李振宇
- 作品数：249 被引量：434H指数：10
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目江苏省高校自然科学研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学环境科学与工程更多>>
- 肝细胞生长因子真核表达质粒的构建、鉴定及表达
- 2012年
- 目的克隆人肝细胞生长因子（humanhepatocytegrowthfactor，hHGF）的编码基因，构建真核表达载体，获得hHGF蛋白。方法从含hHGF的人肝脏组织总RNA中，利用RT—PCR方法扩增出hHGFcDNA；利用TA克隆技术，将该基因片段克隆至真核表达载体pcDNA3．1＋质粒，转化E．coliDH5a细胞，鉴定pcDNA3．1＋-hH—GF重组质粒。将重组质粒pcDNA3．1＋-hHGF转染293T细胞，应用ELISA方法检测hHGF在293T细胞中的表达。结果①测序结果证实本实验克隆的基因与人HGF基因序列-致。②重组质粒pcDNA3．1＋-hHGF是具有表达功能的真核表达质粒。③pcDNA3．1＋-hHGF转染293T细胞，于转染后12、24、48、72h均能检测到hH-GF表达。结论成功构建hHGF真核表达载体，获得分泌性hHGF蛋白。
- 李德鹏桑威李振宇黄一虹张奎徐开林
- 关键词：人肝细胞生长因子TA克隆亚克隆真核表达载体
- 趋化因子受体7基因修饰的未成熟树突细胞对小鼠移植物抗宿主病的作用研究被引量：2
- 2013年
- 目的探讨趋化因子受体7（CCR7）基因修饰的未成熟树突细胞（imDC）对异基因骨髓移植（allo．BMT）小鼠急性移植物抗宿主病（6vno）的影响。方法构建CCR7重组慢病毒载体，包装后感染imDC；以C57BL／6小鼠为供鼠，BABL／c小鼠为受鼠，建立小鼠GVHD模型；实验分为4组，分别为单纯照射组、移植对照组、pXZ9．imDC组（空载体对照）和CCR7-imDC组；通过观察受鼠移植后生存期、GVHD临床评分、组织病理学改变、炎性细胞因子浓度等评价CCR7-imDC防治GVHD的作用。结果单纯照射组、移植对照组、pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组小鼠存活时间分别为（8．20±1．48）、（12．20±2．78）、（20．70±6．01）和（27．50±7．55）d，CCR7-imDC组小鼠存活时间明显长于其他各组（P〈0．01）。移植对照组、pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组小鼠GVHD评分分别为（6．90±1．66）、（5．60±0．97）和（4．10±1．79）分，CCR7-imDC组较其他两组GVHD评分降低（P〈0．05），组织病理学改变最轻。移植对照组小鼠血清IFN-丫浓度升高，在＋i0d时达高峰，而pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组IFN-γ浓度降低，＋20d时降至最低，CCR7-imDC组降低最明湿（P〈0．01）。移植对照组小鼠血清IL-4降低，而pXZ9-imDC组和CCR7-imDC组IL-4浓度渐升高，＋10d达高峰，以CCR7-imDC组升高最明显（P〈0．01）。＋30d，CCR7-imDC组存活受鼠骨髓异基因嵌合率为95％～100％，证实为完全供者型植入。结论CCR7-imDC能够明显延长受鼠的存活时间，减轻急性GVHD的发生。
- 李德鹏武家庆黄一虹宋立孝谷红红高彩玲李振宇潘秀英徐开林
- 关键词：树突细胞基因CCR7小鼠移植物抗宿主病
- Wnt3a基因修饰减轻阿糖胞苷诱导的小鼠骨髓间充质干细胞损伤的体外研究被引量：4
- 2011年
