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猪IFN-α基因在干酪乳酸杆菌中的表达及反应活性鉴定: 2015年; 【目的】构建能够稳定表达猪α-干扰素(IFN-α)成熟蛋白的重组干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei CECT5276),为将其作为口服疫苗来提高动物机体免疫力奠定基础。【方法】从质粒pMD18-IFN-α扩增出猪IFN-α成熟蛋白基因,再将其定向克隆到干酪乳酸杆菌整合型表达载体pMJ67的lac启动子下游,得到重组质粒pMJ67-IFN-α,电穿孔转化干酪乳酸杆菌。抽提干酪乳酸杆菌基因组DNA,进行PCR扩增及测序鉴定。采用半定量RTPCR检测猪IFN-αmRNA在干酪乳酸杆菌中的转录水平;采用Western blot对重组干酪乳酸杆菌菌体进行分析,检测其表达产物的活性;用双抗体夹心ELISA法确定最适的乳糖诱导质量浓度。【结果】PCR扩增获得了501bp的IFN-α,成功构建了重组质粒pMJ67-IFN-α,转化干酪乳酸杆菌后获得了重组乳酸杆菌。半定量RT-PCR结果显示,IFN-αmRNA在诱导16h时表达水平最高;Western blot分析表明,构建的重组干酪乳酸杆菌成功表达出了相对分子质量约19ku的重组蛋白,其可与鼠抗猪IFN-α抗体发生特异性反应。ELISA结果表明,当乳糖诱导质量浓度达到8g/L时,猪IFN-α成熟蛋白的表达量达到最大,为1.3μg/L。【结论】将猪IFN-α成熟蛋白基因整合到干酪乳酸杆菌基因组中,构建的重组乳酸杆菌能够稳定表达猪IFN-α成熟蛋白。; 马世杰李坤付朋飞郭晓庆高晓云崔保安陈红英; 关键词：电力系统

猪细小病毒河南分离株全基因组克隆及序列分析被引量：4: 2015年; [目的]进一步了解河南地区猪细小病毒（PPV）的变异特点。[方法]利用PCR方法,对河南郑州、周口、济源等地采集的疑似PPV感染的病料进行检测。PCR检测为阳性的病料经处理后,同步接种猪睾丸细胞盲传6代,对4株PPV全基因组进行分段克隆及测序,并与Gen Bank登录的国内外PPV流行株全基因组进行比较。[结果]获得的4株PPV全基因组序列全长均为4 679 bp。4个毒株之间的核苷酸同源性介于99.6%-99.8%,与其他毒株间核苷酸同源性为98%-100%,遗传进化较为稳定。[结论]为PPV在河南地区分子流行病学调查及遗传变异分析奠定了基础。; 陈龙彪高晓云吴宇阳冯亚琼陈红英崔保安马世杰郭官鹏; 关键词：猪细小病毒全基因组克隆

猪α干扰素基因在干酪乳酸杆菌中的表达: 从质粒pMD18-IFN-α扩增出猪α干扰素(IFN-α)基因成熟蛋白序列,克隆到含有信号肽的质粒pUCK-SP中,获得重组质粒pUCK-SP-IFN-α。再将NdeⅠ和EcoRⅠ双酶切获取的SP-IFN-α片段插入到同...; 陈红英马世杰李坤付朋飞郭晓庆高晓云崔保安; 关键词：猪Α干扰素抗病毒活性; 文献传递

猪细小病毒河南分离株全基因组克隆及序列分析: 引言猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,主要表现为胎儿和胚胎的感染和死亡。PPV又常同猪伪狂犬病毒(PRV)、乙型脑炎病毒(JEV)、猪圆环病毒(PCV)、猪瘟(...; 陈龙彪高晓云冯亚琼陈红英崔保安郭官鹏马世杰吴宇阳; 关键词：PPV 全基因克隆

猪IL-18基因在干酪乳酸杆菌中的表达: 白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)是主要由单核巨噬细胞产生的一种细胞因子,其生物学活性主要通过调节IFN-y的表达来提高机体的细胞免疫水平。IL-18在抗病原微生物感染、抗肿瘤及抗超敏反应等方面有...; 马世杰; 关键词：电转化; 文献传递

猪圆环病毒2型ORF2基因截断表达及ELISA抗体检测方法的初步建立: 前言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)是断奶仔猪多系统衰竭综合征等相关疾病的主要病原。PCV2感染可损伤猪体的免疫系统造成免疫抑制,易造成PPV、PRRS及其他病原的继发感染,给养猪业造...; 郭官鹏刘畅陈龙彪高小云马世杰陈红英崔保安; 关键词：猪圆环病毒2型 ORF2基因蛋白表达 ELISA

猪α-干扰素复合制剂的制备方法: 本发明公开了一种猪α-干扰素复合制剂的制备方法，它的步骤如下：（1）人工合成150bp的短小乳酸杆菌信号肽序列，构建出pUCK-SP载体；（2）构建出pUCK-SP-IFN-α质粒，pUCK-SP-IFN-α质粒经<I>...; 陈红英崔保安李坤马世杰魏战勇钞安军李新生; 文献传递

猪α干扰素基因在干酪乳酸杆菌中的表达: 从质粒pMD18-IFN-α扩增出猪α干扰素(IFN-α)基因成熟蛋白序列,克隆到含有信号肽的质粒pUCK-SP中,获得重组质粒pUCK-SP-IFN-α。再将NdeⅠ和EcoRⅠ双酶切获取的SP-IFN-α片段插入到同...; 陈红英马世杰李坤付朋飞郭晓庆高晓云崔保安; 关键词：猪Α干扰素基因表达抗病毒活性; 文献传递

猪圆环病毒2型ORF2基因截断表达及ELISA抗体检测方法的初步建立被引量：3: 2014年; 为建立以重组PCV2Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建了猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET28a-ORF2。SDS-PAGE显示,在0.1mmol/L IPTG和37℃条件下诱导4h,重组Cap蛋白高效表达。Western blotting证实该蛋白能够被PCV2阳性血清特异性识别。以纯化的蛋白为抗原建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原最适包被质量浓度为2mg/L;血清最佳稀释度为1∶100;酶标二抗最适浓度为1∶2 000,该方法的敏感性为86.96%,特异性为100%。用该方法对河南省152份猪血清样品进行检测,与间接免疫荧光(IFA)的符合率为85.53%(130/152),与商品化的韩国金诺PCV2ELISA试剂盒的符合率为88.16%(134/152)。本试验成功建立了PCV2血清抗体间接ELISA方法,具有较高的敏感性和特异性,可用于大规模的血清学检测。; 郭官鹏刘畅陈龙彪马世杰高晓云陈红英崔保安; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白蛋白纯化间接ELISA

猪α干扰素基因在干酪乳酸杆菌中的表达: 粒pMD 18-IFN-cα扩增出猪α干扰素(IFN-α)基因成熟蛋白序列,克隆到含有信号肽的质粒pUCK-SP中,获得重组质粒pUCK-SP-IFN-α.再将NdeⅠ和EcoRⅠ双酶切获取的SP-IFN-α片段插入到同...; 马世杰李坤高晓云付朋飞郭晓庆崔保安陈红英; 关键词：基因表达

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马世杰

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