徐海聂
- 作品数：43 被引量：145H指数：8
- 供职机构：珠海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目珠海市软科学研究计划项目广东省农业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程理学更多>>
- 养殖对虾病毒病PCR诊断方法的建立及在流行病学调查中的应用被引量：1
- 2004年
- 利用分子生物学技术 ,建立了一种快速、准确、实用的养殖对虾白斑病和斑节对虾杆状病毒的 PCR检测方法 ,通过特异性试验和敏感性试验 ,并经测序 ,其 PCR产物与目的基因符合率为 99% ,证实该方法具有良好的特异性。本项目还将该方法应用于对虾育苗过程的各个环节 ,并对珠海地区养殖场养殖对虾、市场销售的对虾和进出口对虾等进行了对虾白斑病毒和斑节对虾杆状病毒的流行病学调查。在调查中首次发现虾蛄对虾白斑病毒呈阳性反应 ,说明该病毒可以感染除对虾外的节肢动物。
- 薄清如吴小伦黄建珍徐海聂朱建洪王小玉黄云君周思波陈静静
- 关键词：PCR诊断方法
- Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分被引量：1
- 2015年
- 针对鲨鱼产品掺杂造假增多而缺乏有效鉴定技术的情况,作者根据Gen Bank中鲨鱼基因的线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 2.0设计了一套特异性引物和探针,用来建立Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分的方法。结果表明,对13份已鉴定为鲨鱼鱼翅的样品进行检测,全部出现特异性扩增曲线,阴性对照没有荧光增长。方法特异性强,对市场购买的12份鲨鱼源性样品及9份其他鱼类样品进行检测,12份鲨鱼样品均出现荧光扩增曲线,而非鲨鱼样品均未出现荧光增长;方法灵敏度较高,可检测到的最低质粒拷贝数量级为10拷贝/μL;方法快速准确,操作简便,重复性好,稳定可靠,可应用于市场上鱼翅等常见鲨鱼源性产品的真假鉴定。
- 陈轩廖秀云陶旻罗宝正薄清如沙才华黄海超徐海聂杨素
- 关键词：TAQMAN探针荧光PCR
- 麝属动物源性成分PCR检测方法的建立
- 2016年
- 为了对麝属动物源性成分进行有效鉴定,根据麝属动物线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Oligo7.0设计了特异性引物,用来建立PCR检测麝属动物源性成分的方法。结果显示:使用麝特异性引物优化的PCR体系可以对两份麝样品进行扩增,凝胶电泳均出现特异性条带。方法特异性好,只扩增麝属动物样品,16份其他物种的样品均为阴性结果。方法灵敏度较高,可检测到100个拷贝DNA的数量级。表明本研究建立的方法可应用于动物组织及其加工产品中的麝属动物源性成分的检测。
- 赵福振邵建宏罗宝正徐海聂廖秀云彭玉芬陈敬薄清如
- 关键词：PCR方法
- 实时荧光RT-PCR鉴别检测美洲型PRRSV及其变异株被引量：3
- 2011年
- 本研究建立了美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV）通用实时荧光RT-PCR和PRRSV变异株特异性实时荧光RT-PCR检测方法,对方法的灵敏度和特异性进行了验证,并对24个临床可疑样品进行检测。结果显示,实时荧光RT-PCR可以检测到0.47 TCID50的病毒培养液,灵敏度略高于病毒分离方法;两个实时荧光RT-PCR都具有良好的特异性,无交叉反应。在对24个临床可疑样品的检测中,阳性率与病毒分离方法一致（21/24）,检测时间也缩短为70 min。本研究建立的方法有潜力应用于传统美洲型PRRSV及其变异株（NSP2 1594~1680缺失）感染引起的PRRS和高致病性PRRS的监测和鉴别诊断。
- 罗宝正王连想薄清如王爱民徐海聂黄好兴
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株实时荧光RT-PCR
- TaqMan探针荧光PCR检测副猪嗜血杆菌方法的建立和应用被引量：5
- 2011年