- 本研究探讨Wnt3a基因修饰对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)抗阿糖胞苷损伤的作用。通过重组腺病毒系统感染小鼠MSC,建立能够稳定高效表达Wnt3a基因的基因修饰MSC;在体外培养体系中加入不同浓度的阿糖胞分别诱导对基因修饰MSC与未经基因修饰MSC的损伤,设置对应的对照,通过CCK-8法、流式细胞术检测MSC的生长增殖以及凋亡情况;用Western blot测定MSC中与细胞凋亡有关的BCL-2蛋白的表达水平。结果表明,阿糖胞苷对基因修饰MSC的增殖抑制程度较未经基因修饰MSC明显减低,差异有统计学意义(p<0.05);去除阿糖胞苷后,基因修饰MSC的增殖生长能力在72小时后就开始恢复,而未经基因修饰MSC的增殖生长能力在72小时后仍然被抑制。在凋亡方面,阿糖胞苷诱导的基因修饰MSC的凋亡率明显降低(p<0.05),与未经基因修饰MSC相比,基因修饰MSC中BCL-2蛋白的表达上调(p<0.05)。结论:Wnt3a基因修饰能明显减轻阿糖胞苷对小鼠骨髓MSC的损伤作用。
- 鲁光李振宇牟伟伟何徐彭潘秀英徐开林
- 关键词：骨髓间充质干细胞阿糖胞苷
- 基因工程Treg细胞对小鼠异基因骨髓移植后GVHD和GVL效应的影响被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨输注慢病毒载体介导的小鼠基因工程调节性T淋巴细胞（Treg细胞）对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病（GVHD）及移植物抗白血病（GVL）效应的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将小鼠叉状头螺旋转录因子（Foxp3）基因转导入Balb/c小鼠的CD4＋CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Treg细胞.以Balb/c小鼠为供者.C57BL/6小鼠为受者,进行异基因骨髓移植,移植当天受者接受X线直线加速器全身照射.用随机数字表法将受者分为5组,每组10只.（1）单纯照射组：经受者尾静脉输注RPMI 1640培养液0.2 ml;（2）白血病对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋C57BL/6小鼠T淋巴细胞白血病/淋巴瘤细胞株（EL4细胞）500个;（3）移植对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个;（4）工程Treg组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋基因工程Treg细胞5×106个;（5）空载体对照组：经受者尾静脉输注供者骨髓细胞5×106个＋脾细胞5×106个＋EL4细胞500个＋空载体转导的CD4＋CD25-T淋巴细胞5×106个.每天观察受者存活情况;记录GVHD及白血病的发生情况;各组均于小鼠濒死前取其肝脏、小肠、皮肤、脾脏等组织,进行病理学观察;取长期存活（超过60 d）受者的骨髓细胞,检测嵌合情况.结果 单纯照射组、白血病对照组、移植对照组、工程Treg组和空载体对照组小鼠存活时间分别为（10.3±1.5）d、（20.7±1.9）d、（26.0±4.3）d、（49.0±17.7）d和（24.4±4.1）d,工程Treg组小鼠存活时间明显长于其他各组,差异有统计学意义（P＜0.05）.白血病对照组小鼠肝、脾组织病理切片均存在白血病细胞浸润表现,移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片存在GVHD病理改变,而工程Treg组长期存活小鼠各组织病理切片结构基本正常,
- 曹江李莉陈翀曾令宇李振宇程海徐开林
- 关键词：移植物抗宿主病移植物抗白血病
- Prdm1基因敲除小鼠的繁育和基因型鉴定被引量：1
- 2012年
