杨松
- 作品数：10 被引量：21H指数：3
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- 人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的鉴定与富集
- 第一部分人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的鉴定
目的:探讨人白血病细胞系KG-1a中是否存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。
方法:瑞氏染色和吖啶橙染色分别观察白血病细胞系KG...
- 杨松
- 关键词：肿瘤干细胞白血病侧群细胞白血病干细胞集落形成
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- 5-FU富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞被引量：2
- 2008年
- 探讨利用细胞周期特异性药物5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)从人白血病细胞系KG-1a中富集肿瘤干细胞样亚群细胞。体外药物敏感试验确定5-FU的最佳作用浓度和作用时间;KG-1a细胞经5-FU药物处理后,流式细胞术检测存活细胞群中CD34+CD38-亚群细胞比例;吖啶橙染色观察细胞内的核酸组成;RT-PCR半定量检测细胞内三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ATP-binding cassette superfamily Gmember2,ABCG2)mRNA的表达;半固体培养观察细胞的集落形成能力。结果显示,50μg/ml5-FU作用KG-1a细胞4天后,CD34+CD38-亚群细胞比例提高10倍以上;吖啶橙染色可见大部分细胞核酸以发出绿色荧光的DNA为主,RNA含量低;此类细胞高表达ABCG2 mRNA水平;而药物处理后细胞集落形成数量较未处理细胞明显减少。研究结果表明,利用5-FU能够杀死增殖期细胞的性质,成功建立体外药物筛选富集人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的方法。
- 杨松钟晓明张伶高玉洁骆展鹏何鹏
- 关键词：白血病干细胞5-氟尿嘧啶集落形成
- 人白血病细胞系KG-1a中肿瘤干细胞样亚群细胞的初步研究被引量：3
- 2008年
- 探讨人白血病细胞系KG-1a中是否存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。瑞氏染色和吖啶橙染色分别观察白血病细胞系KG-1a细胞形态和RNA含量;流式细胞术检测细胞周期分布;免疫组化和流式细胞术检测KG-1a细胞CD34的表达;流式细胞术检测CD34+CD38–亚群细胞;烟酸己可碱Hoechst33342染色后用荧光显微镜观察KG-1a细胞中侧群(side population,SP)样细胞所占比例。结果显示,白血病细胞系KG-1a细胞核仁易见,形态原始;部分细胞RNA含量低,细胞处于G0/G1期的比例占15.5%。绝大多数细胞的胞浆和胞膜皆表达CD34抗原,KG-1a中CD34+细胞占96.3%,CD34+CD38–亚群细胞占7.02%;SP样细胞大致比例为7.60%。本研究表明,人白血病细胞系KG-1a中存在具有肿瘤干细胞样生物学特性的亚群细胞。
- 杨松钟晓明张伶骆展鹏何鹏高玉洁
- 关键词：肿瘤干细胞免疫表型侧群细胞
- 肿瘤干细胞分离纯化及鉴定的研究策略被引量：4
- 2007年
- 随着白血病、乳腺癌、脑肿瘤干细胞的分离鉴定成功,肿瘤干细胞(tumor stem cell,TSC)学说逐渐成熟起来。分离纯化和鉴定是TSC研究的首要工作和前提,TSC的分离纯化主要有根据细胞表型特征和生物学特性而建立的两大类方法,TSC的鉴定分为体外实验和动物致瘤实验。TSC的分离、纯化及其成功鉴定将为肿瘤临床诊断、治疗、预后及其基础研究带来新的理念。
- 杨松张伶
- 关键词：肿瘤肿瘤干细胞
- 急性髓系白血病核仁磷酸蛋白基因及其突变检测方法的建立被引量：1
- 2008年
- 本研究建立PCR技术检测白血病细胞核仁磷酸蛋白(nucleophosm in,NPM)基因及突变的方法。以白血病细胞系和白血病临床标本为研究对象,首先采用RT-PCR检测NPM mRNA表达水平,其次应用PCR方法检测NPM第12外显子,并对扩增产物进行测序分析,最后以插入NPM A型突变cDNA的质粒作为阳性模板,建立PCR检测NPM突变的方法并进行方法学评价,并采用此方法直接检测白血病细胞中是否存在NPM基因突变。结果表明:白血病细胞系NPM mRNA表达水平较正常单个核细胞对照组高,23例急性髓系白血病标本均不同程度地高表达NPM mRNA;采用PCR扩增联合测序分析发现,髓系白血病细胞系(THP1和K562)NPM基因组第12外显子无突变,但K562细胞NPM基因3′非编码区存在1个T碱基缺失;建立直接针对NPM A型突变cDNA的PCR方法,能特异扩增NPM A型突变基因;该方法重复性好,批内、批间变异系数分别为1.6%和3.1%,灵敏度为100pg cDNA;采用此方法从23例白血病临床标本中检出2例NPM突变阳性。结论:建立了检测NPM mRNA水平和A型突变的实验方法,发现白血病细胞高表达NPM mRNA水平,部分白血病患者NPM基因发生A型突变。
- 何鹏张伶骆展鹏杨松钟晓明蔡晓钟
- 关键词：急性髓系白血病基因突变基因检测聚合酶链反应
- 骨桥蛋白与高血压血管重构的关系及他汀的干预影响
- 目的:通过观察肾性高血压大鼠和血压正常大鼠胸主动脉管壁骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的特点,探讨OPN是否与高血压动脉血管重构有关,并进一步研究阿托伐他汀钙对肾性高血压大鼠胸主动脉OPN表达及重构的影响。...
