韩凌霞
- 作品数：182 被引量：392H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生哲学宗教更多>>
- 原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析
- 2017年
- 目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。
- 王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞
- 关键词：原核表达
- 不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病的抗性研究被引量：3
- 2014年
- 目的探索不同MHC-B单倍型SPF鸡对禽白血病(Avian leukosis,AL)的抗性差异,为建立AL抗性和易感鸡系提供实验依据。方法选择纯合G1、G5、G6鸡系及杂合G8鸡系雏鸡进行人工感染白血病病毒A亚群(Avian leukosis virus,ALV-A)RAV-1毒株实验,G8系雏鸡(6羽)作为对照。攻毒后对各鸡系的死亡率、病变率、血液中抗体水平以及外周血淋巴细胞的病毒载量等与抗性相关指标进行动态评估与统计学分析,最终确定抗性较强和较弱的鸡系。结果 G5系病变率和死亡率均明显高于其它攻毒鸡系,G1系最低,G6和G8系居中;G1系在攻毒后第5周开始,抗体效价一直高于其它鸡系,而G5系则最低,并且在攻毒后第8周至11周和第15周至18周,G1系的抗体效价显著高于G5系(P<0.05);G1系的病毒载量在攻毒后第7周至15周,低于其它鸡系,而G5系自攻毒后第9周至13周,极显著高于G1系(P<0.01)。结论 G1系在感染ALV后,死亡率较低,病变轻微,抗体保护力较强,且病毒的增殖较慢,因而其对AL具有较强的抗性,而G5系则相反较为易感。本研究不仅为建立AL抗性较强和较易感的鸡系提供了实验依据,而且对进一步阐明鸡主要组织相容性复合体(Major histocompatablity complex,MHC)多态性与AL抗病性的关系有重要作用。
- 廉传江周刚司昌德文辉强陈洪岩韩凌霞
- 关键词：SPF鸡禽白血病抗性
- 鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因vp1的原核表达及其抗原性分析被引量：4
- 2008年
- 通过RT-PCR方法克隆出DHV-1:161/79/V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a(+),获得重组质粒pET-VP1,转入E.coli Rosetta-gami(DE3) pLysS,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明在大肠杆菌中表达了1个相对分子量约为47ku的融合蛋白(Trx-His-VP1),将此融合蛋白用His-Ni+亲和层析法进行纯化。Western blot分析表明,Trx-His-VP1能与DHV-1阳性血清发生特异性反应,说明表达的结构蛋白VP1具有良好的抗原性。
- 甘一迪刘家森姜骞孟庆文韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：VP1基因原核表达
- 常州市金坛区畜禽免疫抗体监测的情况分析
- 2016年
- 为检验春防畜禽免疫效果,查找目前免疫工作中存在的问题,为开展疫病综合防控提供依据,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)对采集的726份猪血清样品进行猪瘟(CSF)、高致病性猪蓝耳病(HP-PRRS)、O型口蹄疫(FMD)的抗体检测,对采集的135份羊血清样品进行O型、亚洲Ⅰ型FMD和小反刍兽疫(PPR)的抗体检测;利用血凝抑制试验(HI)对采集的933份鸡血清样品进行高致病性禽流感(HPAI)、新城疫(ND)的抗体检测。结果表明:HPAI、ND、HP-PRRS免疫效果最好,平均免疫抗体合格率基本达到100%;HP-PRRS平均免疫抗体合格率超过99%;PPR、CSF、猪FMD免疫效果较好,平均免疫抗体合格率分别为93.33%、88.84%、88.84%;羊FMD免疫效果良好,O型和亚洲Ⅰ型FMD平均免疫抗体合格率分别为80.00%和82.22%。说明常州市金坛区2015年度春防畜禽免疫情况总体良好,但在免疫程序、动物饲养管理以及免疫技术等方面仍需改进。
- 蔡文博吴少莲徐荣军陆则基周娟杨文卫韩凌霞陈洪岩
- 关键词：免疫高致病性猪蓝耳病小反刍兽疫高致病性禽流感新城疫
- SPF禽饲育室净化空调运行维护过程中的几点体会