- 本研究目的是繁育和鉴定prdm1基因敲除的小鼠,为进一步研究Blimp-1蛋白的功能奠定基础。将所引进的2种转基因纯合子小鼠B6.prdm1flox/flox和B6.Lck-Cre进行饲养并繁殖,繁殖成功后获得第1代小鼠,将第1代小鼠再次进行交配获得基因型为:B6.prdm1wild/wild.Lck-Cre、B6.prdm1wild/wild、B6.prdm1flox/flox.Lck-Cre、B6.prdm1flox/wild.Lck-Cre、B6.prdm1flox/flox、B6.prdm1flox/wild。提取第2代小鼠基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增Cre和loxp基因片段后琼脂糖凝胶电泳分别检测cre和loxp基因组DNA的大小。取基因型为B6.prdm1flox/flox.Lck-Cre即为条件性基因prdm1敲除小鼠,选择B6.prdm1flox/wild.Lck-Cre、B6.prdm1flox/flox、B6小鼠作为对照,应用磁珠分选脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞,并应用Western blot方法检测Blimp-1目的蛋白。结果表明,2种转基因纯合子小鼠均有繁殖能力,其子代相互繁殖后第2代小鼠分离比例基本符合孟德尔遗传规律,亦可以成功获得较多的prdm1基因敲除小鼠。结论:应用Cre-loxp系统可以成功地获得prdm1基因敲除的小鼠。
- 陆小云陈翀潘秀英曾令宇李振宇宋旭光徐开林
- 关键词：BLIMP-1PRDM1基因敲除
- 骨髓微环境在多发性骨髓瘤发病机制中的作用
- 2013年
- 多发性骨髓瘤（MM）是一种起源于B细胞系的恶性单克隆性浆细胞疾病，临床主要表现为贫血、溶骨性病变、骨痛、免疫缺陷和。肾功能不全。MM的发病机制目前尚不清楚，但其发生发展与骨髓微环境密切相关。骨髓微环境由造血细胞、非造血细胞、细胞外基质、细胞因子等组成。笔者就骨髓微环境在MM发病中的作用及进展进行综述。
- 李宁李振宇徐开林
- 关键词：骨髓微环境多发性骨髓瘤细胞因子外泌体
- 携带HSV-TK基因的逆转录病毒载体的构建及其对T细胞的杀伤作用
- 目的:探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(the herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)基因在小鼠脾细胞(T细胞)中表达的意义。方法:应用亚克隆技术将磷酸甘油酸激酶(phosph...
- 徐开林陈香梅潘秀英李振宇鹿群先李德鹏
- 文献传递
- 急性B淋巴系白血病细胞CD271表达和血清神经生长因子水平的临床意义
- 2011年
- 本研究检测急性B淋巴系白血病(B-ALL)患者血清神经生长因子(NGF)水平及骨髓白血病细胞群表面NGF低亲和性受体CD271的表达,并探讨两者的临床意义。应用酶标记免疫吸附分析法测定B-ALL患者血清NGF水平,应用流式细胞术测定患者骨髓白血病细胞群表面CD271的表达水平。结果表明,病例组患者NGF水平与对照组比较明显升高(t=4.191,p<0.05),而白血病细胞表面CD271表达与对照组比较明显降低(t=4.898,p<0.05)。25例初治B-ALL患者经CVAD方案化疗1个周期后完全缓解(CR)率为64%(16/25)。未缓解(NR)组患者化疗后NGF水平和CD271表达与对照组比较差异均有统计学意义(t=3.976,p<0.05和t=5.052,p<0.05),而CR组化疗后NGF水平和CD271表达与对照组比较差异均无统计学意义(t=1.102,p>0.05和t=1.150,p>0.05)。CR组和NR组患者化疗前CD271表达比较差异有统计学意义(t=3.889,p<0.05),但NGF水平比较差异无统计学意义(t=0.476,p>0.05)。CR组和NR组患者化疗后NGF水平及CD271表达比较差异均有统计学意义(t=3.751,p<0.05和t=4.678,p<0.05)。50%(8/16)例患者在随访过程中复发,复发患者NGF水平和CD271表达分别为(168.00±61.66)pg/ml和(52.29±13.00)%,与对照组比较差异均有统计学意义(t=5.284,p<0.05和t=6.073,p<0.05),余8例患者在缓解期NGF水平和CD271表达分别为(81.13±25.32)pg/ml和(78.45±7.12)%,与对照组比较差异无统计学意义(t=1.228,p>0.05和t=1.144,p>0.05)。B-ALL患者NGF高水平组和低水平组生存时间比较差异无统计学意义(p=0.750),同时CD271高表达组和低表达组生存时间比较差异无统计学意义(p=0.170)。结论:B-ALL患者血清NGF水平升高和骨髓白血病细胞CD271表达降低与白血病发生发展有关,这两项指标可能对疗效和预后判断具有一定的参考价值。
