刘永刚
- 作品数：114 被引量：373H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- EIAV反式激活蛋白(TAT)基因的分子克隆与序列测定
- 2002年
- 以马传染性贫血病毒 (EIAV)疫苗毒感染驴巨噬细胞培养物 ,在病毒繁殖期提取细胞总 RNA,反转录后使用特异引物扩增病毒基因组拼接产物。将扩增产物克隆、测序并与基因组全序列比较 ,确定了编码 EIAV反式激活蛋白(TAT)的转录产物及阅读框架 ,发现至少有 2种拼接产物编码 TAT。比较 2种阅读框架 ,以保守序列作为模板扩增得到完整的编码 EIAV反式激活蛋白的基因。
- 周家喜张宝山刘永刚孔宪刚刘胜旺孙成群刘相东
- 关键词：马传染性贫血病毒测序TAT基因分子克隆
- 表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组病毒免疫及强毒攻击后外周血T淋巴细胞亚群的动态被引量：2
- 2006年
- 采用流式细胞检测技术对表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)、新城疫弱毒疫苗以及传染性喉气管炎弱毒疫苗免疫和传染性喉气管炎以及新城疫强毒攻击后外周血T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCRγδ+)的变化动态进行监测。重组疫苗和禽痘疫苗免疫之后,CD8+和TCRγδ+的细胞数先升高后回落;在NDV强毒攻击之后,ND疫苗免疫组的TCRγδ+数量升高,rFPV-gB-F免疫组的三种细胞数量在第1周都下降,随后升高;ILT疫苗在免疫后的第1周,CD4+细胞数量下降。结果提示rFPV-gB-F可以诱发相应的细胞免疫应答,但是有关传染性喉气管炎病毒导致的细胞免疫需要进一步的研究。
- 智海东王云峰孙永科张晶王玫彭金美刘永刚童光志
- 关键词：传染性喉气管炎新城疫重组禽痘病毒外周血T淋巴细胞
- 致病性马兽疫链球菌的分离鉴定、生物学特性及其M-like基因的序列分析被引量：11
- 2012年
- 为鉴定锦州某猪场引起关节炎病疫情的病原,本研究将患猪关节液在血平板培养基上培养进行细菌分离;对分离细菌进行形态学观察、生化反应、致病性试验及药物敏感性试验;并对其M-like基因进行克隆和测序分析。结果在显微镜下观察到周围具有透明的β溶血环的革兰氏阳性中长链球菌,经生化反应及M-like基因鉴定为马兽疫链球菌(命名为10JZ12);分离株10JZ12对小鼠的致死剂量为1.75×108cfu;并对苯唑西林、青霉素G、红霉素、克拉霉素、克林霉素、米诺环素、环丙沙星、左氟沙星、多粘菌素B、呋喃妥因敏感,对氯霉素、四环素、诺氟沙星、复方新诺明不敏感。
- 王淑杰姜成钢武嘉男刘永刚金家民刘鹤蔡雪辉张秀英
- 关键词：PCR
- 马传染性贫血病病毒核心蛋白基因的克隆和表达被引量：1
- 1999年
- 根据美国马传染性贫血病病毒（EIAV）Wyoming株基因序列，设计扩增EIAVgag和p26基因的引物，用PCR法能忠实的分别扩增出全长gag和p26基因。经用杆状病毒表达系统对所获gag和p26基因进行克隆和重组，获得了高效稳定表达Gag和p26蛋白的重组杆状病毒（rBVs）。含有gag和p26基因的重组杆状病毒感染昆虫Sf21细胞，经无血清昆虫细胞培养基增殖和纯化，每升培养物能获得2mgCag或12mgp26蛋白。
- 孔宪刚孙荣芳刘永刚张宝山刘胜旺卢景良
- 关键词：传染性贫血病病毒重组杆状病毒核心蛋白
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒依赖Caspase途径诱导仔猪胸腺细胞凋亡被引量：2
- 2016年
- 为研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Hu N4株诱导断奶仔猪胸腺细胞凋亡的分子机制,本实验通过免疫荧光技术、流式细胞术、荧光定量PCR和western blot等方法检测HP-PRRSV感染仔猪胸腺内细胞凋亡相关因子Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3表达量的变化。结果显示:HP-PRRSV感染仔猪后,胸腺内表达凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的细胞比例显著升高,并且凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3表达量也明显升高。以上结果表明:HP-PRRSV感染仔猪引起胸腺细胞凋亡是通过Caspase依赖性通路介导。本研究为进一步了解HP-PRRSV感染机制提供了实验依据。
- 张冲赵识非王刚于颖刘永刚常亚飞涂亚斌王淑杰姜成刚蔡雪辉
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞凋亡CASPASE-8CASPASE-9CASPASE-3
- 一株致病性血清2型猪链球菌的多位点序列分型及其灭活后对小鼠的免疫保护效果评价
- 2015年
