王小柯
- 作品数：9 被引量：16H指数：3
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一个编码XAP2同源蛋白的人视网膜cDNA的克隆
- 1999年
- 用同源筛选法从人视网膜ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个与ＸＡＰ２ｃＤＮＡ有高度同源的ｃＤＮＡ序列，长１３８６ｂｐ，其第１７—１１７１ｎｔ为一个完整的开放阅读框（ＯＲＦ），编码３８４个氨基酸，其Ｃ端较ＸＡＰ２长５５个氨基酸；３ＵＴＲ长２１８ｂｐ，１３５５—１３６０ｎｔ为加尾信号序列ＡＡＴＡＡＡ，１３７７—１３８６ｎｔ为ＰｏｌｙＡ序列。由该ｃＤＮＡＯＲＦ推导的蛋白质被命名为ＡＩＰＨ，它在ＧｅｎＢａｎｋ的登录号为：ＡＦ０３８４３７。它与ＸＡＰ２的氨基酸一致率为４２％，相似率为６１．７％。计算机分析结果显示：推导的ＡＩＰＨ蛋白与乙肝病毒Ｘ蛋白（ＨＢＸ）有三个较高同源的区域。其中两个对应于ＨＢＸ的反式转录激活功能结构域。ＡＩＰＨｃＤＮＡ与人体１６种组织ｍＲＮＡ的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示：这个来源于视网膜的转录本也可在骨骼肌和心脏中见到，杂交带长度约１．９Ｋｂ；此外在骨骼肌和心脏及其它１４种组织中还可见到另一个长约５．
- 王小柯余龙傅强张民屠强胡培蓉赵寿元
- 关键词：HBXCDNA克隆视网膜
- 人纺锤体素cDNA的克隆、定位和组织表达谱分析被引量：3
- 2000年
- 纺锤体是细胞有丝分裂及配子成熟分裂过程中特有的亚细胞结构，它的结构和功能的正常与否直接影响生物个体的发育、分化、生长和繁殖．最近的研究表明，小鼠Ｍｏｓ／ＭＡＰＫ途径对纺锤体的作用与纺锤体素（ｓｐｉｎｄｌｉｎ）蛋白的磷酸化过程密切相关．采用同源筛选方法从人睾丸ｃＤＮＡ分子库中克隆到一个与小鼠纺锤体素基因（ Ｓｐｉｎ）编码序列高度同源，长 １９２９ｂｐ的 ｃＤＮＡ片段．计算机软件分析发现，该 ｃＤＮＡ的 ２７１－９８４ ｎｔ是一个完整的开放阅读框（ＯＲＦ），由其编码的 ２３７个氨基酸与小鼠Ｓｐｉｎ蛋白的氨基酸序列呈９６％的高度同源，并与小鼠的配子发生特异转录的相关蛋白 Ｓｓｔｙ也有 ５ ６％的同源度．经查新证实它是一个全新的基因编码序列后，以 ＳＰＩＮ（ｈｕｍａ ｓｐｉｎｄｌｉｎ）命名在 ＧｅｎＢａｎｋ登录（ ＡＦ０８７８６４）． Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示：该基因在人体卵巢、睾丸、心、脑。肾、胰腺、胎盘、脾脏中以 ４．８ ｋｂ的转录本表达，但在睾丸组织中还特有一个长约 ２．０ ｋｂ的转录本表达．然而在胸腺、小肠未见明显的杂交条带．应用ＲＨ制图方法，揭示ＳＰＩＮ基因定位于９号染色体９ｑ２２．１～２２．３区带．
- 王小柯余龙张宏来陈政屠强陈靓秋丁建波高洁赵寿元
- 关键词：CDNA克隆组织表达谱细胞分裂
- 人C2H2型锌指蛋白基因ZNF194全长cDNA的克隆
- 1999年
- 用一个含有锌指编码序列的人cDNA片段(L2～9)作为探针杂交筛选人肝组织cDNA分子库,得到8个杂交阳性克隆,经测序和拼接后,将其整合为一条长1838bp的cDNA序列.该序列的221～1642bp为一个完整的开放阅读框,编码了一个由473个氨基酸组成的蛋白质,1～220 bp为5’-UTR,1643～1838 bp为3’-UTR,在1801～1806bp有一个加尾信号序列AATAAA,3’端为18 bp的polyA.编码蛋白质已被HGMW命名为ZNF194.全长cDNA在GenBank登录为No.U95044.ZNF194蛋白的N端有一个KRAB-A box,C端含10个C_2H_2型锌指结构.该基因呈泛在性表达,经用FISH方法定位,结果显示它位于染色体19q13.3～13.
