.4和5.0;水解对硝基苯磷酸二钠(PNPP)最适pH值分别为5.0和4.6;酶促反应的最适温度均为50℃,并均有热激活现象,热激活温度均为60℃;耐热实验表明,酶Ⅰ和酶Ⅰ′在最适温度下温育45min后,酶活力分别为最高酶活力的60.2%和57.3%,酶Ⅰ在温育20min时表现最大活性,酶Ⅰ′在温育25min时表现最大活性;酶Ⅰ和酶Ⅰ′在60℃保温25min活力分别下降至最大活力的19.33%和15.25%,且保温时间越短酶活性越大。酶Ⅰ和酶Ⅰ′的酶促反应初速度(υ)分别为17.1×10-3μmol/min和11.3×10-3μmol/min;最大反应速度(Vmax)分别为27.6×10-3μmol/min和85.0×10-3μmol/min,米氏常数(Km)值分别为4.095×10-3mol/L和36.3×10-3mol/L,酶Ⅰ的专一性常数Kcat/Km=3.846×105(mol/L)-1S-1,酶Ⅰ′的Kcat/Km=1.11×105(mol/L)-1S-1,酶Ⅰ的Kcat/Km比酶Ⅰ′的Kcat/Km大3.46倍。重金属离子Hg2+、Ag+、Cd2+和Pb2+对酶均有抑制作用。
- 杨立红高兴喜缪静图力古尔
- 关键词：酸性磷酸酯酶动力学特性酶活力