- 韩秀华徐开林曾令宇李振宇
- 关键词：急性B淋巴细胞白血病神经生长因子
- 造血干细胞移植后巨细胞病毒感染临床分析
- 2006年
- 目的观察各种类型的造血干细胞移植(HSCT)后巨细胞病毒(CMV)感染的发生情况及疗效。方法选择我院59例异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)和自体造血干细胞移植(auto-HSCT)患者移植后不同时期血和尿标本,检测CMV-pp65抗原及(或)CMV-DNA(荧光定量PCR法)进行动态观察分析。CMV感染的预防采用更昔洛韦(DHPG)5~10 mg/kg,1次/12 h,分别在移植前第8天至移植当天及当CMV血清学检测阳性或发生CMV病时应用2~4周,并可同时应用大剂量丙种球蛋白。结果CMV感染在allo-HSCT后好发,非亲缘性移植CMV感染率高,9例allo-HSCT出现CMV感染发生在移植后+42^+68天,其中5例均存在不同程度的移植物抗宿主病(GVHD),尤其是Ⅱ~Ⅳ度急性GVHD,2例进展为巨细胞间质性肺炎(CMV-IP);多为既往CMV感染被激活,对CMV-DNA阳性而无症状者进行预防治疗可使CMV-DNA阴转,可降低CMV病的发生。结论CMV病是allo-HSCT的常见并发症及主要致死原因之一;因此积极防治GVHD的发生及发展、定期监测CMV血清学阳性患者、早期干预性治疗可以提高移植的成功率。
- 孙海英李振宇徐开林何祎何徐彭潘秀英张言超
- 关键词：造血干细胞移植巨细胞病毒感染
- 硼替佐米对小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制研究被引量：3
- 2009年
- 目的探讨硼替佐米（Bortezomib）对小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防作用及其机制。方法建立小鼠aGVHD动物模型，将小鼠随机分3组，A：移植对照组；B：移植＋早期输注硼替佐米组；C：移植＋延期输注硼替佐米组。比较各组受鼠aGVHD临床及病理改变、生存率，流式细胞术检测移植后供鼠来源细胞（H-2b＋）率。体外建立单向混合淋巴细胞培养（MLC）体系，植物血凝素刺激后，分别用0、2、4、8nmol／L的硼替佐米作用于反应体系，在不同的时问点收集细胞，采用CCK-8法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，ELISA法检测培养上清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量。结果移植对照组小鼠出现典型的aGVHD症状，3周内死于aGVHD，平均存活时间为16．1d，移植加早期输注硼替佐米组小鼠aGVHD症状明显减轻，平均生存时间较移植对照组显著延长，60d时生存率为70％，高于其他组（P〈0．05），60d时H-2b’细胞的百分率为（98．1±1．1）％。移植加延期输注硼替佐米组小鼠aGVHD症状明显较移植对照组加重，平均存活时间较A组缩短。硼替佐米对MLC体系细胞活性的抑制作用表现为剂量依赖关系，8nmol／L硼替佐米作用24h后细胞活性抑制率为（41．4±6．0）％；硼替佐米作用于细胞后12、24、36h的凋亡率逐渐增加，8nmol／L硼替佐米作用36h后细胞凋亡率为（62．8±7．0）％；硼替佐米作用24h后上清液中IL-2、IFN-γ、TNF—α浓度减少。结论移植后早期输注硼替佐米可显著减轻小鼠异基因移植后的aGVHD、提高生存率，同时不影响骨髓植入；而移植后延期给予硼替佐米则加重aGVHD，导致受鼠死亡率增加。其机制可能是通过抑制淋巴细胞活性，诱导淋巴细胞凋亡，抑制同种反应性细胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α。
- 李振宇吴圣豪徐开林鹿群先潘秀英孙海英
- 关键词：硼替佐米小鼠移植物抗宿主病
