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周永安
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1
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供职机构:
北京大学第三医院
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发文基金:
山西省科技攻关计划项目
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
苏丽萍
北京大学第三医院
王艳芳
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2010
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bcr—abl基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达
2010年
目的构建慢性粒细胞白血病bcr—abl融合基因的真核表达载体,并在哺乳动物细胞COS-7中高效表达。方法提取慢性粒细胞白血病K562细胞的RNA,经RT—PCR技术扩增得到bcr—abl基因后,将其克隆人真核表达载体pEGFP—N3中,并进行PCR和酶切鉴定。鉴定为阳性的克隆,再进一步进行测序分析。将构建成功的真核表达载体转入COS-7细胞中进行瞬时表达。结果反转录PCR扩增后的产物,经琼脂糖凝胶电泳可以在约874bp处看见一特异性的条带,序列分析证明扩增产物与GeneBank中的bcr-abl基因序列相同。将pEGFP—bcr-abl真核表达载体转入COS-7细胞后,经RT—PCR、Westernblotting检测证明表达产物正确。结论成功构建了含有bcr-abl融合基因的真核表达质粒,从而为进一步研究其结构和功能,寻找CML诊疗的新方法奠定了基础。
王艳芳
苏丽萍
周永安
关键词:
慢性粒细胞白血病
基因克隆
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