朱杰宁
- 作品数：88 被引量：174H指数：8
- 供职机构：广东省人民医院广东省心血管病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- miR-1/miR-206通过调控Hsp 60表达促进高糖诱导的心肌细胞凋亡
- 目的 miRNA是一种长度约为18～25 nt的非编码小RNA,存在于多种生物体中,每个miRNA都可能靶向单个或多个mRNA。miRNA可以与mRNA的3’非翻译区（UTR）结合并引发相应靶mRNA的降解或抑制靶蛋白的...
- 单志新林秋雄邓春玉朱杰宁麦丽萍符永恒谭虹虹林曙光余细勇
- 文献传递
- 建立缝隙连接蛋白43基因定点突变细胞株的研究
- 2011年
- 目的定点突变是通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的 DNA片段中引入包括碱基的添加、删除、点突变等所需变化。体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具,也是实验室中改造/优化基因常用的手段。连接蛋白43(connexin43,Cx43)是心脏表达最丰富的连接蛋白,主要分布在心室,其构成的缝隙连接(gapjunction,GJ)在心肌细胞中的电偶联中起着非常重要的作用。近年来的研究表明干细胞移植治疗心肌梗死时,细胞间电偶联障碍是导致心律失常副作用的一个重要原因。己知Cx43的磷酸化状态可以调节通道的功能,磷酸化常见的是368位点的丝氨酸磷酸化。我们对缝隙连接蛋白43基因(Cx43)的特定碱基进行定点改变,从而改变对应的氨基酸序列,并对表达产物进行研究,以利于将来探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)中转染突变的Cx43对其向心肌分化能力的影响,及其磷酸化状态是否对心律失常有调控作用。方法设计引物,sense:5'-CTTCAAGCAGAGCCAGCAGTCGTGCCAGCA-3',antisense:5'TGCTGGCACGACGACTGCTGGCTCTGCTTGAAG-3'。以已构建的Pcdh-Cx43为模板,使用Stratagene基因定点突变试剂盒进行PCR扩增,用DpnI酶识别甲基化位点并将其酶切,PCR产物转化后筛选阳性克隆,提取质粒测序验证。在293FT中与其它3个穿梭质粒一起包装,再将慢病毒颗粒转染BMSCs,用嘌呤霉素筛选出阳性克隆BMSCs-mCx43,在压力培养基下传代培养。用流式细胞仪检测BMSCs-mCx43的干细胞相关表面标记表达情况,同时用western blot检测BMSCs-mCx43的蛋白表达情况。结果测序结果显示突变位点正确,荧光照片显示90%的293FT表达绿色荧光。50%的BMSCs有绿色荧光蛋白的表达。流式细胞仪检测示BMSCs-mCx43细胞CD29阳性表达94%±0.8%,CD73阳性表达92%±0.7%,几乎不表达CD34和CD105,与未转染病毒的BMSCs和转染空病毒载体的BMSCs的表面标记一致。Western blot结果显示BMS
- 李晓红朱杰宁江雪燕江雪燕符永恒单志新林秋雄邓春玉邝素娟
- 关键词：定点突变技术缝隙连接蛋白基因定点突变丝氨酸
- 巨噬细胞移动抑制因子上调miR-29b,-29c表达抑制小鼠心肌纤维化
- 肖珍朱杰宁梁景南杨真祯符永恒张梦珍单志新
- 超顺磁氧化铁标记对大鼠脂肪干细胞向肝样细胞诱导分化的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究超顺磁氧化铁（SPIO）标记对大鼠脂肪干细胞（ADSCs）向肝样细胞诱导分化的影响。方法0．25％Ⅱ型胶原酶消化SD大鼠脂肪组织，获取原代ADSCs。采用多聚赖氨酸（PLL）介导SPIO（25μg／m1）标记ADSCs，以肝细胞生长因子（HGF）作为主要诱导因子，分成标记-诱导组、未标记-诱导组、标记-未诱导组及未标记-未诱导组，后2组分别作为对照。光学显微镜检测标记细胞内的铁摄取。台盼兰染色评价ADSCs的细胞活力。SPIO标记-诱导组和未标记-诱导组细胞均向肝样细胞诱导分化。分别在诱导前、诱导后7、14、21d糖原染色分析肝样细胞内糖原储存；免疫细胞化学染色和RT—PCR分析肝样细胞内白蛋白（ALB）的表达。结果ADSCs胞浆内铁标记率为100％。SPIO标记组与未标记组的细胞活力差异无统计学意义（p〉0．05）。标记诱导组与未标记诱导组在诱导后14d细胞胞浆糖原染色均为阳性；诱导21d后，2组细胞胞浆内染色阳性的细胞增多。14、21d ALB mRNA和蛋白表达水平逐渐增强。结论SPIO标记对大鼠ADSCs的生长及其向肝样细胞诱导分化无明显影响。
- 李晏刘再毅梁长虹朱杰宁李晓红梁家亮
- 关键词：超顺磁氧化铁脂肪干细胞肝样细胞
- 建立小鼠主动脉弓狭窄心肌肥厚模型心功能的超声检测与评估
