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紫杉醇诱导ASTC-a-1细胞的程序性死亡机制研究被引量：5: 2008年; 利用质粒转染技术和显微荧光成像技术在活细胞中研究了紫杉醇诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)的程序性细胞死亡(PCD)过程,利用基因荧光探针分别标记细胞以及细胞的内质网。实验结果表明紫杉醇诱导的细胞质肿胀主要是由于内质网的肿胀引起的;利用rhodamine123标记细胞内的线粒体,研究了紫杉醇对线粒体大小的影响,结果表明紫杉醇诱导了线粒体的肿胀;caspases广谱抑制剂z-VAD-fmk对紫杉醇诱导的细胞肿胀没有影响,表明caspases并没有参与紫杉醇诱导细胞质肿胀的调控过程;Hoechst33258和PI染色实验结果表明紫杉醇没有引起细胞核的浓缩和DNA的断裂以及细胞膜的破裂。以上研究结果进一步确认紫杉醇诱导ASTC-a-1的PCD过程类似paraptosis方式,既不是传统的凋亡方式,也不是坏死方式。; 陈同生王小平孙磊王会营王龙祥

蟾酥和蟾蜍灵诱导癌细胞凋亡机制的研究: 本论文在充分调研国际有关蟾酥和蟾蜍灵凋亡研究进展的前提下，首先概述了有关细胞凋亡和其相关蛋白的基本信息以及细胞凋亡通路的调节，接着总结了蟾酥和蟾蜍灵治疗肿瘤的机制，然后对激光共聚焦扫描显微镜和荧光共振能量转移技术的原理和...; 孙磊; 关键词：蟾酥蟾蜍灵癌细胞凋亡荧光共振能量转移活性氧; 文献传递

Caspase-3参与调控蟾酥诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的凋亡被引量：11: 2008年; 采用基因质粒转染技术、荧光发射谱检测分析以及荧光共振能量转移(FRET)受体光漂白技术,首次在活细胞中实时检测中药蟾酥(Chan-Su,CS或bufonis venenum)诱导人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞凋亡过程中caspase-3的活化特性.采用CCK-8(Cell Couneing Kit-8)技术检测发现,蟾酥对细胞的活性具有显著的抑制作用;蟾酥处理稳定表达FRET质粒SCAT3的人肺腺癌细胞后,在不同的时间检测活细胞中SCAT3的荧光光谱;利用共聚焦扫描荧光显微成像技术检测蟾酥处理后细胞的形态,从而进一步证实蟾酥诱导细胞凋亡.实验结果表明:a.蟾酥可以有效抑制人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞的增殖活性并诱导细胞的死亡.蟾酥对细胞的抑制作用具有剂量依赖性;b.蟾酥处理细胞6h后能检测到明显的细胞凋亡小体,连续作用24h后细胞全部皱褶,并有部分细胞破碎;c.蟾酥作用细胞2h就能明显切割细胞内的SCAT3,细胞内SCAT3的切割程度随着蟾酥作用时间的延长而增加,24h内细胞内的SCAT3完全被切割.受体光漂白实验也证实了该结论,表明caspase-3参与调控了蟾酥诱导的细胞凋亡过程.; 陈同生王小平孙磊王会营王龙祥; 关键词：蟾酥

活细胞中丝裂霉素诱导肺腺癌细胞凋亡机理的分析: 2008年; 为了分析丝裂霉素(mitomycin C,MMC)引起的肺腺癌细胞(ASTC-a-1)凋亡,实验通过CCK-8试剂盒检测不同浓度MMC对ASTC-a-1活性的影响,选择10μg/mL的MMC处理ASTC-a-1。利用Hochest 33258染色观察MMC引起的ASTC-a-1凋亡,发现MMC可引起细胞缩小,核浓缩。为了进一步研究MMC引起凋亡的途径,通过脂质体转染pSCAT3质粒,利用光漂白技术和光谱技术观察Caspase-3是否活化;通过转染Bax和Ds-Red质粒观察Bax在凋亡过程中的位置变化及与线粒体的关系。结果显示:MMC可以诱导ASTC-a-1细胞内Caspase-3活化,并使Bax向线粒体转移聚集。在活细胞中证实Caspase-3和Bax参与了MMC引起的ASTC-a-1凋亡。; 王会营陈同生孙磊; 关键词：丝裂霉素肺腺癌细胞凋亡 CASPASE-3 BAX

