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内耳发育及毛细胞再生的研究: 李华伟王正敏王宇澄赵燕玲刘宏朱雅颖沈云珍; 该项目为内耳发育及其机制的研究和内耳毛细胞再生的研究。系统的研究了内耳发育及其发育机制，通过对内耳发育机制的研究，探讨了Pax-2、Islet-1基因与内耳前体细胞、感觉上皮细胞、神经节神经元的增殖和分化的关系，证实了E...; 关键词：; 关键词：内耳发育毛细胞再生

环氧乙烷消毒的明胶海绵对耳螺旋神经节细胞的毒性研究被引量：5: 2003年; 目的 :研究并观察环氧乙烷消毒的明胶海绵对耳螺旋神经节细胞的毒性作用。方法 :用比色法测定明胶海绵的环氧乙烷残留量 ,通过透射电镜观察明胶海绵放置豚鼠听泡内 3个月后 ,耳蜗螺旋神经节细胞的超微结构变化。结果 :明胶海绵的环氧乙烷残留量平均为 4 38.32mg。螺旋神经节超微结构显示 :I型螺旋神经节细胞线粒体基质电子密度增大 ,嵴模糊不清 ,细胞质内出现空泡样结构。部分神经节细胞及其外周的卫星细胞溶解破坏 ,呈典型细胞死亡征象。卫星细胞髓鞘松解 ,出现空化。结论 :明胶海绵的环氧乙烷残留量高出国家标准约4 0倍。; 沈雁沈云珍王正敏陈念祖王东蕾; 关键词：环氧乙烷明胶海绵螺旋神经节细胞毒性研究

糖尿病大鼠耳蜗病变的形态学观察被引量：11: 2008年; 目的观察糖尿病大鼠耳蜗超微结构变化，了解病变的范围和程度。方法大鼠皮下注射链脲霉素诱发糖尿病，分别于造模后3个月及5个月进行耳蜗基底膜铺片、扫描电镜及透射电镜观察。结果造模3个月后外毛细胞纤毛排列紊乱、倒伏，有融合，外毛细胞和螺旋神经节细胞内细胞器肿胀，线粒体空泡化、嵴断裂，血管纹毛细血管基底膜增厚；5个月后病变进一步加重。内毛细胞在各个时期无明显病变。结论糖尿病可引起大鼠耳蜗外毛细胞、螺旋神经节细胞及神经纤维等的器质性病变，病变以线粒体的损伤最为明显。; 张永胜张玉海肖大江沈云珍李雯; 关键词：糖尿病耳蜗线粒体显微镜检查

胚胎小鼠耳蜗感觉上皮的形态发生被引量：3: 2005年; 目的了解胚胎小鼠耳蜗感觉上皮发育的形态学特征及规律。方法利用光镜、扫描电镜、透射电镜观察从胚胎第8天到刚出生期间C57BL/6小鼠耳蜗感觉上皮发育过程中的形态变化。结果C57BL/6小鼠胚胎第10.5天耳蜗开始发育,感觉上皮由高柱状上皮细胞组成,到胚胎第14天才开始分化为原始的毛细胞;胚胎第16天耳蜗底转Corti器原基形成,毛细胞和支持细胞初具雏形;到出生时,耳蜗形态基本成熟,但底转Corti器仅趋向成熟,蜗尖才形成Corti器原基。结论小鼠耳蜗感觉上皮发育的形态变化在胚胎第13天到出生时最明显,感觉细胞都来源于一种高柱状上皮细胞,到胚胎第14天开始分化为毛细胞;而Corti器的分化成熟是从底转向顶转进行的,出生时尚未完全发育成熟。; 刘少锋周梁李华伟沈云珍; 关键词：小鼠形态学毛细胞胚胎发育