- 为鉴定一株2012年分离自广东省的致病菌并评价其免疫原性,本研究对该分离株进行分型鉴定和MSLT分型分析。鉴定结果显示,该分离株为血清2型猪链球菌(S.suis);其MSLT分型为ST1型,等位基因图谱是1、1、1、1、1、1、1,与高致病性的世界流行株P1/7同型;毒力基因型为Mrp+/Ef+/Sly+,将其命名为GD。进一步使用GD灭活菌以3×108cfu剂量3次免疫小鼠,免疫后分别采用GD,7型、9型S.suis WH和ZD进行攻毒试验。动物试验结果显示,免疫后小鼠抗体水平显著升高;对GD、WH和ZD的保护率分别为87.5%、87.5%和75%;免疫组小鼠血液和脏器内的细菌载量均显著低于对照组,而且无明显病变。本研究结果表明,GD灭活疫苗可以对不同血清型S.suis攻毒提供有效的免疫保护,可以作为预防S.suis病的有效灭活疫苗候选株。
- 高明明王淑杰金家民刘永刚陶冶李爱东张璐李莉姜成刚王刚申红蔡雪辉
- 关键词：猪链球菌灭活疫苗免疫保护
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒GD3株的分离鉴定及其分子特征被引量：1
- 2009年
- 2005年从广东发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中,分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),命名为GD3株。采用RT-PCR、IFA对分离毒株进行鉴定,并在Marc-145细胞上完成了病毒的增殖和理化性质的鉴定。应用RT-PCR方法扩增出GD3株的6条基因大片段,扩增产物克隆于pMD18-T载体鉴定后测序,同时应用RACE技术对GD3株的5'末端进行扩增和测序。结果表明GD3株基因组全长15425nt,包含个9开放阅读框,5'UTR长189nt,3'UTR长150nt。序列分析结果表明,GD3株在分子遗传演化上介于PRRSV变异毒株(HuN4株、JXA1株)和CH-1a之间,与HuN4和JXA1之间的相似性为97.1%和97.2%;与CH-1a的核苷酸相似性为94.9%。
- 马平蔡雪辉刘永刚石文达王淑杰王洪峰李成君张琪
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- HP-PRRSV HuN4株及其致弱过程中的不同代次病毒对仔猪外周免疫器官及肺脏的损伤被引量：1
- 2014年
- 为了研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)HuN4株在其致弱过程中对仔猪外周免疫器官及肺脏损伤的变化,试验分别采用HuN4F5及其致弱代次F15、F23、F30及HuN4弱毒疫苗F112感染30日龄PRRSV抗原抗体阴性健康断奶仔猪,每天进行体温测定及临床症状观察,并在感染后0,3,5,7,10天检测病毒血症情况。病毒感染后10天剖杀试验猪,观察外周免疫器官及肺脏的病理变化并对肺脏和主要外周免疫器官病毒载量进行测定。结果表明:HuN4 F5、HuN4 F15组在临床症状、病毒血症、外周病毒载量及病理变化方面都明显比其他组严重,HuN4 F23组发病明显减轻,HuN4 F30组、HuN4 F112组无明显发病特征,与空白对照组无明显差异。说明HP-PRRSV HuN4株在致弱过程中,传代至30代时毒力发生显著减弱。
- 李爱东王刚刘永刚陶冶李莉涂亚斌王淑杰姜成刚蔡雪辉
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒致弱毒株肺脏病理损伤
- 地塞米松对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染仔猪的影响被引量：1
- 2015年
- 为研究地塞米松（DEx）对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP—PRRSV）感染仔猪造成的免疫系统和呼吸系统损伤的影响，本实验在断奶仔猪感染HP-PRRSVHuN4株前后，肌肉注射不同剂量的DEX。观察临床症状，检测其免疫系统相关指标的变化。结果显示：不同剂量DEX注射组实验猪均表现典型临床症状，虽然其外周血中的促炎性细胞因子IL-1β、IL-6及TNF—d水平降低，CD4＋CD8‘T淋巴细胞亚群比例较HuN4单独感染组升高，CD8＋CD4-T细胞比例较HuN4单独感染组降低，但DEX注射组仔猪体温始终维持在40℃-42℃，肺部、胸腺和淋巴组织病变加重，死亡率达到100％（10／10），而HuN4单独感染组仔猪死亡率仅为25％（1／4）。表明DEX对HP—PRRSV感染的断奶仔猪虽具有一定的抑制炎症反应作用，但加重了HP-PRRSV感染的不利影响。本研究为全面防控HP—PRRSV提供新的实验依据。
- 佟杰王刚于颖张冲常亚飞刘永刚涂亚斌汤艳东姜成刚王淑杰蔡雪辉
- 关键词：地塞米松促炎性细胞因子
- 不同毒力PRRSV毒株感染猪体后的病毒抗原分布的比较
- 54头40-42日龄周龄左右的仔猪,分别接种HuN4-F80弱毒和HuN4强毒株,检测并比较病毒抗原的数量及分布。免疫荧光及免疫组化结果显示HuN4组各脏器的病理抗原阳性检出率均明显高于HuN4-F80组和对照组。阳性细...
- 张卓蔡雪辉田志军刘永刚安同庆吴东来胡守萍
- 关键词：PRRSV免疫荧光巨噬细胞
- 文献传递
