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牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达及其表达产物的鉴定被引量：3: 2012年; 试验旨在构建微小隐孢子虫表面抗原CP15基因原核表达载体并获得重组CP15蛋白。试验以已知重组质粒pMD-CP15为模板,PCR方法扩增出CP15基因片段,并亚克隆到pGEX4T-3,构建了在E.coli BL21中GST融合表达载体pGEX-CP15;经1mmol/L IPTG进行诱导表达获得目的蛋白,其大小采用SDS-PAGE电泳和Western blotting进行鉴定。结果表明,扩增出约390bp的微小隐孢子虫表面抗原CP15基因片段并成功构建pGEX-CP15质粒,表达出分子质量为42ku的融合蛋白,与推导的理论值相符。Western blotting显示该蛋白能被GST血清识别。牛微小隐孢子虫表面抗原CP15基因在大肠杆菌中得到了高效表达。; 满达兰丽王艳霞王敏格日勒图; 关键词：原核表达

应用表达微小隐孢子虫P23的重组干酪乳杆菌建立微小隐孢子虫IFAT诊断方法: 2010年; 本试验旨在建立IFAT和间接ELISA方法作为微小隐孢子虫病诊断方法。应用DNA重组技术,构建原核表达载体pGEX-P23,经IPTG诱导表达出GST-P23融合蛋白,并进行纯化,将该重组融合蛋白作为包被抗原,建立ELISA诊断方法;同样构建重组载体pMG-P23,用电转化方法将其转入干酪乳杆菌中,称为重组活干酪乳杆菌(含pMG-P23),以此为已知抗原,建立IFAT诊断方法。应用ELISA和IFAT方法检测来自内蒙古地区的508份牛血清、187份绵羊血清和197份山羊血清:其中ELISA方法在各种动物血清中阳性率依次分别为0.59%、5.88%和4.57%,而IFAT方法则为0.19%、5.88%和4.57%。2种检测方法阳性符合率在牛血清样品中为33.33%,在绵羊和山羊中则均为100%。试验结果表明,重组抗原P23具有良好的反应原性,2种诊断方法的结果基本吻合,显示出良好的一致性和敏感性,可在微小隐孢子虫病的诊断实践中推广应用。; 格日勒图石泉王艳霞兰丽满达张和平; 关键词：微小隐孢子虫 ELISA IFAT

微小隐孢子虫P23抗原在重组干酪乳杆菌中的分泌表达及其免疫原性被引量：1: 2012年; 本实验以微小隐孢子虫 Cryptosporidium parvum 子孢子抗原P23基因和信号肽基因Usp45为材料,构建干酪乳杆菌 Lactobacillus casei 中分泌表达P23蛋白的重组载体pMG-Usp45-P23.在培养物上清和细菌裂解组分中,分别以SDS-PAGE、Western blotting、IFAT和ELISA等不同方法检测P23蛋白的分泌和表达情况,并用已获得的P23蛋白分泌产物体外刺激Wistar大鼠淋巴细胞,评价其淋巴细胞转化活性.结果表明,分别在细菌培养物上清和破碎菌体组分中检测到大小约为20 kDa（不含信号肽）和23 kDa （含信号肽）的P23蛋白分泌和表达产物.并且该P23蛋白分泌产物与ConA相当,具有显著的淋巴细胞转化活性.本实验为进一步研制动物微小隐孢子虫 C.parvum 活菌疫苗载体的构建奠定了基础.; 石泉玉斯日古楞兰丽王艳霞贾洪林玄学南张和平格日勒图; 关键词：干酪乳杆菌微小隐孢子虫分泌表达

短小乳杆菌内蒙古分离株S-层蛋白的普查、鉴定和基因分析: 2012年; S-层蛋白(S-layers protein)是位于某些细菌表面的高度有序的具有超微结构的一种外膜蛋白。本试验以蒙古族传统乳制品中分离的短小乳杆菌(Lactobacillus brevis)为材料,应用SDS-PAGE技术对若干乳杆菌进行S-层蛋白的普查,并应用PCR方法克隆出L.brevis的slp基因,对该slp基因进行测序及序列分析。试验结果表明,SDS-PAGE电泳结果显示L.brevis样品在44～55 ku之间出现目的条带,与文献报道的S-层蛋白大小范围一致;PCR方法正确扩增出大小约为1300 bp的slp基因,经DNAStar软件遗传分析发现该基因与鸡乳酸杆菌株(GenBank登录号:AY597266.1)的亲缘关系和遗传距离最近,与其他种类乳酸菌遗传距离也非常相近;经Genetyx生物软件推导出的S-层蛋白大小理论值约为47 ku,具有显著的外膜蛋白的特性。本试验为后续遗传改造等研究工作奠定基础。; 兰丽魏建民王艳霞王敏满达格日勒图; 关键词：S-层蛋白克隆与序列分析

微小隐孢子虫Cp23基因在短乳杆菌S-层蛋白中的嵌合型原核表达载体的构建: S-层蛋白/(S-layers protein/)通常位于细菌和古生菌细胞壁或细胞膜外表面,呈单分子晶格状结构。这些蛋白具有独特的固有属性,易被化学剂破裂,蛋白晶体又可重新装配成最初的晶格。其功能有维持细菌细胞的形状,结...; 兰丽; 关键词：微小隐孢子虫 S-层蛋白; 文献传递

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兰丽