紫杉醇诱导不依赖于Caspase-3细胞类似Paraptosis的荧光光谱分析被引量：6: 2008年; 研究了紫杉醇(Taxol)诱导人肺腺癌细胞(ASTC-a-1)类似Paraptosis的特征和机理。采用CCK-8技术检测了抑制细胞活性的特性,结果表明大于70μmol.L-1浓度的紫杉醇可以显著抑制细胞活性;采用激光共聚焦扫描荧光成像从形态上检测了紫杉醇诱导细胞死亡的形态特征,表明紫杉醇诱导了类似副凋亡(Paraptosis)特征的细胞肿胀和细胞质空泡化,而且没有细胞膜皱褶、细胞核浓缩等细胞凋亡的特征;通过基因质粒转染在细胞转染稳定表达基于荧光共振能量转移(FRET)质粒SCAT3,并利用FRET受体光漂白技术和荧光光谱检测分析技术研究了紫杉醇诱导细胞类似Paraptosis过程中Caspase-3的活化特性,结果表明在紫杉醇诱导细胞质肿胀和细胞死亡的过程中Caspase-3没有被活化。以上研究结果表明紫杉醇可以通过类似Paraptosis的方式明显诱导细胞程序性死亡,该过程不依赖于Caspase-3的活性。; 陈同生王小平孙磊王会营王龙祥; 关键词：荧光光谱

消癌平诱导caspase-3活化动态过程的实时监测被引量：1: 2007年; 消癌平是从萝摩科(Asclepiadaceae)植物通关藤(Marsdenia tenacissima)根部提取的药物,已经广泛应用于癌症和多种炎症的临床治疗,并且具有较好的疗效。将消癌平注射液与细胞培养液按照1∶1的比例混合后共同培养人肺腺癌(ASTC-a-1)细胞,通过CCK-8方法检测发现消癌平能够显著抑制细胞的增长。然后利用荧光共聚焦扫描显微镜和荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)技术在稳定表达了SCAT3质粒的单个ASTC-a-1细胞中实时动态监测消癌平处理后SCAT3的空间分布以及SCAT3被caspase-3切割的动态过程。实验结果表明:消癌平处理后20 min中SCAT3开始向细胞核以及细胞膜部位转移,约在100min左右SCAT3被迅速切割。; 陈同生王龙祥孙磊王会营邢达; 关键词：消癌平 CCK-8

蟾酥灵诱导细胞内caspase-3活化特性荧光分析被引量：3: 2008年; 采用多光子激发荧光光谱和寿命成像显微技术,在单个活细胞内实时检测蟾酥灵(bufalin,Bu)诱导人类肺腺癌(ASTC-a-1)细胞死亡过程中caspase-3的活化特性.利用CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测蟾酥灵对人类肺腺癌细胞活性的抑制效应.蟾酥灵处理稳定表达FRET质粒SCAT3的人类肺腺癌后,在不同时间点检测单个活细胞中SCAT3的多光子激发荧光光谱及其供体ECFP的荧光寿命,从而检测bufa-lin诱导细胞凋亡过程中caspase-3活化特性.实验结果表明:蟾酥灵以浓度依赖性的方式显著地抑制人类肺腺癌细胞的生长;蟾酥灵处理细胞24h后,细胞内SCAT3未被切割,而蟾酥灵作用细胞48h后SCAT3被切割.说明caspase-3参与调控蟾酥灵诱导人类肺腺癌细胞凋亡的过程.; 屈军乐潘文良赵伶羚孙磊王小平陈同生; 关键词：CASPASE-3 荧光共振能量转移

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孙磊