柴进 作品数:27 被引量:77 H指数:7 供职机构: 第三军医大学西南医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市自然科学基金 重庆市科技攻关计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 文化科学 生物学 更多>>
HepG2细胞中TNFα通过NF-κB信号通路下调GSTA1/GSTA4表达(英文) 2016年 谷胱甘肽巯基转移酶α1/α4(GSTA1/A4)是体内重要的解毒酶,可降低多种内、外源性毒性化合物的毒性.然而,胆汁淤积病人肝细胞内G STA1/A4的表达是下调的,下调机制尚不清楚.本研究通过肿瘤坏死因子α(TNFα)处理人肝癌细胞Hep G2细胞,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测GSTA1/A4、核因子κB(NF-κB)和核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达.发现TNFα在m RNA水平和蛋白质水平均抑制GSTA1/A4表达,且呈剂量与时间依赖关系.干扰NF-κB信号通路,可减弱T NFα对G STA1/A4表达的抑制作用.以上结果表明,在Hep G2细胞中,TNFα可通过激活N F-κB信号通路抑制G STA1/A4表达. 杨龙 熊志勇 张樑君 封欣禅 陈琨 李彦 程英 龙庆林 肖天利 陈磊 闫文慧 李灵欣 柴进 陈文生关键词:TNFΑ NF-ΚB 胆汁淤积 不同剂量利福平致小鼠肝损伤特点的研究 被引量:7 2017年 目的观察连续2周给予不同剂量利福平(RIF)引起小鼠肝损伤的现象及特点。方法给予24只小鼠不同剂量的利福平(0、100、200、400 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续灌胃2周,设为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组4组(每组6只),末次给药后6 h取材,收集小鼠血液和肝组织样品进行血清学检测并观察小鼠肝病理改变。结果所有小鼠实验期均未死亡。高剂量组和对照组比较TBA、DBIL、TBIL均有升高,ALT、AST、ALP无明显变化。中剂量组和对照组比较TBA、DBIL有升高,TBIL、ALT、AST、ALP无明显变化。低剂量组和对照组比较TBA、DBIL、TBIL、ALT、AST、ALP均无明显变化。各实验组小鼠肝均发生明显病理改变;HE染色显示肝细胞水肿、羽毛样变性与脂肪变性,并伴有大量炎性细胞浸润,个别可见散在的胆汁淤积;随着利福平浓度的增大,肝病理改变越明显。电镜照片示各实验组肝组织电镜照片可见肝细胞包浆中充满大量的脂肪滴,部分毛细胆管轻微扩张、其内可见不同电子密度的不规则状胆汁样物质,也是随利福平浓度的增大肝病理改变越明显。结论连续2周给予不同剂量的利福平均可引起小鼠肝损伤,主要表现为肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润和散在胆汁淤积,利福平对小鼠肝的损伤呈浓度依赖性,但其机制有待进一步研究。 张刚 陈磊 陈静 柴进 汤旭东 陈文生关键词:利福平 肝损伤 胆汁淤积 小鼠 抗结核药物 肝毒性 芒果苷上调HepG2细胞膜蛋白MRP3和核受体PXR、CPF表达 被引量:8 2011年 目的体外HepG2细胞培养观察芒果苷(mangiferin)对多耐药相关蛋白3(multidrug resistance-associate protein 3,MRP3)和核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用芒果苷刺激HepG2细胞72 h后,分别抽提细胞RNA、膜蛋白及核蛋白,采用半定量RT-PCR和蛋白免疫印迹检测膜转运蛋白MRP3和核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。熊脱氧胆酸(ursode-oxycholic acid,UDCA)处理的HepG2细胞作为阳性对照、DMSO处理细胞为阴性对照。