陈强
- 作品数：8 被引量：21H指数：3
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划湖北省全球基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恙虫病东方体Karp株56-kDa外膜抗原基因片段的原核表达及免疫原性研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨恙虫病东方体56-kDa蛋白在大肠埃希菌中的表达及作为诊断性抗原的可行性。方法用PCR扩增恙虫病东方体Karp菌株编码56-kDa蛋白长约1 100bp的DNA,克隆至表达载体pET30a(+)。表达产物经SDS-PAGE、质谱分析及western blot鉴定分析。重组蛋白质纯化后作为包被抗原,用方阵实验确定最佳浓度包被,ELISA法检测其与立克次体目16种成员及10种致病菌阳性血清的反应性。用此重组蛋白质免疫小鼠后制备抗血清,分别用ELISA及间接免疫荧光法(IFA)检测抗血清的效价。结果重组质粒经PCR及测序分析证明,56-kDa外膜抗原的基因片段以正确的读码框连入到pET30a(+)质粒载体中,SDS-PAGE结果表明重组蛋白质在约46-kDa处有表达的目的条带,western blot分析显示该条带可与1∶1 600稀释的兔抗Karp血清反应,证实其具有免疫活性。质谱分析鉴定该蛋白质为恙虫病东方体56-kDa蛋白;方阵滴定确定选择抗原的最佳稀释度为1∶1 600,特异性分析结果表明,重组蛋白质除与查菲埃立克体、嗜吞噬细胞无形体及五日热巴尔通体存在弱交叉反应外,与其他细菌均无交叉反应。IFA及ELISA检测表明抗血清效价可达1∶1 600。结论构建的重组蛋白质可以作为恙虫病东方体快速诊断的抗原。
- 王园园陈强于强张丽娟
- 关键词：恙虫病东方体原核表达免疫原性
- 模拟粪便标本中的单增李斯特菌的分离和检测被引量：4
- 2012年
- 目的建立针对粪便标本中单增李斯特菌的分离鉴定方法,评价方法的检测下限,以提高感染人群标本中单增李斯特菌的检出率,了解我国人群中该菌的携带及感染情况。方法对模拟人粪便标本进行二次增菌,采用Real-time PCR检测,并同时分离培养获得该病原菌。结果当每克模拟粪便标本中含有7 cfu的单增李斯特菌时,经过增菌后的标本用Real-time PCR方法可检测出阳性结果,并能够通过单增李斯特菌的选择培养基分离得到病原菌。结论本研究为从粪便标本中分离单增李斯特菌和由单增李斯特菌引起的食物中毒事件的病原学调查提供了技术支持,有利于对我国人群中单增李斯特菌的携带或感染状况进行调查分析。
- 王艳陈强李爱华叶长芸
- 关键词：单增李斯特菌
- 应用高分辨率熔解曲线技术检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c被引量：1
- 2012年
- 目的:探索高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析技术在检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c中的应用。方法:用HRM技术对20株O157:H7代表性菌株志贺毒素2基因进行分型,并与测序结果进行比较。结果:20份O157:H7样品中有3种类型熔解曲线。测序结果显示,12例A型熔解曲线中除1例为stx2a+stx2c杂合型外,其它均为原毒素基因型stx2a;1例B型熔解曲线测序结果为stx2a+stx2c杂合型,7例C型熔解曲线菌株测序结果均为stx2c纯合子。结论:HRM技术简便、快速,可作为志贺毒素2基因变种stx2c的检测方法。
- 陈强王涛孙晖王艳熊衍文卢珊
- 关键词：大肠埃希菌O157:H7高分辨率熔解曲线分析
- 大肠埃希菌(EHEC/EPEC)紧密黏附素基因的分型分析被引量：3
- 2012年
