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重组尿素酶B亚单位和黏附素双价疫苗对幽门螺杆菌SS1株感染BALB/c小鼠的免疫保护作用被引量：2: 2004年; 徐飏严杰叶嗣颖毛亚飞李立伟李淑萍; 关键词：黏附素双价疫苗小鼠免疫保护作用

土拨鼠肝炎病毒核心蛋白的高效表达和B细胞表位鉴定: 2007年; 目的建立高效表达土拨鼠肝炎病毒核心蛋白(WHcAg)的方法并对其B细胞表位进行鉴定。方法分别构建不同截短型WHcAg的质粒以了解能大量表达并形成WHV核心颗粒的区段,利用变性WHcAg制备单克隆抗体以寻找能与WHcAg线性B细胞表位结合的单克隆抗体。结果WHcAg前144或149氨基酸残基能够大量表达并能形成颗粒样结构。这2种截短型WHcAg能够在大肠杆菌中表达并组装成直径为34 nm的核心颗粒,最终纯化获得毫克级的核心蛋白。截短型WHcAg保留了全长WHcAg的抗原性,而且变性WHcAg存在另外的B细胞线性表位,利用变性WHcAg进行免疫制备单克隆抗体获得的5株抗体均针对WHcAg的N末端表位,该表位在WHcAg和HBcAg高度保守。结论建立了高效表达WHcAg的方法,制备了针对WHcAg单克隆抗体。并对WHcAg的线性B细胞表位进行了鉴定,发现WHcAg和HBcAg的N末端存在共同的线性B细胞表位。; 张振华田拥军李磊Melanie FiedleErnst SchmidMichael Roggendorf陆蒙吉徐飏杨东亮; 关键词：土拨鼠肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体

筛选出一株可识别多种变异HBsAg的单克隆抗体及其应用: 2008年; 目的制备筛选可识别变异表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。用筛选出的单克隆抗体建立检测变异HBsAg的ELISA实验方法。方法用血源HBsAg免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗-HBs单克隆抗体。不同单克隆抗体包被酶标反应孔,检测真核细胞表达的野生及变异HBsAg,了解各种单克隆抗体的反应模式。筛选出可以较好识别变异HBsAg的单克隆抗体Hb1,优化该抗体ELISA检测HBsAg的方法,与8种HB-sAg检测试剂比较检测变异HBsAg的能力。结果经过筛选,得到一种可以较好识别包括G145R在内大多数变异HBsAg的单克隆抗体。检测变异HBsAg的能力优于市售HBsAg诊断试剂。结论用本实验制备的单克隆抗体可以用于ELISA检测变异HBsAg,减少HBsAg变异株的漏检率。; 田拥军张振华李磊刘慎沛徐飏陆蒙吉杨东亮; 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体

幽门螺杆菌内置佐剂UreB和HpaA双价重组疫苗——对实验感染小鼠的免疫保护作用: 目的了解内置重组大肠杆菌不耐热肠毒素B 亚单位(rLTB)佐剂、幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B 亚单位(rUreB)和粘附素(rHpaA)双价基因工程疫苗对Hp SS1株感染BALB/...; 严杰徐飏毛亚飞李淑萍; 关键词：幽门螺杆菌免疫保护 S-IGA; 文献传递

一种新的土拨鼠α干扰素基因分型方法的建立及其意义: 2007年; 目的:建立新的土拨鼠α干扰素(IFN-α)基因分型方法,分析急性和慢性土拨鼠肝炎病毒(Woodchuck hepati-tis virus,WHV)感染的土拨鼠肝细胞中不同型别的IFN-α基因表达谱及其意义。方法:利用已知序列和基因型的土拨鼠IFN-α基因克隆质粒,建立基于土拨鼠IFN-α基因序列的限制性片段长度多态性的土拨鼠IFN-α基因分型方法。PolyIC体外刺激正常土拨鼠外周血单个核细胞(PBMC),调查正常土拨鼠PBMC受PolyIC刺激后IFN-α基因的表达谱。提取急性和慢性土拨鼠肝炎病毒感染的土拨鼠肝组织mRNA,RT-PCR扩增土拨鼠IFN-α基因,分子克隆后调查急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因表达谱。结果:建立了土拨鼠IFN-α基因限制性片段长度多态性分型方法。急性和慢性感染的土拨鼠肝细胞中IFN-α基因的表达谱明显不同于正常动物的表达谱,假基因表达所占比例大。结论:新建立的土拨鼠IFN-α基因分型方法可用于分析土拨鼠不同组织中IFN-α的基因表达谱。; 卢银平徐飏王宝菊董继华陆蒙吉杨东亮; 关键词：土拨鼠 Α干扰素基因分型

