左其生
- 作品数：64 被引量：89H指数：6
- 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学医药卫生更多>>
- 脂代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制的研究
- [目的]探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据.[方法]采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonicstem cell,ESC)、原始生殖细胞...
- 左其生张蕾连超肖天荣王颖洁汤贝贝王飞纪艳芹路镇宇赵瑞峰张文慧张亚妮李碧春
- 关键词：RNA-SEQ雄性生殖细胞视黄酸脂代谢
- 睾丸注射Mx-NA双基因制备抗病转基因鸡的研究被引量：7
- 2014年
- 本研究利用精原干细胞介导法体内转染重组载体pVITRO2-Mx-NA以生产抗病转基因鸡。采用睾丸注射法将脂质体包裹的线性化质粒通过随机打点注射入公鸡睾丸,采集25、50、60、70d后试验公鸡的精液,提取基因组DNA,采用常规PCR检测外源Mx-NA联合基因的整合;转染后60d采集阳性公鸡精液人工授精母鸡,采用PCR和Western blot方法检测后代血液中外源NA-Mx联合基因的表达情况。结果表明:PCR检测证实外源Mx-NA联合基因已在精子基因组中表达,精液PCR阳性率为33.33%(2/6),且能通过体外受精在后代中检测到,后代PCR检测的阳性率为31.43%(11∕35),Western blot检测F1代阳性率为28.6%(10/35)。以上结果证明外源Mx-NA基因能稳定整合到鸡的基因组中,表明睾丸注射法是一种操作简单、有效的制备抗病转基因鸡的方法。
- 靳锴汪怡临左其生李东张蕾傅德智王颖洁张亚妮李碧春
- 关键词：转基因鸡
- HSD3B2通过甾类激素合成通路调控鸡雄性生殖细胞形成
- 1引言精原干细胞可以替代胚胎干细胞进行基因治疗和遗传操作而不涉及伦理道德，目前被广泛的应用和研究，但是对精原干细胞形成过程中具体的调控方式却少有研究。本研究旨在探索甾类激素合成通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的作用，为构建...
- 张晨王曼何娜娜汪怡临赵瑞丰余昕健金晶左其生张亚妮李碧春
- 关键词：雄性生殖细胞分化
- 利用CRISPR/Cas基因编辑技术可有效实现家鸡基因组的定点敲除
- [目的]本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目基因的定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。[方法]基于NCBI 数据库提供的CDS 序列克隆C2EIP(chr2,Expression In...
- 左其生王颖洁赵瑞峰程少泽汪怡临靳锴王飞纪艳芹路镇宇张文慧张亚妮李碧春
- 关键词：基因敲除
- 视黄酸及Stra8基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞分化的影响被引量：3
- 2014年
- 旨在研究视黄酸(All-trans retinoic acid,RA)及Stra8(Stimulated by retinoic acid gene 8)基因联合作用对雄性鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs)分化的影响。选用PCR方法鉴定雄性cESCs为研究对象,转染Stra 8基因,对Stra8基因阳性cESCs使用RA进行12d连续诱导,同时设立Stra8基因转染组、RA诱导组及空白组对照,各组均进行3次重复试验。细胞形态学、qRT-PCR检测RA及Sira8基因对cESCs分化的影响。结果表明。转染Stra8基因进行RA诱导,在诱导12d后,出现精原干细胞样的圆形小克隆,其他组cESCs出现类胚体或解体;qRT-PCR鉴定发现各组中干细胞标记基因表达量随着培养时间的延长逐渐下降,同时检测到生殖细胞相关基因表达,转染Stra8基因并使用RA诱导组中表达量均高于对照组(P<0.01),6d表达量达到最高,然后逐渐下降。Stra8基因和RA的联合作用能够促进cESCs向着生殖细胞方向的分化,不仅改变了原有细胞形态,同时出现了生殖相关基因的表达。通过该方法可以在体外建立一个。ESCs诱导分化模型,将为生殖细胞的发生、增殖、分化及调控机理的研究和人类不孕不育症的治疗奠定良好的基础。
- 张振韬王丹施青青ELSAYED A K张亚妮韦光辉朱睿左其生李东刘堃李碧春
- 关键词：RA分化基因表达
- 鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测
- 2023年
- 研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体,为后续研究TXB6在精原干细胞(Sper⁃matogonial stem cells,SSCs)形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和SSCs的表达水平,根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列,设计引物扩增目的片段,将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copG⁃FP-T2A-Puro上,构建TBX6的过表达载体;同时,根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点,在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上,并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系(DF-1),观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示,TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05),测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体;干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白,且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明,TBX6过表达及干扰载体构建成功,且经定量检测后确定shRNA2-TBX6的干扰效果最好。
- 武嵘峰陈欣雨胡菜耿晴晴程富富席一凡左其生张亚妮
- miRNA-31通过靶向Stra8调控鸡SSC减数分裂
- Stra8是在哺乳动物生殖细胞中有丝分裂转变为减数分裂时表达的特异性基因,在哺乳动物和鸟类的减数分裂发生中起关键作用.因此,cSSCs(鸡精原干细胞)中Stra8通路的研究可以更深入地了解鸟-类精子发生.miRNA也是S...
