郭兴华 作品数:27 被引量:226 H指数:9 供职机构: 中国科学院微生物研究所 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 江西省自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 轻工技术与工程 医药卫生 化学工程 更多>>
乳酸乳球菌NICE系统食品级载体pRNB48的构建 被引量:5 2006年 乳酸菌食品级NICE系统是目前较理想的可控制蛋白质生产的食品级诱导表达系统。实验构建的食品级表达载体pRNB48含α-aga食品级选择标记、θ型复制子和nisA启动子,与宿主菌L.lactisNZ9000共同构成乳酸乳球菌食品级NICE系统,可用于目的基因在乳酸乳球菌中高效诱导表达。 徐波 曹郁生 陈燕 郭兴华关键词:乳酸乳球菌 食品级载体 乳酸乳球菌NICE系统食品级分泌表达载体pRNV48的构建及铜绿假单胞菌融合外膜蛋白的表达 被引量:3 2006年 乳酸菌NICE系统是目前较理想的可控制蛋白质生产的食品级诱导表达系统,而乳酸菌分泌表达异源蛋白比细胞质表达更优越。本研究将以pVE5524为模板PCR扩增的1.5 kbSPUsp45-NucA-CWAM6-t1t2基因克隆到食品级细胞内诱导表达载体pRNA48上,构建成食品级细胞壁锚定表达载体pRNV48,与宿主菌L.lactisNZ9000共同构成乳酸乳球菌食品级细胞壁锚定诱导表达系统。为检测该系统的功能,将铜绿假单胞菌融合外膜蛋白基因OprF/H克隆进pRNV48中,并检测了OprF/H的表达量和免疫原性。 徐波 曹郁生 陈燕 郭兴华关键词:乳酸乳球菌 食品级载体 乳酸菌及其生长因子对人畜健康的作用 被引量:38 1993年 乳酸菌是自古以来就被人类作为食品微生物利用的一大类菌,只是近30年来由于厌氧菌培养技术的日益发展,才引起了微生物学家、营养学家、病理学家、免疫学家、微生态学家等的关注和重视。 孟涛 郭兴华关键词:乳酸菌 健康 啤酒花及其抗菌机理研究进展 被引量:2 2007年 就国内外对酒花的研究、啤酒花的发展及其应用历史、啤酒花的成分、酒花抗菌物质进行了分析和综述。重点对啤酒花的抗菌机理和抗菌特性进行了阐述。通过介绍一些常用和最新检测啤酒腐败菌的方法,论述了酒花抗菌机理对啤酒腐败菌检测的影响意义,展望了啤酒腐败菌检测的发展趋势。 张小军 郝彦玲 寇晓虹 罗云波 田洪涛 郭兴华关键词:啤酒花 抗性机理 啤酒腐败菌 短乳杆菌 罗伊氏乳杆菌原生质体的制备与再生条件的研究 被引量:14 2010年 研究细胞培养和溶菌酶酶解条件对罗伊氏乳杆菌原生质体形成率的影响以及罗伊氏乳杆菌原生质体在多种再生培养基中的再生条件,结果表明罗伊氏乳杆菌05-1和05-2原生质体形成的最适条件:在MRS培养基中接种量5%(两菌株活菌数分别为4.96×108 cfu/mL和8.04×107 cfu/mL),37℃静置培养至OD600值1.0(两菌株活菌数分别为2.36×1012 cfu/mL和6.56×109 cfu/mL)左右,酶解pH8.0、酶质量浓度20 mg/mL、酶解时间45min。在此最适条件下,两菌株原生质体形成率分别为90.2%和92.8%;在最适再生培养基RM1中,罗伊氏乳杆菌05-1和05-2原生质体的再生率分别为30.6%和23.2%;RM1中,胎牛血清(BSA)是罗伊氏乳杆菌原生质体再生不可获缺的物质。本研究为构建益生乳杆菌食品级基因克隆和表达系统,实现原生质体的转化及细胞融合育种与基因组洗牌分子育种,提供理论依据。 韩璞 田洪涛 苑社强 郭红敏 郭兴华 罗云波关键词:罗伊氏乳杆菌 原生质体 枯草芽孢杆菌分子克隆系统受体的改造 被引量:1 1993年 实验证明枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BR151和MI112中的pUB110质粒,在液体中传代要比固体斜面传代稳定。通过NTG诱变获得了对pUB110稳定的受体BSG.来自大肠杆菌的穿梭质粒在BSG菌中转化频率较亲本高。小的外源DNA片段插入pBE2后在BSG菌中转管传代30次是稳定的。 郭兴华 贾士芳 许怡关键词:枯草芽孢杆菌 克隆 受体 稳定性 纤维素酶 被引量:1 1994年 纤维素是地球上取之不尽、用之不竭、最丰富、可更新再生的资源之一。全世界由光合作用产生的纤维素酶每年在1000亿吨以上,占地球总生物量的40%,它是一切植物的主要成分,几乎占植物干重的三分之一到二分之一。纤维素与人类的生存有密切的关系。 郭兴华关键词:纤维素酶 利用pGhost系统筛选抗后酸化保加利亚乳杆菌 被引量:5 2015年 目的:利用p Ghost系统构建抗后酸化保加利亚乳杆菌。方法:利用载体p Ghost9:ISS1经复制型转座构建突变体,之后在p H 4.3条件下,突变细胞用含终质量浓度2 000μg/m L青霉素处理5 h。将处理后的菌液涂布在含终质量浓度2μg/m L红霉素的MRS平板上,长出的菌落分别点种p H 4.3和p H 6.5的MRS平板进行筛选,在低p H值条件下生长不良或不生长的菌株即目的菌株。经进一步检验,筛选发酵性能与出发菌株相当,而贮藏期后酸化能力大为减弱的菌株。将筛选出的抗后酸化菌株通过低温刺激,使转座后的载体重组,载体部分从染色体上切除,并经高温培养后丢失。剔除载体后的突变型菌落是食品级突变体,为红霉素敏感型。结果:获得3株抗后酸化保加利亚乳杆菌菌株,其生物学性状稳定,回复突变率低。 李晨 赵云 郭鑫 卢海强 田洪涛 郭兴华 罗云波关键词:保加利亚乳杆菌 枯草杆菌-大肠杆菌多功能穿梭载体的构建 1990年 本文简要地报道了由枯草杆菌运载体pUB_(110)和大肠杆菌运载体pGEM_3构建的一个多功能穿梭载体pBE_2.该载体能在枯草杆菌和大肠杆菌中复制和表达,并具有一个强启动子和一个多酶切位点区可供广泛利用,是一个比较理想的运载体. 熊占 郭兴华关键词:枯草杆菌 大肠杆菌 穿梭载体 利用组成型表达载体pMG36e电转化德式乳杆菌保加利亚亚种的研究 被引量:8 2011年 以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,德式乳杆菌保加利亚亚种为受体,采用电转化方法研究受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,以提高电转化效率。结果表明:选择含2.5%甘氨酸的SMRS培养基培养受体细胞至对数中期,收获制成感受态细胞,在电场强度12kV/cm、电阻200Ω、电容25μF条件下电击转化,以含20mmol/LMgCl2、CaCl2的SMRS培养基复苏培养2h,涂板筛选得到较高的电转化效率。特别是采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率提高30倍以上,达到6.3×104cfu/μgDNA。本研究结果为进一步构建乳酸菌组成型高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株提供试验依据。 郭红敏 谷新晰 张玉兰 田洪涛 郭兴华 罗云波关键词:电转化