土拨鼠α干扰素新亚型基因的克隆及生物学活性分析: 2006年; 目的克隆土拨鼠α干扰素(IFN-α)新亚型基因,用于土拨鼠HBV模型探索IFN-α治疗慢性乙型肝炎策略;调查慢性土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)感染的土拨鼠外周血单个核细胞(PBMC)干扰素功能状况。方法poly(I-C)体外刺激正常和慢性WHV感染的土拨鼠PBMC,分析其表达的干扰素生物学活性。利用分子克隆技术对土拨鼠IFN-α家族基因进行克隆,并对所克隆的系列基因进行测序、分型并进行真核表达后检测表达产物生物学活性。结果poly(I-C)刺激体外培养的土拨鼠PBMC后,慢性感染土拨鼠PBMC分泌的干扰素的活性显著差异低于正常土拨鼠(P<0．01)。获得36个土拨鼠IFN-α基因序列克隆,测序分析后,发现有10个克隆是新亚型基因,其中8个为功能基因亚型,2个为假基因亚型,病毒保护试验证明只有功能基因亚型具有生物学活性。结论慢性WHV感染的土拨鼠细胞免疫功能受损。新的土拨鼠IFN-α亚型基因的克隆为在土拨鼠HBV动物模型上进行干扰素基因治疗和研究干扰素治疗策略提供了新的材料。; 卢银平徐飏王宝菊董继华陆蒙吉杨东亮; 关键词：土拨鼠 Α干扰素基因分型生物学活性

中国主要问号钩端螺旋体血清群外膜蛋白OmpL1的基因型,原核表达系统构建表达及免疫学鉴定被引量：15: 2004年; 目的　探讨 15群 15型问号钩端螺旋体 (简称钩体 )中国参考标准株及 2群 2型双曲钩体国际参考标准株是否均存在外膜蛋白OmpL1基因 ,克隆并构建该基因的原核表达系统 ,鉴定表达产物的免疫性。方法　常规酚氯仿法提取上述钩体的基因组DNA ,高保真PCR扩增全长OmpL1基因片段 ,T A克隆后测定核苷酸序列并构建原核表达系统 ,不同浓度IPTG诱导后用SDS PAGE检测重组蛋白rOMPL1表达情况。分别用兔抗钩体TR PatocⅠ抗原、rOMPL1血清的Westernblot鉴定其免疫反应性和免疫原性。分别用显微镜凝集试验 (MAT)和钩体细胞黏附模型检测兔抗rOMPL1血清的交叉凝集效价和细胞黏附阻断作用。结果　上述 17株钩体均具有OmpL1基因 ,但至少可分 3种基因型 :OmpL1 1、OmpL1 2和OmpL1 3。与文献报道比较 ,所克隆的OmpL1 1、OmpL1 2和OmpL1 3基因核苷酸序列同源性分别为 93.87%～ 94 .0 8%、89.82 %～ 10 0 %和 80 .89%～ 81.72 % ,其氨基酸序列同源性分别为 93.13%～ 98.75 %、91.87%～ 10 0 %和 85 .6 3%～ 88.4 4 %。IPTG诱导后pET32a OmpL1 1 E .coliBL2 1DE3和pET32a OmpL1 2 E .coliBL2 1DE3的rOMPL1 1和rOMPL1 2表达量分别占细菌总蛋白的 30 %和 2 0 %。rOMPL1 1和rOMPL1 2均能与兔抗钩体TR PatocⅠ抗原血清发生免疫结合?; 徐飏严杰毛亚飞李立伟李淑萍; 关键词：问号钩端螺旋体基因型原核表达免疫学交叉凝集

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徐飏

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