结果芒果苷可显著刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA(比阴性对照组高3.0倍,P<0.05)和蛋白(比阴性对照组高3.3倍,P<0.05)表达,其作用强于UDCA。芒果苷也可明显上调核受体PXR[mRNA水平增高1.7倍(P<0.05),蛋白水平增高3.7倍(P<0.01)]、CPF[mRNA水平增高2.1倍(P<0.05),蛋白水平增高4.9倍(P<0.05)]的表达。结论芒果苷刺激肝癌细胞HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的表达上调可能与核受体PXR、CPF途径相关。 张艳梅 柴进 阳勇 张婷 罗维早 钟国跃 陈文生关键词:芒果苷 UDCA MRP3 PXR 川西獐牙菜醇提物对大鼠胆汁酸转运蛋白Mrp4、转录因子Nrf2表达的影响 被引量:9 2015年 目的观察川西獐牙菜醇提物对肝细胞胆汁酸转运蛋白Mrp4(multidrug resistanceassociated protein 4,Mrp4)、转录因子Nrf2的调控作用。方法将14只SD大鼠分为2组:正常对照组、川西獐牙菜醇提物组,每组7只。分别用生理盐水、川西獐牙菜醇提物处理7 d后,收集组织标本,免疫组化检测Mrp3、Mrp4在肝脏的表达变化,Western blot及RT-PCR检测胆汁酸转运蛋白Mrp3、Mrp4和转录因子Nrf2、核受体Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化。结果在mRNA水平,RT-q PCR结果显示川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组增加2.1倍,同时,Mrp3表达增加1.7,转录因子Nrf2表达增高1.8倍,核受体Lrh-1表达增高1.4倍;在蛋白水平,Western blot结果表明川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组组增加2.5倍,同时,Mrp3表达增高3.0倍,转录因子Nrf2表达增高2.3倍,核受体Lrh-1表达增高1.3倍,而免疫荧光结果则进一步证实了RT-q PCR与Western blot的结果,显示川西獐牙菜醇提物组Mrp3、Mrp4的表达较正常对照组组明显增强。结论川西獐牙菜醇提物能够刺激肝细胞表面胆汁酸转运蛋白Mrp4表达增高,这种调控作用可能与Nrf2相关。 杜晓煌 柴进 封欣婵 张樑君 程英 陈文生 方勇飞关键词:胆汁淤积 川西獐牙菜醇提物对内毒素所致大鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用 被引量:12 2014年 目的观察川西獐牙菜醇提物对内毒素所致大鼠胆汁淤积性肝损伤的保护作用,以及对肝细胞胆汁酸转运蛋白胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)和核受体(farnesoid X-receptor,FXR)的影响。方法 20只SD雄性大鼠采用随机分为4组(每组5只):生理盐水组、川西獐牙菜醇提物组、LPS+生理盐水组、LPS+川西獐牙菜醇提物组,所有大鼠均于处理后16 h取材。统计分析各组实验大鼠肝功能指标(ALT,AST、TBIL)、胆汁流速;采用Western blot及RT-PCR观察生理盐水组、川西獐牙菜醇提物组大鼠肝组织中BSEP和FXR在转录以及蛋白水平的表达。结果 LPS+生理盐水组与生理盐水组相比肝损伤指标ALT、AST、TBIL明显升高(P<0.05),胆汁流速明显下降(P<0.05);而LPS+川西獐牙菜醇提物组与LPS+生理盐水组相比ALT、AST、TBIL明显下降(P<0.05),胆汁流速明显升高(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物组与生理盐水组相比BSEP蛋白水平的表达明显增高(P<0.05);与BSEP调控密切相关的核受体FXR蛋白和mRNA表达变化均不明显。