- 目的了解大肠埃希菌分离株eaeA基因的多态性。方法对不同来源的60株大肠埃希菌分离株的eaeA基因进行聚合酶链反应扩增后直接测序,测序结果在NCBI中进行BLASTn比对,根据比对相似性判定eaeA基因的型别。将获得型别的序列与GenBank中肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)和肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)代表性菌株型别的序列用Neighbor-joining法构建系统发生树,分析其进化关系。结果所有EHEC分离株的eaeA基因均为γ型,且序列完全一致。EPEC分离株的eaeA基因型以β1型为主,同时存在ε,κ,ι2,θ型。结论 EHEC分离株的eaeA基因相对保守,型别单一,而EPEC分离株的eaeA基因表现出较大的多态性。
- 陈强卢珊赵爱兰熊衍文
- 关键词：大肠埃希菌
- 肠出血性大肠埃希菌O157∶H7新接合质粒pO157_SalTraE序列分析
- 2014年
- 目的：分析我国肠出血性大肠埃希菌 O157∶H7暴发菌株携带的新接合质粒 pO157_Sal的序列特征。方法对我国不同来源携带 pO157_Sal 的大肠埃希菌 O157∶H7暴发菌株进行 traE 基因PCR 扩增、克隆测序，并在 GenBank 中比对检索其他来源大肠埃希菌 O157∶H7菌株的 TraE 序列，以邻接法构建基于 TraE 序列的系统发生树；在全质粒序列水平比较分析 pO157_Sal 与 pEC4115。结果我国不同宿主来源的暴发菌株携带的 traE 基因序列完全相同；pO157_Sal TraE 的相似性序列存在于不同国家不同宿主来源及不同分离年代的大肠埃希菌 O157∶ H7分离株中；pO157_Sal 中21个基因与pEC4115质粒编码的基因存在28％～51％的氨基酸相似性。结论虽然不同来源的大肠埃希菌O157∶H7菌株中存在相似性 TraE 序列或相似质粒 pEC4115，但 pO157_Sal 为我国暴发菌株所特有，其序列在暴发菌株间保守，提示其为特定的相同来源。
- 孙晖赵红庆熊衍文陈强
- 关键词：大肠埃希菌O157质粒
- 我国EAEC分离株对HEp-2细胞的粘附特征及集聚性粘附相关基因分析被引量：5
- 2012年
- 目的了解我国EAEC分离株的HEp-2细胞粘附特征、毒力基因和集聚性粘附基因情况,探讨建立PCR检测方法的可能性。方法选择31株分离自腹泻患者粪便的大肠埃希菌,采用HEp-2细胞粘附试验,获得菌株的粘附表型;采用PCR方法检测毒力基因(astA、aggR、pic)及集聚性粘附相关基因(aggA、aafA、agg3A、hdaA)。结果不同菌株在HEp-2细胞粘附试验中表现为不同的粘附表型,所含有的毒力基因及粘附相关基因不同。aggR基因阳性的13株菌中,7株表现为集聚性粘附(AA)表型,其中5株具有集聚性粘附相关基因。此外存在aggR基因阴性但对HEp-2细胞表现为集聚性粘附的非典型EAEC以及具有集聚性粘附相关基因hdaA却表现为对HEp-2细胞不粘附的菌株。结论 EAEC是一类高度异质性大肠埃希菌,HEp-2细胞粘附试验仍然是检测EAEC的"金标准";aggR基因是一种较好的PCR诊断靶基因,在aggR基因的基础上组合其他基因,建立EAEC检测的多重PCR方法具有重要的实际意义。
- 刘学通陈强孙晖赵爱兰徐建国熊衍文
- 关键词：HEP-2细胞
- 普通TaqMan探针及raqMan MGB探针real-time PCR检测无形体msp-2基因方法的建立与比较被引量：4
- 2011年
- 目的建立敏感、特异、定量real-time PCR方法,用于无形体病早期诊断及立克次体病鉴别诊断。方法通过GenBank Blast比较分析,选择世界各地39株无形体,以msp-2特异基因保守区设计普通TaqMan探针及TaqManMGB探针并比较分析。结果普通TaqMan探针及TaqMan MGB探针2种方法均具有良好的特异性,除无形体外,遗传亲缘关系较近的其他立克次体目成员(17种)均扩增阴性。临床上其他8种常见致病菌呈阴性扩增。灵敏性评估结果发现普通TaqMan探针及TaqMan MGB探针最低检出浓度分别为102copies/μl及10copies/μl。两种探针方法均具有较好的重复性。结论本研究建立了敏感、特异的无形体早期诊断及立克次体鉴别诊断的荧光定量PCR技术,TaqMan MGB探针灵敏性高于普通TaqMan探针。
- 王誓闻张丽娟王园园禹惠兰梁长威陈强于强
- 关键词：无形体荧光定量PCRTAQMAN