- 杨松
- 关键词：骨桥蛋白高血压血管重构
- 文献传递
- VEGF对白血病树突状细胞诱导CTL杀伤活性的影响
- 2008年
- 目的观察血管内皮生长因子(VEGF)对白血病树突状细胞(DC)激活的CTL体外杀伤活性的影响。方法K562白血病细胞经5μmol/L VEGF反义寡核苷酸作用24 h后诱导生成DC。流式细胞术检测DC特征性表型(CD40、CD86、HLA-DR和CD83)的表达,MTT法检测DC激发的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对靶细胞的杀伤活性。ELISA法检测DC上清中IL-12的表达。结果与正常K562诱生的DC(K562-DC)相比,K562经反义寡核苷酸下调VEGF表达后培养出具有典型特征的DC(AS-K562-DC),它不仅高表达DC免疫表型,而且激活的CTL对K562细胞具有更强的杀伤效应,同时具有更强的IL-12分泌能力(P均<0.05)。结论抑制白血病细胞VEGF表达,能够促进白血病源DC的分化和成熟,激活的CTL在体外具有更强的抗白血病效应。
- 李维杨松张伶涂植光
- 关键词：树突状细胞白血病细胞毒性T淋巴细胞
- 白血病患者循环DNA定量和完整性分析及其临床意义被引量：8
- 2010年
- 目的分析白血病患者血浆DNA的含量及完整性,并探讨其临床意义。方法以2008年6月-2009年3月收治的60例白血病患者作为实验组,同期在门诊行体检的健康正常人20例、血液系统良性病变者20例、淋巴瘤患者10例、实体肿瘤患者20例(食管癌6例、原发性肝癌4例、鼻咽癌5例、乳腺癌5例)作为对照组(n=70)。测定两组患者的血浆DNA含量,比较两组间、不同FAB分型的急性髓细胞白血病患者间、实验组不同年龄段及不同病程患者间血浆DNA水平的差异。采用聚合酶链反应扩增β-actin大片段和小片段产物并行琼脂糖凝胶电泳观察,比较实验组患者与对照组中正常人血浆DNA的差异。结果实验组患者血浆DNA浓度(413.2±118.4μg/L)约为对照组中正常人(19.6±7.9μg/L)的21倍(P<0.05),且高于对照组的其他疾病患者(P<0.05)。实验组血浆DNA浓度与年龄及疾病病程有关,不同FAB型别的急性髓细胞白血病患者血浆DNA含量无显著差异。实验组血浆DNA电泳呈现大小不一的片段,而且其血浆DNA中可扩增出β-actin的大、小片段产物,完整性较高。正常人仅可见少量小片段DNA。结论白血病患者血浆DNA含量和完整性明显增高,对白血病的诊断及预后判断具有重要价值。
- 高玉洁杨再林钟晓明邵会媛杨松肖玲白垚蔡晓钟张伶
- 关键词：白血病DNA血浆
- RNAi重组体抑制白血病K562细胞系中NPM1基因的表达被引量：3
- 2008年
- 目的构建核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin1,NPM1)特异性的RNAi真核表达载体,观察对白血病K562细胞系NPM1表达的抑制作用。方法采用RT-PCR检测白血病细胞系(THP1和K562)和急性髓系白血病(AML)细胞NPM1mRNA水平。设计合成2条针对NPM1基因并具有小发夹结构的DNA序列,经退火形成互补双链,再克隆至载体pGenSil-1中构建含NPM1的RNAi重组体,经酶切及测序鉴定后通过脂质体转染K562细胞,同时设立pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组。采用RT-PCR检测各组转染细胞中NPM1的mRNA水平。结果白血病细胞系和AML细胞均高表达NPM1 mRNA。针对人NPM1基因的RNAi重组体构建成功,并能够稳定转染K562细胞,导致白血病细胞NPM1mR-NA相对表达量下降64%,而pGenSil-1转染组和pGenSil-1/neg转染组未能下调NPM1表达。结论白血病细胞高表达NPM1基因,其mRNA表达水平能够被靶向NPM1的RNAi重组体特异性地下调。
- 何鹏骆展鹏张伶杨松钟晓明高玉洁
- 关键词：RNA干扰白血病K562细胞
- 核磷蛋白A型突变体对髓性白血病细胞系增殖的影响被引量：1
- 2008年
- 目的研究核磷蛋白A型突变体基因转染对人髓性白血病细胞系体外增殖的影响。方法构建含核磷蛋白A型突变基因(NPM-mA)的真核表达质粒pEGFPC1-NPM-mA,选择NPM-mA阴性、抑癌基因p14ARF有无缺失的两株人髓性白血病细胞KG-1a和K562作为靶细胞,将pEGFPC1-NPM-mA重组质粒和pEGFPC1空质粒分别转染白血病细胞,以未转染组为对照。用RT-PCR和免疫组化来分析转染细胞目的基因mRNA和蛋白质的表达。采用台盼蓝拒染法计数活细胞,绘制转染前后生长曲线,观察细胞体外生长的改变。结果转染后的两种白血病细胞株表达NPM-mA mRNA,胞浆内NPM-mA蛋白阳性,符合NPM突变蛋白胞质移位的特点。细胞生长曲线显示,转染NPM-mA质粒的KG-1a细胞较空质粒转染和未转染组细胞生长速度明显加快,而转染NPM-mA质粒的K562细胞则较对照组细胞生长明显受抑制(P<0.05)。结论NPM-mA基因稳定转染可影响白血病细胞的增殖活性,在无ARF缺失时NPM-mA突变体可促进白血病细胞体外生长。
- 骆展鹏何鹏张伶杨松钟晓明高玉洁
- 关键词：白血病核磷蛋白基因突变
