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创伤弧菌溶细胞素融合蛋白细胞毒活性相关分子机制研究被引量：2: 2008年; 目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVVC）诱导人ECV304细胞（人脐静脉内皮细胞）凋亡过程中caspase．3，-8，-9活性变化。方法应用MTT法、Hoehest33342／PI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVVC对人ECV304细胞诱导凋亡的影响；比色法测定rVVC诱导人ECV304凋亡过程中caspase-3，-8，-9活性变化。结果MTT结果显示rVVC具有降低人ECV304细胞的存活率活性；浓度为2．0溶血单位（HU）／ml的rVVC作用人ECV30412h后，其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0．5HU／ml的rVVC处理组，具有剂量依赖性；浓度为2．0HU／ml rVVC处理组加40μmol／L Caspase全酶抑制剂（Z—VAD—FMK）后凋亡率较2．0HU／ml rVVC处理组有一定程度降低。浓度为2．0HU／ml rVVC处理人ECV304细胞0．5h后caspase-3活性开始增高，于3h达高峰，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01），caspase-8，-9活性无明显变化。结论rVVC对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性，caspase-3可能与活性rVVC诱导的人ECV304凋亡有关。; 桂静胡蝶郑丽楼永良肖美英严杰朱晔晶肖翔; 关键词：创伤弧菌

创伤弧菌溶细胞素融合蛋白对人Caeo-2细胞IL-8基因表达和IL-8分泌的影响: 2010年; 目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVvhA）对人肠上皮细胞（human intestinal epithelial cell，Caco-2）IL-8基因表达的影响。方法IPTG诱导、表达、纯化、复性及Western blot鉴定rVvhA表达和纯化情况；CCK-8法检测rVvhA对Caco-2的细胞毒性作用；RT—PCR检测rVvhA诱导Caco-2细胞IL-8基因的表达情况；ELISA检测Caco-2细胞培养上清IL-8的分泌情况。结果Ni^2＋-NTA亲和层析柱对rVvhA进行纯化后纯度可达95％以上；CCK-8结果显示rVvhA活性蛋白显著降低了Caco-2细胞的存活率，有效浓度为1．5HU／ml（P〈0．05）；RT—PCR结果显示，0．6HU／ml rVvhA 30 min即可诱导Caco-2细胞IL-8mRNA基因表达上调；ELISA结果显示，Caco-2细胞经rVvhA作用后，培养液上清中IL-8多肽的表达时相在4h。RT—PCR与ELISA结果皆显示，IL-8基因的转录及IL-8表达皆具有时间-剂量依赖性。结论rVvhA在转录水平上能诱导人Caco-2细胞IL-8 mRNA表达，促进IL-8的合成，在创伤弧菌引起的过度炎症反应和败血症的发生、发展中可能具有重要意义。; 谢旦立王波丁卉郑丽楼永良严杰; 关键词：创伤弧菌 IL-8

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郑丽