- 吴国俊余龙郑其平孙喜元王小柯赵寿元
- 关键词：锌指蛋白基因染色体CDNA克隆
- 乙肝病毒X蛋白相关基因XAP2的同源基因AIPH全长cDNA的克隆与组织表达谱分析
- 乙肝病毒X蛋白(HBX)具有反式转录激活作用,其与慢性乙型肝炎迁延转化导致的原发 性肝细胞癌(HCC)发生密切相关.该研究采用基因组信息学方法,从GenBank库中筛选到一组与XAP2有高度同源的EST<,s>片段(H3...
- 王小柯
- 关键词：HBX
- 文献传递
- 乙型肝炎病毒X蛋白结合抑制蛋白
- 本发明提供了一种新的多核苷酸,由该多核苷酸编码的蛋白,以及利用所述多核苷酸生产蛋白的方法。更具体的说,本发明的蛋白是乙型肝炎病毒X蛋白结合抑制蛋白。
- 余龙王小柯傅强张宏来赵勇
- 文献传递
- 人类β-1,4-半乳糖苷转移酶Ⅲ基因的分离与克隆
- 1999年
- 以人、牛、鼠、鸡、蜗牛的β-1,4-半乳糖苷转移酶催化区的编码核苷酸序列为探针,在NCBI GenBank EST数据库中进行同源搜寻,获得若干有高度同源的EST.在拼接序列的两端设计引物,以从人胎盘cDNA文库中PCR扩增获得的片段为探针,在人胎盘cDNA分子库中步移获得一个长1,907bp的cDNA片段,包含一个长1,179bp的开放阅读框(ORF,open reading frame),编码393个氨基酸残基。该基因与已知的人类β1,4-GalTI的氨基酸同源性为43.8%,在蛋白质催化区的同源性更高达60.9%。表达谱分析发现该基因在人体16种组织中均有不同程度的表达,转录本大小约为2.4kb.通过该cDNA人/啮齿类杂种细胞株DNA Southern杂交将该基因定位在1号染色体。
- 张民王小柯胡培蓉屠强毕安定余龙赵寿元
- 关键词：半乳糖苷基因分离基因克隆
- 用PCR快速筛选递次截短的DNA克隆
- 1998年
- 目的为了建立一种快速、简便而准确地筛选递次截短的ＤＮＡ克隆的技术，加速对基因全长ｃＤＮＡ或ＤＮＡ大片段的测序和鉴定。方法在载体多克隆位点两侧设计引物，直接ＰＣＲ扩增插入片段，以此为基础选择系列缺失亚克隆，并与常规酶切法作比较。结果根据ＰＣＲ产物大小排序，准确地鉴定出系列缺失亚克隆，并可将ＰＣＲ产物直接用于ＰＣＲ循环测序，比酶切法分辨率高，操作步骤简化，筛选时间短。结果所建立的ＰＣＲ快速筛选法不仅是一种行之有效的鉴定方法，而且可以显著地节省时间和实验材料。该方法也可适用于其它各种质粒载体。
- 胡培蓉余龙张民范玉新王小柯赵寿元
- 关键词：DNA克隆聚合酶链反应
- 遗传性视神经病线粒体DNA原发性位点突变的研究被引量：6
- 1999年
- 目的 探讨线粒体ＤＮＡ（ｍ ｔＤＮＡ）１１７７８、３４６０、１４４８４位点突变与遗传性视神经病（Ｌｅｂｅｒ′ｓｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ ｏｐｔｉｃ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ，Ｌｅｂｅｒ病）之间的关系。 方法 应用多聚酶链式反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测临床一对可疑Ｌｅｂｅｒ病同卵双生子患者及其亲属，有突变者，对突变序列进行序列测定。 结果 ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测同卵双生子及母亲１１７７８、３４６０位点所在的ＤＮＡ区段存在突变，１４４８４ 位点所在的ＤＮＡ区段均未检出突变，将１１７７８位点所在ＤＮＡ区段克隆后测序显示１１７７８位点仍为ＣＧＣ，但发现一个新的突变位点（１１９１５Ｔ→Ａ）。 结论 Ｌｅｂｅｒ病发病机制为ｍ ｔＤＮＡ点突变。多位点突变也被看作为Ｌｅｂｅｒ病的病因。１１９１５位点可能也是多位点突变之一。可用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对临床有视神经萎缩和视神经炎可疑为Ｌｅｂｅｒ病患者（包括家系成员）做出遗传性视神经病的基因诊断。
- 张群芳童绎卢光琇余龙王小柯
- 关键词：视神经萎缩遗传性线粒体点突变