- 符永恒祁周措张梦珍朱杰宁唐春梅林秋雄单志新杨敏
- 血浆循环MicroRNA提取检测及其在冠心病的表达
- 2011年
- 目的建立血浆循环MicroRNA的提取检测方法,并且检测其在冠心病患者和健康人群之间的差异表达,寻找新的疾病诊断标记物。方法前期入选收取15例冠心病患者和15例健康人的血样标本,性别和年龄在统计学上没有差异,采用Trizol LS提取血浆中的总RNA,NanoDrop1000检测总RNA浓度,设计特异性引物检测hsamiR-16、hsa-miR-126的表达,采用外加cel-miR-39进行校正,分析血浆中循环miRNA的表达差异。结果 (1)血浆提取的总RNA在280nm处有最大吸收峰,260 nm/280 nm比值介于1.67-2.17之间;(2)检测方法的特异性和灵敏度较好,cDNA梯度稀释20倍可以分辨出来,用hsa-miR-16 mimics的检测累加特异性,其CT值成梯度的累加,特异性较好;(3)检测hsa-miR-126在冠心病患者和健康人的表达有统计学差异(P<0.001),hsa-miR-16在两组间的表达没有统计学差异(P=0.396)。结论采用Trizol LS提取血浆总RNA的方法可行,茎环实时定量荧光检测miRNAs的方法特异性和灵敏性较好,血浆hsa-miR-126表达的差异可能在冠心病的发展过程中发挥调节作用,其具体的机制还有待于进一步的研究。
- 郑志伟劳海燕余细勇余细勇朱杰宁林秋雄王玲朱杰宁钟诗龙
- 关键词：冠心病患者荧光检测统计学血浆循环特异性引物
- 血管紧张素Ⅱ通过AP-1调控内皮细胞中巨噬细胞移动抑制因子的表达
- 目的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是与动脉粥样硬化发生和动脉粥样斑块稳定性相关的炎性因子。MIF在不稳定性粥样斑块中表达上调,MIF的中和抗体能抑制动脉粥样硬化损伤。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)能诱导内皮细胞中MIF表达,但...
- 单志新林秋雄杨敏邓春玉朱杰宁麦丽萍符永恒林曙光余细勇
- 文献传递
- Hsp90aa1: a novel target gene of miR-1 in cardiac ischemia/reperfusion injury
- The potential role of microRNA-1 (miR-1) in ischemia/reperfusion (I/R)-induced injury is not well illustrated....
- 朱杰宁Wen Si ZhuYong Heng FuXiao ZouYe You LiangXi yong Yu单志新
- 关键词：MICRORNA-1ISCHEMIA/REPERFUSIONAPOPTOSISCARDIOMYOCYTE
- 微小RNA16通过调控CCND1、CCND2表达促进心肌细胞肥大
- 目的 miRNA是一种长度约为18～25 nt的非编码小RNA,存在于多种生物体中,每个miRNA都可能靶向单个或多个mRNA。miRNA可以与mRNA的3′非翻译区(UTR)结合并引发相应靶mRNA的降解或抑制靶蛋白的...
- 林秋雄单志新邓春玉朱杰宁麦丽萍符永恒林曙光余细勇
- 文献传递
- 人血管紧张素Ⅱ2型受体基因慢病毒表达载体的构建
- 2014年
- 目的构建携带人血管紧张素Ⅱ2型受体(angiotensinⅡtype 2 receptor,AGTR2)基因的慢病毒表达载体。方法运用基因重组技术,将AGTR2基因克隆至慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1中,获得慢病毒表达载体pLVX-AGTR2-IRES-ZsGreen1,XhoI、BamHI双酶切反应及测序分析加以鉴定。在Lipofectamine 2000的介导下将慢病毒表达载体质粒和包装质粒(pHelper1.0、pHelper2.0)共转染人胚肾细胞系(293T),包装慢病毒载体并测定滴度。反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测AGTR2基因在感染病毒的293T细胞中的表达水平。结果所获AGTR2基因测序证明与GenBank中序列一致;成功构建慢病毒表达载体pLVX-AGTR2-IRES-ZsGreen1并获得相应的慢病毒。收集、浓缩病毒后测定其滴度为1.2×108 TU/mL。构建的携带AGTR2基因的慢病毒表达载体可有效转染293T细胞,RT-PCR结果表明AGTR2基因呈高表达。结论成功构建AGTR2慢病毒表达载体,为进一步研究其功能建立了实验基础。
- 雷和平麦丽萍朱杰宁单志新杨敏林秋雄余细勇
- 关键词：慢病毒表达载体293T细胞
