陈培
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：第三军医大学新桥医院更多>>
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- Jagged1活化Notch通路促进破骨细胞分化并抑制其增殖被引量：4
- 2014年
- 目的 观察Jagged1通过活化Notch通路对人外周血CD14＋单核细胞破骨分化、增殖的影响.方法 免疫组织化学法检测Jagged1在肺癌骨转移标本中的表达,Ficoll法联合磁珠分选法分离人外周血CD14＋单核细胞,分别加入Jagged1重组蛋白、Jagged1重组蛋白及γ-分泌酶抑制剂（DAPT）分组培养,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测组织蛋白酶K（CK）、抗酒石酸性磷酸酶（TRAP）、降钙素受体（CTR）及Notch靶基因发状分裂相关增强子-1（HES-1）、HES相关YRPW主题-1（HEY-1）mRNA的表达,TRAP染色鉴定破骨细胞,扫描电镜检测破骨细胞溶骨功能.细胞计数法（CCK-8）检测CD14＋单核细胞增殖.结果 Jagged1在肺癌骨转移标本中高表达,癌旁组织无或低表达;Jagged1组TRAP、CK、CTR及HES-1、HEY-1 mRNA的表达、TRAP＋细胞数较对照组及DAPT组明显升高（P＜0.05）,而DAPT组与对照组比较均无明显变化;细胞培养48 h,Jagged1组细胞增殖较对照组及DAPT组明显抑制.结论 Jagged1通过活化Notch通路促进破骨前体细胞分化、抑制其增殖.
- 王汝杰邓小军刘复州邱浩邹传奇陈培王洪凯张莹初同伟周跃
- 关键词：JAGGED1破骨细胞NOTCH细胞分化
- 低氧抑制乳腺癌细胞中信号素3A表达并调控成骨前体细胞分化被引量：3
- 2016年
- 目的 :通过低氧刺激乳腺癌MCF-7细胞,比较常氧与低氧条件下获取的MCF-7细胞条件培养液对成骨前体细胞MC3T3-E1分化能力的影响,并初步探讨信号素3A(semaphorin 3A,Sema3A)表达对低氧调控乳腺癌骨转移中成骨细胞分化的作用。方法 :收集乳腺癌MCF-7细胞在常氧和低氧条件下培养48 h后的条件培养液,用其培养成骨前体细胞MC3T3-E1。采用BCIP/NBT碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)显色试剂盒和ALP活性检测试剂盒检测MC3T3-E1细胞中ALP的含量及活性,茜素红S(alizarin red S,ARS)染色法检测MC3T3-E1细胞的矿化情况。同时,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测常氧和低氧条件培养0、12、24和48 h后MCF-7细胞中Sema3A的表达变化。将重组人Sema3A蛋白加入到MCF-7低氧条件培养液处理的MC3T3-E1细胞中,实时荧光定量PCR法检测各组细胞中成骨分化相关蛋白ALP、Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)和转录因子Osterix(Osx)的m RNA表达水平。结果 :相比于常氧条件培养获得的MCF-7条件培养液组,低氧条件培养获得的MCF-7条件培养液可以使MC3T3-E1细胞中ALP的活性明显减弱(P<0.05),且ARS染色钙化面积明显减小(P<0.05)。低氧处理24和48 h后,MCF-7细胞中Sema3A的表达水平明显低于常氧条件下相同时间点的表达水平(P值均<0.05)。向低氧条件培养液培养的MC3T3-E1细胞中加入重组人Sema3A蛋白处理后,MC3T3-E1细胞中ALP、RUNX2、OCN和Osx m RNA的表达水平均较未加重组人Sema3A处理组明显升高(P值均<0.05)。结论 :体外低氧环境可下调乳腺癌MCF-7细胞中Sema3A的表达,进而抑制成骨细胞的分化。提示Sema3A可能是低氧环境下乳腺癌条件培养液抑制成骨细胞分化的重要因素之一。
- 徐峥陈武桂孙靖陈培初同伟
- 关键词：乳腺肿瘤细胞低氧成骨分化
- Jagged1活化Notch通路促进破骨细胞分化并抑制其增殖被引量：3
- 2014年
- 目的 观察Jagged1通过活化Notch通路对人外周血CD14＋单核细胞破骨分化、增殖的影响.方法 免疫组织化学法检测Jagged1在肺癌骨转移标本中的表达,Ficoll法联合磁珠分选法分离人外周血CD14＋单核细胞,分别加入Jagged1重组蛋白、Jagged1重组蛋白及γ-分泌酶抑制剂（DAPT）分组培养,采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测组织蛋白酶K（CK）、抗酒石酸性磷酸酶（TRAP）、降钙素受体（CTR）及Notch靶基因发状分裂相关增强子-1（HES-1）、HES相关YRPW主题-1（HEY-1）mRNA的表达,TRAP染色鉴定破骨细胞,扫描电镜检测破骨细胞溶骨功能.细胞计数法（CCK-8）检测CD14＋单核细胞增殖.结果 Jagged1在肺癌骨转移标本中高表达,癌旁组织无或低表达;Jagged1组TRAP、CK、CTR及HES-1、HEY-1 mRNA的表达、TRAP＋细胞数较对照组及DAPT组明显升高（P＜0.05）,而DAPT组与对照组比较均无明显变化;细胞培养48 h,Jagged1组细胞增殖较对照组及DAPT组明显抑制.结论 Jagged1通过活化Notch通路促进破骨前体细胞分化、抑制其增殖.