新生大鼠耳蜗增殖细胞的培养鉴定及超微结构观察被引量：9: 2007年; 目的研究新生大鼠耳蜗内是否存在增殖细胞,以及该增殖细胞能分化为何种细胞。方法分离新生 SD 大鼠耳蜗细胞并进行培养,加入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2-demoxyuridine,BrdU)检测细胞的增殖状态,通过免疫荧光鉴定细胞球及分化细胞的性质。分离48个耳蜗 Corti 器,采用数字表格法随机分成4组进行细胞培养:对照组、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)组、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)组和 EGF+bFGF 组,每组12个,定量计数单个耳蜗培养细胞球的数量,结果进行方差分析。采用透射和扫描电镜观察细胞球的超微结构。结果耳蜗 Corti 器细胞培养可见细胞球形成,90.1%球内细胞 BrdU 表达阳性,且大部分细胞巢蛋白表达阳性。分化细胞表达毛细胞标志物肌球蛋白7A、espin 及鬼笔环肽阳性,神经元标志物神经丝蛋白(neurofilament M,NF-M)表达阳性,并且可见肌球蛋白7A 和 BrdU,espin 和 BrdU,以及 NF-M和 BedU 双标阳性的分化细胞。对照绀平均(±s,以下同)每个耳蜗 Corti 器的增殖细胞数量为(45.3±23.0)个,EGF 组(86.2±34.1)个,bFGF 组(96.5±33.6)个,EGF+bFGF 组(131.2±47.0)个。除EGF 组和 bFGF 组之间 P>0.05外,其余各组之间 P 值均<0.05,差异具有统计学意义。扫描和透射电镜下细胞球内细胞呈网球形,大小均匀一致,表面具有众多微绒毛。胞质内有丰富的内质网、微管、微丝和线粒体等细胞骨架结构和细胞器,相邻细胞之间可见紧密连接、桥粒与缝隙连接。结论大鼠耳蜗内存在增殖细胞,可分化为具有纤毛样结构的毛细胞及神经元。EGF 和 bFGF 均可诱导增殖细胞分裂增殖。该增殖细胞的超微结构显示其具有早期幼稚细胞发育的特征。; 江红群王正敏沈云珍李雯; 关键词：毛细胞耳蜗成纤维细胞生长因子表皮生长因子

前庭手术显微解剖学的研究: 1999年; 目的通过人颞骨前庭显微解剖研究,寻求人工镫骨设计的合理性。方法人颞骨组织学技术制成与前庭相关的连续切片,进行观察和测量。结果在镫骨足板前后纵轴的中线平面,球囊离足板内面前1/3～1/2区很相近。结论入窗1.0mm的人工镫骨宜向前作45°斜截。足端斜截人工镫骨植入是安全又能足够推动外淋巴液,有利传声。; 王正敏沈云珍; 关键词：人工镫骨耳硬化症球囊椭圆囊

两种内淋巴给药方式对豚鼠耳蜗功能和形态的影响被引量：3: 2009年; 目的观察经耳蜗侧壁打孔（侧壁径路）和经圆窗膜、基底膜穿刺（双膜径路）两种内淋巴系统给药方式对豚鼠耳蜗整体形态结构和功能的影响并比较两种方式的优劣。方法40只正常健康杂色豚鼠分为A、B两组（每组20只），所有动物左侧为给药耳，右侧为非给药耳。A组采用侧壁径路进入中阶灌注携带增强型绿色荧光蛋白基因的5型重组腺病毒（adenovims5-enhanced green fluorescence protein，AdS—EGFP）5μl；B组采用双膜径路进入中阶灌注AdS-EGFP5μ1。给药前后行听眭脑干反应（ABR）测试，观察听功能改变。耳蜗冰冻切片直接荧光观察腺病毒分布，HE染色观察手术径路的愈合情况。基底膜铺片鬼笔环肽染色观察毛细胞受损情况，扫描电镜观察局部损害情况。结果所有动物术后均存活。穿刺部位修复良好，耳蜗的完整性得以保持。EGFP在Corti器和血管纹内壁细胞内标记明显，表明两种给药径路都可以将药物成功注入内淋巴系统。A组证实成功14只（70％），手术前后ABR反应阈（声压级）变化[（33．1±10．3）dB]与对侧非给药耳[（9．4±3．9）dB]比较差异具有统计学意义（F=46．34，P=0．0005）；B组证实成功8只（40％）手术前后阈值改变[（2．5±3．8）dB]与对侧耳[（2．5±3．8）dB]比较差异无统计学意义（F=0．00，P=1．000）。两种方法在部分动物中都有药物渗漏入外淋巴的现象，给药局部产生炎性反应，侧壁径路对毛细胞的损害范围大于双膜径路。结论两种手术径路都可将药物成功注入豚鼠耳蜗的内淋巴系统中，局部有炎性反应，术后耳蜗的完整性可以获得完全恢复。侧壁径路对豚鼠耳蜗毛细胞缺失和ABR反应阈的影响大于双膜径路，但是经侧壁径路进入中阶的手术成功率高于双膜径路，选择何种灌注径路需要根据实验要求来定。; 韩朝迟放鲁黄一波李雯沈云珍高文元; 关键词：耳蜗内淋巴投药途径诱发电位脑干