LPS+生理盐水组与生理盐水组相比相比BSEP蛋白水平的表达明显降低(P<0.05);而LPS+川西獐牙菜醇提物组与LPS+生理盐水组相比BSEP蛋白水平的表达明显增高(P<0.05);但各组之间BSEP mRNA变化均不明显。结论川西獐牙菜醇提物能明显减轻内毒素诱导大鼠胆汁淤积性肝损伤,这可能与上调肝细胞胆酸转运蛋白BSEP的表达有关,而且BSEP表达的上调可能是通过转录后水平调节的。 高宇 柴进 李绍雪 刘畅 程英 刘潇聪 连伟 陈文生关键词:胆汁淤积 肝损伤 BSEP Radixin定点突变过表达对HepG2细胞膜转运蛋白Bsep的影响 被引量:2 2014年 目的构建pcDNA3.1-RDX定点突变真核过表达质粒,研究其在胆汁淤积时对HepG2细胞膜转运蛋白胆盐输出泵(bile salt export pump,Bsep)定位表达的影响。方法从含有RDX野生型质粒中,利用PCR方法钓取RDX野生型基因片段并以野生型为基础进行定点突变,PCR扩增后转入pcDNA3.1载体,其产物转化DH-5α感受态细胞。对长出的单克隆进行菌落PCR鉴定,再对PCR鉴定阳性的克隆进行测序和比对分析,比对正确即为构建成功的目的质粒。将目的质粒转染HepG2细胞,经G418筛选构建稳转细胞株。提取各株细胞的总蛋白,检测磷酸化RDX是否影响HepG2细胞膜上转运蛋白Bsep的表达。结果 PCR和测序结果均证实pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDX T564A过表达载体构建成功。蛋白免疫印迹表明,与转染pcDNA-3.1-RDX-WT的HepG2相比,转染pcDNA-3.1-T564D的HepG2的Bsep膜蛋白表达量显著增加(P<0.05),而转染pcDNA-3.1-T564A的HepG2的Bsep膜蛋白表达量有所下降(P>0.05)。结论成功构建了pcDNA3.1-RDX WT、pcDNA3.1-RDX T564D、pcDNA3.1-RDX T564A过表达载体,并证实RDX的磷酸化能增强HepG2细胞膜上Bsep的表达。 封欣婵 柴进 程英 陈文生关键词:PCDNA3 川西獐牙菜醇提物上调HepG2细胞膜转运蛋白MRP3、核转录因子SP1及核受体CPF、PXR表达 被引量:6 2014年 目的体外培养HepG2细胞观察川西獐牙菜醇提物(Swertia mussitii Franch)对多药耐药相关蛋白3(multidrug resistance protein 3,MRP3)、核转录因子SP1(specificity protein 1 transcription factor,SP1)及核受体孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)、CYP7A启动子结合因子(CYP7A promoter-binding factor,CPF)表达的影响。方法用MTT比色法检测川西獐牙菜醇提物的最佳作用浓度,再分别于0、12、24、48、72h刺激HepG2细胞,抽提细胞的RNA、总蛋白和核蛋白,采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术检测膜转运蛋白MRP3、转录因子SP1及核受体PXR、CPF在转录与蛋白水平的表达变化。每个时间点设立阴性对照DMSO组和阳性对照熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid,UDCA)组。结果川西獐牙菜醇提物可显著诱导HepG2细胞膜转运蛋白MRP3的mRNA和蛋白水平的高表达,其作用强于UDCA(P<0.05)。川西獐牙菜醇提物也可明显上调核转录因子SP1及核受体PXR的mRNA和蛋白表达水平,作用强于UDCA。对CPF表达的上调作用与UDCA相当(P<0.05)。结论川西獐牙菜醇提物可刺激HepG2细胞膜转运蛋白MRP3上调,且有可能是通过核转录因子SP1及核受体PXR、CPF上调其表达。 