张琰平 作品数:7 被引量:18 H指数:3 供职机构: 北京生物制品研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 化学工程 更多>>
血小板生成素基因的克隆及其初步表达 1999年 自 4月龄胎肝中提取总 RNA,经逆转录、多聚酶链反应 (PCR)获得了人血小板生成素 (TPO)全基因 ,长约 10 80 bp。将经限制性内切酶 Nde 和 Hind 双酶切后的 TPO基因与 p RSET A载体相连接 ,转化大肠杆菌后得到两个阳性重组质粒 p T4和 p T10。经核苷酸序列分析证实 ,所克隆的基因与文献报道一致。将 p T4转染 E. coli JM10 9(DE3) ,经 1mmol/ L IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE分析 ,相对分子质量约 40 0 0 0处可见一条明显的表达带。 张琰平 樊晓翔 张振龙关键词:血小板生成素 多聚酶链反应 克隆 重组人干扰素-β的中试研究 被引量:1 2001年 从大肠杆菌中大规模纯化新型干扰素 β(IFN βser17)。首先建立IFN βser17发酵和纯化工艺 ,连续大量纯化三批 ,并对纯化终产品进行全面鉴定。建立了稳定的发酵和纯化工艺流程 ,中试三批菌产量平均为 4.33g L ,IFN βser17的表达量平均为 2 0 % ,经破碎、粗提、精制后IFN βser17的比活达 2× 10 7IU mg以上 ,纯度超过 96 % 。 刘建源 张振龙 杨云凯 张琰平 邓宛明 樊晓翔关键词:干扰素Β 发酵 纯化 工程菌 中试 pRL-hTNF/JM103工程菌发酵和rhTNFα表达的研究 被引量:4 1998年 为便于下游中试规模生产,采用温度敏感型启动子PRPL构建rhTNFα工程菌,并对影响工程菌发酵培养和表达的因素进行了初步研究。结果显示,采用RTB培养基,50℃热水快速升温,诱导培养4~4.5h,湿菌体收获率和表达量均达到较高水平;50L发酵罐连续发酵3批,14000r/min连续离心,菌体收获率湿重达16.gg/L培养物,rhTNFα表达量占菌体总蛋白的10.5%,活性达1.35×107U/mg蛋白。. 张振龙 许丽峰 张琰平 刘德郁 邓宛明 樊晓翔 陈梅娣 窦金福 宋比天 倪道明 李昌本关键词:人肿瘤坏死因子 发酵 工程菌 重组人肿瘤坏死因子α的分离纯化及鉴定 被引量:2 1998年 重组人肿瘤坏死因子α工程菌经发酵培养、破菌后,上清再经热处理、硫酸按分级沉淀,然后过SephadexG-25、DEANSepharoseCL-6B和Sephacry1S-100柱层析进行再纯化。结果显示,经多步层析纯化后rhTNFa回收率达27%,纯化倍数达236倍。连续纯化3批,纯度均达96%以上,比活性达3.9×106U/mg蛋白。提示所建立的纯化工艺稳定,为rhTNFα的基础研究和临床研究奠定了基础。 张振龙 张琰平 宁杨 窦金福 陈梅娣 崔春青 赵秀芬 樊晓翔 倪道明 李昌本关键词:肿瘤坏死因子 柱层析 纯化 抗rhTNFα杂交瘤细胞的体外培养及抗体分泌的研究 被引量:3 1997年 采用非CO2依赖培养基(CO2-IM)在无CO2、37℃条件下培养抗rhTNFα杂交瘤细胞,培养1周PH无显著变化,细胞生长趋势和抗体分泌显著超过DMEM。将CO2-IM与SFPF-HM混合后添加ITSE可以培养抗rhTNF杂交瘤细胞,其细胞生长速率、密度、活力和抗体产量均达到或超过含血清培养。 张振龙 张琰平 王淑芳 崔春青 陈梅娣 孟子玉 高梦玲关键词:细胞培养 杂交瘤细胞 抗性 抗脂多糖单克隆抗体特性及纯化的研究 1996年 用E.coli0111:B4死菌体及其脂多糖(LPS)免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合获得6株稳定分泌抗LPS特异性单克隆抗体细胞株,其中一株为IgG2a类,5株为IgM类,轻链均为K型;染色体数目为90-98条;5株IgM类单克隆抗体识别5种不同的抗原表位;相对亲和力在10~8~10^(10)之间;1B12单抗经SephadexG-150纯化后,经还原性SDS-PAGE显示只有70KD的重键和25KD的轻链。 张琰平 崔春青 张振龙 陈晓龙关键词:脂多糖 单克隆抗体 提纯 检测金属硫蛋白夹心法ELISA的建立和初步应用 被引量:8 1997年 采用两种能识别兔肝金属硫蛋白Ⅱ分子上不同抗原决定簇的单克隆抗体建立了夹心法ELISA。鉴定表明,该法测定兔MT的灵敏度为20ng/ml,批内和批间变异系数分别为12.2%和9.3%;用于测定人体MT也有较好的灵敏性和可靠性。 张亨山 赵金垣 张振龙 王春荣 陈晓龙 刘宏 马东星 史德林 倪道明 张琰平 王芳关键词:金属硫蛋白 单克隆抗体 ELISA