庆大霉素损伤后豚鼠前庭感觉上皮细胞凋亡和再生被引量：1: 2000年; 目的　研究豚鼠前庭毛细胞庆大霉素损伤后前庭感觉上皮细胞凋亡和细胞增殖之间的关系。方法　成年豚鼠肌肉注射庆大霉素 10 0mg/kg/d连续 14d ,停用庆大霉素后1d和 10d ,腹腔注射Brdu 30 0mg/kg 6h后处死实验动物。免疫组化显色壶腹嵴中可见Brdu标记细胞 ,同时应用TUNEL技术原位显示凋亡细胞 ,观察应用庆大霉素后 1d和 10d壶腹嵴毛细胞损伤区域细胞凋亡和细胞增殖状况。结果　损伤后 1d ,可见TUNEL标记的凋亡细胞位于壶腹嵴的腔面细胞层 ,支持细胞层未发现TUNEL阳性细胞 ,及Brdu阳性细胞 ;损伤后修复 10d ,可见TUNEL阳性细胞位于壶腹嵴腔面细胞层 ,同时壶腹嵴支持细胞层出现Brdu阳性细胞 ,壶腹腔面细胞层未发现增殖细胞。结论　研究显示细胞凋亡是庆大霉素损伤后哺乳动物前庭毛细胞的一种死亡方式 ,并且细胞凋亡和细胞增殖发生的时间和部位一致。; 李华伟王正敏沈云珍; 关键词：庆大霉素耳毒性细胞凋亡

大鼠耳蜗标本制作的体会: 2003年; 在有关如何获得动物耳蜗完整的基底膜标本方面,以往大多选取豚鼠作为制作对象,但由于豚鼠的耳蜗比较高大,前庭阶、鼓阶、以及蜗管都较宽敞,在进行标本制作时相对容易些,而其它用于研究的哺乳动物如大鼠的耳蜗则比较矮小,蜗壁骨质也较豚鼠为厚、硬,故在处理时存在一定的特殊性.; 王宇澄王正敏沈云珍田洁; 关键词：扫描电镜免疫细胞化学

出生后大鼠螺旋神经节神经元损伤的病理变化被引量：1: 2003年; 目的　证实出生后第 2周大鼠螺旋神经节神经元对耳毒性药物敏感。方法　选用出生后 7dSD大鼠36只 ,连续 14d肌注新霉素 ,每天 15 0mg/kg ,分别于停药后 1、7、14、2 8d、3月和 6月各处死 6只。取平行蜗轴的超薄切片 ,透射电镜下观察底回、中回螺旋神经节神经元。结果　大鼠螺旋神经节神经元变性继发于毛细胞和支持结构的损伤 ;停药 1d组存在细胞凋亡现象 ;损伤早期神经元发育延迟 ,损伤晚期神经元由成熟向未分化型改变。结论　出生后第 2周是大鼠螺旋神经节神经元发育的重要阶段。; 朱雅颖李华伟王正敏沈云珍; 关键词：螺旋神经节神经元损伤药物敏感性氨基甙类抗生素动物实验

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沈云珍

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