- 王汝杰邓小军刘复州邱浩邹传奇陈培王洪凯张莹初同伟周跃
- 关键词：JAGGED1破骨细胞NOTCH细胞分化
- Jagged1活化Notch通路促进RAW 264.7向破骨分化但抑制增殖被引量：7
- 2014年
- 目的:探讨Jagged1通过活化Notch通路对RAW 264.7细胞向破骨分化及增殖的影响。方法:将RAW 264.7细胞分三组培养:对照组(细胞培养基+鼠RANKL 50 ng/L)、Jagged1组(细胞培养基+鼠RANKL+Jagged1重组蛋白)、γ-分泌酶抑制剂(DAPT)组(细胞培养基+鼠RANKL+Jagged1重组蛋白+DAPT),实时荧光定量PCR检测各组破骨细胞标志基因组织蛋白酶K(Cathepsin K,CK)、抗酒石酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、降钙素受体(Calcitionin receptor,CTR)及Notch靶基因HES-1、HEY-1 mRNA的表达,TRAP染色鉴定破骨细胞,扫描电镜检测破骨细胞溶骨功能。免疫荧光检测NICD的表达变化,CCK-8检测RAW 264.7细胞增殖。结果:Jagged1组TRAP、CK、CTR及HES-1、HEY-1 mRNA的表达、TRAP+细胞数较对照组及DAPT组明显升高(P<0.05),而DAPT组与对照组均无明显变化;细胞免疫荧光显示Jagged1组NICD除表达于细胞膜、细胞质外,细胞核也有较高表达,对照组及DAPT组细胞核中NICD无明显表达;细胞培养48 h,Jagged1组细增殖较对照组及DAPT组出现明显抑制。结论:Jagged1通过活化Notch通路促进RAW 264.7向破骨细胞分化、抑制其增殖。
- 王汝杰刘复州沈伟伟胡旭陈培毛德举卓云云陈武桂周跃初同伟
- 关键词：JAGGED1NOTCH
- 有限稀释法分选人骨肉瘤143-B干细胞及鉴定
- 2015年
- 目的:探索人骨肉瘤143-B干细胞的分选及鉴定方法。方法:采用有限稀释法对143-B细胞进行干细胞的分选,并检测所获取细胞表面干细胞标志物Nanog和OCT4的表达水平;对所获取的细胞进行成骨及成脂诱导分化,以检测其是否具有多向分化的潜能;动物成瘤实验鉴定细胞的成瘤能力,耐药实验检测顺铂对细胞半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)的影响。结果:分选获得的单克隆143-L细胞具有较高的成球能力;143-L细胞表面Nanog和OCT4 m RNA和蛋白的表达水平均明显高于亲代143-B细胞;对其进行成骨及成脂多向诱导分化成功。143-L细胞的成瘤能力及耐药能力(顺铂对143-B及143-L细胞的IC50值分别为0.83和2.51μg/m L)均明显高于143-B细胞。结论:有限稀释法可以用于143-B细胞干细胞的分选。
- 毛德举胡旭张莹沈伟伟陈武桂陈培何建荣卓云云张超初同伟
- 关键词：骨肉瘤肿瘤干细胞