- 2010年
- 净化空调是SPF级禽饲育室中的核心设备,它的作用主要是排出污染空气及有味气体,送入净化空气,保持各房间的压力梯度,保证动物的舒适及工作人员的健康,它是维持设施运行的重要因素,也是SPF级禽饲育室设备设施运行维护的重中之重。
- 张伟李艳华李昌文于海波韩凌霞司昌德曲连东
- 关键词：净化空调防冻节能
- EIAV基因转移载体包装盒表达质粒的构建
- 2009年
- 在马传染性贫血病毒(EIAV)基因转移载体成功构建并优化的基础上,构建了EIAV基因转移载体包装盒表达重组质粒。分别根据EIAV驴胎皮肤细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆(pLGFD3-8)和驴白细胞弱毒疫苗株感染性分子克隆pOK8266T序列,设计并合成引物,扩增EIAVgag/pol全基因和rev基因的第2个外显子,分别插入真核表达载体pCDNA3.1(+),获得表达载体pCDFGP和pCDREV,与亲本株的核苷酸同源性分别是99.6%和99.8%,编码蛋白Gag、Pol及Rev蛋白的推测氨基酸同源性分别为99.2%、98.3%和100%。利用脂质体法,分别将pCDFGP和pCDREV单独及共转染HEK293细胞,利用EIAV阳性血清分别进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(westernblot),检测外源蛋白的表达情况。结果表明,双质粒共转染的细胞中转染后48h可检测到特异性荧光,转染后60h的细胞裂解产物中可以检测到55ku的Gag蛋白及26ku的p26蛋白,而单独转染pCDFGP和pCDREV的细胞,IFA和western blot试验结果均为阴性。结果表明同时存在gag/pol和rev基因第4外显子的情况下,EIAV包装盒才能表达。
- 韩凌霞尹岚岚李亚明牛成明高鹏飞曲连东
- 关键词：马传染性贫血病毒
- 马立克氏病病毒囊膜糖蛋白B基因原核表达产物单抗的制备
- 2001年
- 用大肠杆菌 BL2 1表达了马立克氏病病毒 ( MDV)强毒 GA株的囊膜糖蛋白 B( g B)基因 ,通过 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS- PAGE)分离表达蛋白条带 ,切下并碾碎后作为免疫原制备单克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验 ( ELISA)和间接免疫荧光试验( IFA) ,得到 1株 GA株阳性的单克隆抗体杂交瘤细胞株 7C8。该单抗腹水的 ELISA效价为 1∶ 2 1 2 ,IFA效价为 1∶ 80 0 ,与 MDV不同致病型毒株 CVI988、GA、RB1 B、MD1 1、6 48A株感染的鸡胚成纤维细胞 ( CEF)均呈IFA阳性。 1∶ 1 0 0稀释时与 GA感染的 CEF在斑点酶联免疫吸附试验 ( dot- EL ISA)中呈阳性。
- 韩凌霞丁家波陈雷崔治中
- 关键词：马立克氏病病毒GB基因间接免疫荧光试验斑点酶联免疫吸附试验单抗
- I型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法
- 本发明提供了一种鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒一步法PCR检测方法，首先分别选取鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒中高度保守的基因为目标片段I和目标片段Ⅱ，设计并合成相应的特异性引物I和特异性引物Ⅱ；然后分别对鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒的基因组RNA...
- 赵丽丽陈洪岩韩凌霞张圆圆陆涛峰
- 文献传递
- 鸡白介素-10单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了鸡白介素-10单克隆抗体及其制备方法和应用。本发明以原核表达的重组蛋白ChIL-10为免疫原，真核细胞系表达的ChIL-10蛋白为筛选原，细胞融合后以IFA筛选杂交瘤细胞，筛选获得3株分泌鸡白介素-10单抗的...
- 韩凌霞廉传江文辉强司昌德林欢陈洪岩
- 文献传递
- MHC单倍型SPF鸭的培育及其TAP基因组序列分析
- 引言鸭主要组织相容性复合体（MHC）是一组紧密连锁高度多态的基因簇,其单倍型与宿主的抗病性和免疫应答水平密切相关[1,2],其中抗原提呈相关转运蛋白（TAP）基因毗邻MHCⅠ基因[3,4]。HBK鸭排除了10种特定病原体...
- 张晓娜武永淑吴少莲廉传江文辉强陈洪岩韩凌霞