- 为了建立基于TaqMan探针荧光PCR技术检测副猪嗜血杆菌的方法,本试验参考GenBank已发表的副猪嗜血杆菌(Hemophilus parasuis,HPS)转录起始因子infB基因序列,利用生物学软件Primer Express 2.0设计特异性引物和探针;并对副猪嗜血杆菌标准菌株提取DNA后进行PCR扩增,将产物测序鉴定后克隆到pMD18-T载体,再转化到大肠杆菌感受态细胞,细菌培养后对菌液进行PCR扩增,把产物测序鉴定后获得的重组质粒作为标准阳性对照;最后将建立的TaqMan探针荧光PCR方法进行灵敏度、特异性、稳定性试验。结果显示,该检测方法可以达到1μl 1.0×101拷贝数量级的灵敏度;另外,该方法可以将HPS和大肠杆菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、猪链球菌分开,特异性良好;稳定性试验显示,2次批内变异系数分别为0.65%和0.92%,批间变异系数为1.31%,稳定性良好。对口岸送检的56份猪肉和12份血浆蛋白粉样品进行检测,结果表明TaqMan探针荧光PCR方法和细菌分离方法的检测效果一致。
- 罗宝正王振全薄清如徐海聂沙才华廖秀云陈伟生
- 关键词：副猪嗜血杆菌荧光PCR
- 化学合成siRNA抑制H5N1亚型禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中的增殖
- 2013年
- 为研究RNA干涉对H5N1亚型禽流感病毒的增殖抑制作用,针对H5N1亚型禽流感病毒的NP和PA基因,设计4对siRNA干涉序列,并将其转染到鸡胚成纤维细胞,6h后接种H5N1亚型禽流感病毒液,在病毒感染后的16～56h内测定细胞上清中的病毒血凝价及观察细胞病变,并在病毒感染36h后检测NP、PA、HA和β-actin基因的mRNA水平。结果显示4对siRNA均能不同程度地抑制H5N1亚型禽流感病毒在鸡胚成纤维细胞中的增殖,但以PA为靶基因设计的一对干涉序列效果最优;实验还证实随着时间的延长,干涉效应逐渐减弱。本实验为研究RNA干涉技术防控禽流感提供了依据。
- 李儒曙于丹罗宝正薄清如徐海聂沙才华廖秀云
- 关键词：SIRNAH5N1亚型禽流感病毒鸡胚成纤维细胞增殖
- 动物蛋白饲料中动物源性成分的鉴别 1.同一PCR鉴别动物蛋白饲料中牛羊成分被引量：21
- 2003年
- 为了防止牛海绵状脑病 (俗称疯牛病 )和羊痒病传入我国 ,对来自疫区国家的动物源性饲料进行动物种类鉴别非常必要。本研究根据牛羊特异性卫星 DNA建立了同一 PCR体系同时检测羊、牛源性物质的方法。应用 DNA提取液制备模板 ,不但有效地缩短了试验时间 ,还大大降低了成本 。
- 朱绍智黄新民薄清如周志江杨素高彦生赵君徐海聂潘文波陈德镁兰乃洪冯家望陈静静
- 关键词：动物蛋白饲料动物源性成分PCR
- Taqman探针荧光PCR法检测熊源性成分被引量：2
- 2017年
- 为了对熊源性成分进行有效鉴定,本研究根据熊科动物线粒体DNA(mtDNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 3.0设计了一套特异性引物、探针,用以建立Taqman探针荧光PCR检测熊源性成分的方法。结果显示,所建立方法特异性强,15份熊属动物组织样品均出现特异性扩增曲线,20份阴性对照动物样品均未出现扩增曲线;方法灵敏度高,最低可以检测到10个拷贝数量级的重组质粒DNA,对熊胆粉稀释106倍后,仍可扩增出熊DNA;方法稳定性好,对相同的样品在不同时间进行2次重复检测,批内变异系数分别为0.88%、1.13%,批间变异系数为1.38%。结果表明,本研究建立的方法可应用于熊属动物组织及其加工品中的熊源性成分的检测。
- 邵建宏罗宝正薄清如赵福振帖丽莎徐海聂廖秀云彭玉芬陈敬
- 关键词：荧光PCR
- 五重PCR检测大肠杆菌O157∶H7菌体抗原和毒素基因被引量：8
- 2005年
- 针对 O1 5 7∶H7大肠杆菌 O抗原抗血清同多种细菌有交叉反应 ,而单一毒素基因并不是 O1 5 7∶ H7所独有这一特点 ,建立了五重和四重 PCR方法 ,同时检测大肠杆菌 O1 5 7∶ H7的 O抗原、H抗原和 4种毒素基因 ,可在较短的时间内检测、鉴定大肠杆菌 O1 5 7∶ H7,并有较高的特异性 ,解决了传统细菌检测方法耗时长、灵敏度低 。
- 薄清如周志江吴小伦徐海聂黄云君冯家望王小玉黄建珍陈静静潘文波廖秀云
- 关键词：大肠杆菌毒素基因
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒及其变异株荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
- 罗宝正王连想薄清如孙彦伟王爱民马静云徐海聂黄好兴伍时达毕英佐
- 本研究建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒及其变异株荧光RT-PCR方法，其中猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR可以检测所有美洲型PRRSV，变异株荧光RT-PCR只检测PRRSV变异毒（1594-1680变异）。所建立...
- 关键词：
- 关键词：病毒荧光RT-PCR变异株猪繁殖与呼吸综合征
