李玉强
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省高等学校优秀人才支持计划辽宁省教育厅科学计划资助项目博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Nup88-shRNA对人结肠癌细胞株HT-29生长及侵袭力影响的实验研究被引量：1
- 2016年
- 目的构建重组慢病毒介导的Nup88-sh RNA载体,由RNA干扰(RNAi)技术沉默Nup88,研究其对结肠癌HT-29细胞的增殖、黏附、侵袭和转移的影响,为结肠癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法 Nup88重组慢病毒载体的构建后包装检验效价,以最佳感染复数转染结肠癌HT-29细胞,实验分为沉默组、阴性对照组和空白组3组,其中沉默组分为Nup88-sh RNA1、Nup88-sh RNA2、Nup88-sh RNA3、Nup88-sh RNA4 4个亚组。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot印迹检测各组表达效率,主要是HT-29细胞的m RNA和蛋白;四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测Nup88基因被干扰后对HT-29细胞侵袭力的影响。结果沉默4组病毒及1组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8 TU/m L。沉默组Nup88 m RNA与阴性对照组和空白组相比,蛋白表达差异均有显著统计学意义(P<0.01)。Nup88-sh RNA1转染后,沉默率可达到86%。沉默组细胞增殖程度显著减少,与空白组和阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默组细胞凋亡率(30.28%±0.19%)显著增加,与阴性对照组(4.15%±0.24%)和空白组(2.98%±0.27%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。培养肿瘤细胞常规24 h后,沉默组穿膜细胞数(120.5±8.7)和抑制率(49.22%)与阴性对照组(232.2±13.4,-2.14%)和空白组(276.4±10.2,0)相比,穿膜细胞数明显减少,抑制率明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Nup88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制HT-29细胞中Nup88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。
- 李男胡占升王宝权孙宏治朱志图李玉强李谌王钰
- 关键词：NUP88RNA干扰(RNAI)慢病毒载体
- RNA干扰NUP88基因对人乳腺癌MCF-7细胞生长及侵袭力的影响被引量：5
- 2014年
- 目的:构建重组慢病毒介导的NUP88-shRNA载体,通过RNAi技术分别观察沉默NUP88后对MCF-7增殖,粘附,侵袭和转移情况的影响,为乳腺癌的临床基因治疗寻找新的靶点。方法:构建NUP88重组慢病毒表达载体,包装后检测滴度,以最佳复感染指数转染乳腺癌MCF-7细胞,利用RT-PCR和Western blot检测各组MCF-7细胞中mRNA和蛋白的表达效率;MTT法和流式细胞仪检测法,检测NUP88基因被干扰后对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响;细胞侵袭实验检测NUP88基因被干扰后对MCF-7侵袭力的影响。结果四组病毒及一组阴性对照均构建成功,滴度均为4E+8TU/ml;RT-PCR和Western blot检测,结果表明:经NUP88-shRNA转染的MCF-7细胞组NUP88 mRNA和蛋白质的表达与经阴性转染组和空白MCF-7细胞组相比,差异明显具有统计学意义(P<0.01);测定NUP88-shRNA1组沉默效率最高,沉默率可达到86%;MTT法结果表明:实验组经NUP88-shRNA1慢病毒转染后细胞增殖程度显著减少,与空白组和对照组相比有显著性差异(P<0.05)。流式细胞仪检测三组MCF-7细胞凋亡结果表明:实验组经慢病毒转染后细胞凋亡率显著增加,与对照组和空白组相比有显著性差异(P<0.05);细胞侵袭实验表明:在肿瘤细胞常规培养24h后,实验组与空白组和阴性对照组比较,穿膜细胞数量明显减少,具有显著性差异(P<0.05)结论:NUP88重组慢病毒可以通过RNAi成功抑制MCF-7中NUP88基因的表达,并能显著抑制其增殖及远处的侵袭能力。
- 李玉强朱志图王巍李谌徐娜王钰李男孙宏治
- 关键词：NUP88人乳腺癌细胞MCF-7RNAI慢病毒载体
- 核孔蛋白复合体蛋白88在乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中的表达及意义研究被引量：4
- 2013年
- 目的探讨核孔蛋白复合体蛋白88(NUP88)和mRNA在乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中的表达及意义,验证NUP88可能是乳腺癌的重要肿瘤标记物,从而为临床开发新的乳腺癌靶向药物提供了新的靶标。方法采用Western blot检测乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中NUP-88的表达;用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MCF-7和MDA-MB-435S中NUP88 mRNA的含量。结果乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中NUP88表达水平明显高于MCF-7,差异有统计学意义(P<0.01);NUP88表达水平与乳腺癌细胞株的侵袭性有关。NUP88 mRNA在乳腺癌细胞株MDA-MB-435S中的表达水平高于MCF-7,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 NUP88及mRNA的表达与乳腺癌细胞株的侵袭性有关,提示NUP88将来有可能可作为判断乳腺癌恶性程度,预测侵袭转移和评估预后的参考指标。
- 李玉强王巍胡兵兵李男孙宏治
- 关键词：反转录聚合酶链反应