- 王颖洁左其生张文慧何娜娜孙长花张亚妮李碧春
- 关键词：精原干细胞减数分裂
- 卵泡刺激素诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究被引量：4
- 2014年
- 文章探讨了卵泡刺激素(FSH)诱导鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先对FSH的适宜诱导浓度进行筛选,再将传至2代的ESCs,在RA和支持细胞诱导的基础上添加适宜浓度的FSH进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。筛选出适宜的FSH浓度为25 ng/mL。单独使用FSH诱导,未出现类SSCs样细胞;FSH与支持细胞诱导至第6天出现类胚体,至第12天,出现少量精原样细胞;FSH联合支持细胞和维甲酸(RA)进行诱导,至第2天出现类胚体,第12天出现类SSC样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,FSH+支持细胞组、FSH+支持细胞+RA组中,Stra8、integrinβ1、Dazl表达量都持续上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势。添加FSH的诱导组中Stra8的表达量相对于各对照组上调显著。FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但具有促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。
- 蒋一秀许厚强左其生张蕾李东施青青张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化卵泡刺激素
- 鸡胚成纤维细胞单克隆细胞系的建立
- 目的：本研究旨在建立一套原代鸡胚成纤维细胞(primary stage chicken embryonic fibroblast,pCEF)的单克隆建系方法,以期获得具有高均一度的单克隆细胞系从而解决原代细胞均一度低和培...
- 赵瑞丰靳锴张晨金晶王颖洁左其生张亚妮李碧春
- 关键词：鸡胚成纤维细胞
- 鸡WDR5基因真核表达载体构建及对PGCs形成相关基因表达的影响
- 2021年
- 【目的】对鸡色氨酸天冬氨酸重复域5(WD repeat domain 5,WDR5)进行生物信息学分析,构建真核表达载体,并检测其对原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)形成相关基因表达的影响,探索WDR5在鸡PGCs形成中的调控作用。【方法】利用ProtParam、NCBI保守结构域分析、Uniport、TMHMM Server v.2.0和SignalP在线网站,分析WDR5的氨基酸序列、保守结构域、亲疏水性、跨膜结构域和信号肽表达。利用SWISS-MODEL进行同源建模预测其三级结构,借助String网站进行互作蛋白的预测。构建重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST,进行双酶切和测序鉴定;将重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST转染PGCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检验WDR5重组蛋白在PGC中的表达情况;用RT-qPCR检测过表达WDR5对PGCs形成相关基因(DDX4、C-KIT、BLIMP1、LIN28B和PRDM14)表达水平的影响。【结果】WDR5蛋白含有1个高度保守的WD40结构域,内含7个典型的WD40重复序列;其亲水性高、不含跨膜结构域、无信号肽表达,可用于构建重组真核表达载体。同源建模和互作蛋白预测显示WDR5高度保守,互作蛋白为类ASH2蛋白(ASH2 Like,ASH2L)、RB结合蛋白5(RB Binding Protein 5,RBBP5)、DPY30和KAT8调控因子NSL复合物亚基3(KAT8 Regulatory NSL Complex Subunit 3,KANSL3)。双酶切和测序结果表明,重组载体pcDNA3.1-WDR5-GST构建成功。RT-qPCR结果显示PGC中重组载体可使WDR5过量表达;Western blot结果表明,PGC中可表达重组蛋白。WDR5过表达可使PGCs形成相关基因的表达水平升高。【结论】构建的WDR5重组载体在鸡PGCs中能够表达;WDR5基因表达上调后,PGCs形成相关基因表达水平升高,推测其可调控鸡PGCs的形成。
- 张晨左其生邹艺琛赵娟娟张亚妮李碧春