刘畅 李绍雪 高宇 柴进 张全 陈文生关键词:核转录因子SP1 人胃癌组织中gp78和KAI1表达水平及其临床意义 被引量:1 2010年 目的检测人正常胃黏膜及胃癌组织中gp78和KAI1表达水平并探讨两者在胃癌发生过程中的临床意义。方法分别应用Westernblot和免疫组织化学方法检测18例正常胃黏膜和65例胃癌组织中gp78和KAI1的表达情况。结果Westernblot结果表明,65例胃癌组织中有25例(38.5%)gp78水平升高,27例(41.5%)KAI1水平降低,其中13例(20.0%)既出现gp78水平升高又出现KAI1水平降低。与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中gp78的表达水平明显升高(P<0.01),而KAI1的表达水平明显下调(P<0.01)。免疫组织化学提示,65例胃癌组织中21例(32.3%)gp78阳性表达率升高,22例(33.8%)KAI1阳性表达率降低,其中10例(15.4%)既出现gp78阳性表达率升高又出现KAI1阳性表达率降低。Spearman相关性分析表明,胃癌组织中gp78和KAI1表达水平呈现明显的负相关(r=-0.908,P<0.05)。同时,随着淋巴转移、肿瘤浸润以及脉管浸润程度加重,胃癌组织中gp78表达水平明显升高,而KAI1表达水平显著降低。而在年龄、性别等因素上gp78和KAI1表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论gp78和KAI1在胃癌的发生、发展过程中起着重要的作用。gp78的过表达导致抑癌基因KAI1的降解增多可能是胃癌浸润、转移的机制之一。 许福源 李楠 柴进 张艳梅 唐波 牛嫣阳 彭志红 陈文生关键词:胃肿瘤 肿瘤抑制蛋白质类 免疫组织化学 肝癌组织中gp78蛋白与KAI1蛋白的相互关系研究 被引量:1 2010年 目的探讨gp78蛋白与肝癌组织中的肿瘤转移抑制基因KAI1蛋白可能存在的相互关系。方法收集肝癌组织30例及与其相对应的癌旁组织标本30例。用MHCC-97肝癌细胞接种裸鼠肝脏,产生肝脏原位肿瘤9例及肿瘤转移灶14例,收集肿瘤组织和正常肝脏组织。采用免疫组织化学和蛋白质印迹技术检测相关组织中gp78蛋白及KAI1蛋白的表达。结果蛋白质印迹结果表明,人肝癌组织中gp78蛋白的表达水平(0.350±0.143)明显高于人癌旁组织(0.036±0.003,P=0.016),而KAI1蛋白的表达水平(0.036±0.008)则明显低于人癌旁组织(1.173±0.124,P=0.003)。与癌旁组织相比,30例肝癌组织中24例(80%)gp78水平升高,20例(66.7%)KAI1水平降低;9例裸鼠肝癌组织中8例(88.9%)gp78水平升高,6例(66.7%)KAI1水平降低;14例肝癌转移灶样本中,12例(85.7%)gp78水平升高,13例(92.8%)KAI1水平降低。免疫组织化学结果显示,30例人肝癌组织中,有22例(73.3%)gp78呈强阳性表达(分值≥5分),19例(63.3%)KAI1阳性表达较低(分值≤2分);9例裸鼠原位肝癌组织gp78阳性表达率均较高(分值≥5分),有7例(77.8%)KAI1阳性表达率较低(分值≤1分);14例裸鼠肝癌转移灶中,有12例(85.7%)gp78阳性率表达增高,11例(78.6%)则表现为KAI1表达降低。结论gp78蛋白和肿瘤转移抑制基因KAI1蛋白在肝癌的发生发展,尤其是肝癌的转移过程中发挥了重要作用。与正常肝癌组织相比,原位肝癌和肝癌转移灶的gp78表达水平升高,而KAI1表达水平降低。gp78的过表达导致肿瘤转移抑制因子KAI1表达水平降低,可能是肝癌转移浸润的机制之一。 李楠 许福源 夏锋 柴进 张艳梅 彭志红 陈磊 肖天利 陈文生芒果苷通过核受体CPF和PXR途径上调HepG2细胞MRP3的表达 背景:MRP3属于ABC家族,主要分布于极性化肝细胞的基底侧膜,以胆汁酸为主要转运底物.MRP3在人和大鼠的正常肝脏中表达非常低,但是在BDL大鼠胆汁淤积模型以及Dubin-Johnson syndrom 等某些人类疾病... 柴进 张艳梅 阳勇 罗维早 钟国跃 陈文生关键词:芒果苷 受体 PXR HEPG2细胞 胆汁淤积