蔡永得
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
- 供职机构：湘南学院附属医院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 老年血液循环因素对年轻小鼠椎间盘衰老表型的影响被引量：1
- 2021年
- 目的:通过异时联体共生(heterochronic parabiosis)模型评估年老小鼠血液循环因素对年轻小鼠脊柱椎间盘衰老表型的影响。方法:本研究通过手术建立年轻和年老小鼠同时(isochronic parabiosis,IP)、异时联体共生模型。随机选择3个月龄的年轻及18个月龄年老雌性小鼠。联体8周后分成同时联体年轻小鼠组(young isochronic,Y-Y),异时联体年轻小鼠组(young heterochronic,Y-O),同时联体年老小鼠组(old isochronic,O-O)。通过组织切片H&E染色观察椎间盘组织学改变,提取椎间盘组织行Western blot和RT-qPCR检测衰老基因P16、P21及金属蛋白酶MMP13、ADAMTS4蛋白和基因表达的差异性。取脊柱椎间盘组织进行组织免疫荧光检测aggrecan基因表达差异。结果:H&E染色结果显示Y-Y组椎间盘纤维环结构完整,纤维环及髓核组织没有裂痕,纤维环及髓核分界清楚,髓核组织含大量髓核细胞,基质完整;而Y-O组可见纤维环结构破损并出现裂痕,纤维环及髓核分界不清,髓核细胞数相比Y-Y组明显减少;O-O组表现为老年椎间盘形态特征。IF检测aggrecan基因表达量Y-Y组明显高于Y-O及O-O组,各组间表达有差异性(P<0.05)。Western Blot检测P16蛋白表达Y-O组比Y-Y组升高77.1±20.5%(P<0.05),RT-qPCR检测P16基因Y-O组有升高的趋势,但组间无统计学差异(P>0.05);Western Blot检测P21蛋白Y-O组比Y-Y组有升高,但无明显统计学差异(P>0.05),但RT-qPCR检测P21基因Y-O组比Y-Y组升高40.5%±6.7%、O-O组比Y-Y组升高95.5%±24.2%(P<0.05);金属蛋白酶MMP13及ADAMTS4蛋白在Y-Y组表达明显低于Y-O及O-O组(P<0.05),RT-qPCR检测MMP13及ADAMTS4基因表达差异性与蛋白表达相符合。结论:老年小鼠血液循环因素可以加速年轻小鼠椎间盘衰老退变。
- 雷昌斌林宏生唐新文郭志文蔡永得唐光王东王炯
- 关键词：椎间盘退变血液循环衰老
- 黄芩素对A431细胞埃兹蛋白表达及侵袭力的影响被引量：3
- 2010年
- 目的探讨黄芩素是否通过抑制埃兹蛋白来实现抑制A431细胞增殖、细胞周期进程及伪足的形成。方法采用细胞划痕、微孔滤膜法（Transwell）检测黄芩素对A431细胞爬行的影响；RT—PCR检测黄芩素对A431细胞埃兹蛋白mRNA表达量的影响；Western印迹检测黄芩素及siRNA对A431细胞埃兹蛋白表达及其磷酸化的影响；扫描电镜观察黄芩素及siRNA对A431细胞伪足形成的影响。结果细胞划痕实验显示，培养24h时，黄芩素5、10、20p,mol／L组细胞闭合宽度占原宽度的比例分别为13．3％±1．7％、7．6％±1．6％和5．9％±1．3％，黄芩素呈浓度依赖性抑制A431细胞爬行运动，黄芩素各组与阴性对照组（16．3％±2．3％）比较，差异均有统计学意义。Transwell实验证实，5、10、20μmol／L黄芩素处理A431细胞48h后，穿过人工基底膜的细胞数量分别为（46．5±3．8）、（34．3±3．4）和（25.3±2．3）个／Hp，各处理组与阴性对照组（56．3±3.8个／Hp）经方差分析，P〈0．01；而与siRNA组（28.3±2．1个/Hp）比较，P〉0．05。Western印迹及RT—PCR检测显示，0、5、10、20、40μmol／L黄芩素处理A431细胞48h后，黄芩素呈浓度依赖性地抑制A431细胞埃兹蛋白膦酸化埃兹蛋白及埃兹蛋白mRNA表达，埃兹蛋白mRNA与β-肌动蛋白mRNA灰度值之比值与阴性对照组比较，P值均〈0．01；而与siRNA组比较，P〉0．05；埃兹蛋白、磷酸化埃兹蛋自在A431细胞中的表达量（与β-肌动蛋白灰度值之比）与阴性对照组比较，P值均〈0．01：而40la,mol／L黄芩素处理组与siRNA处理组比较，P〉0．05。扫描电镜显示，48h后20μmol/L黄芩素组A431细胞伪足数量为（5．3±1．9）个，长度明显缩短，与阴性对照组（22．6±2．8个）比较，P〈0．01；siRNA组为（4．5±2．8）个．与阴性对照组比较，P〉0．05。结论黄芩素可能通过直接或间接抑制埃兹蛋白表达及其
- 伍斌谢红付李吉张江林蔡永得
- 关键词：黄芩甙埃兹蛋白肿瘤侵润
- 异时连体共生对小鼠椎旁肌肉衰老退变的影响被引量：2
- 2019年
- 目的 :通过异时连体共生(heterochronic parabiosis,HP)模型检测年轻小鼠血液循环环境对年老小鼠脊柱椎旁肌肉的影响。方法:选择4月龄的年轻小鼠及18月龄年老雌性小鼠,通过手术建立年轻和年老小鼠同时(isochronic parabiosis,IP)、异时连体共生模型。连体8周后将小鼠分成同时连体年轻小鼠组(youngisochronic,YI),异时连体年轻小鼠组(young heterochronic,YH);同时连体年老小鼠(old isochronic,OI)和异时连体年老小鼠组(old heterochronic,OH)4组,解剖并提取椎旁肌肉。通过流式细胞仪吸光度检测各组椎旁肌肉糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)及各组DNA的含量,提取肌肉组织蛋白行蛋白印痕(Western blot)检测衰老基因P53、P21、P16及自噬基因LC3、金属蛋白酶MMP13基因的表达。取脊柱椎旁肌肉组织进行组织免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测Aggrecan、P16及炎症因子IL8的表达差异性。结果:GAG定量分析显示YI、YH、OH、OI各组分别为2.91±0.17、2.01±0.21、2.23±0.36、1.18±0.09,其中YI与YH、OH与OI组之间有统计学差异(P<0.05);通过IF检测Aggrecan表达呈下降趋势,YI、YH、OH、OI各组分别为717.25±64.44、611.59±28.45、683.04±17.95、570.34±31.81,其中OH与OI组间有统计学差异(P<0.05),YI与YH组间无统计学意义(P>0.05);LI8基因表达YI、YH、OH、OI各组分别为494.20±28.35、561.62±44.72、602.35±45.57、726.36±58.40;P16基因表达YI、YH、OH、OI各组分别为701.30±27.21、695.92±31.06、754.82±25.78、815.54±24.70,有上升趋势但YI与YH、OH与OI组间无明显差异(P>0.05)。Western blot检测自噬基因LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达呈下降趋势YI、YH、OH、OI各组分别为0.39±0.09、0.29±0.05、0.26±0.04、0.16±0.01;衰老基因P21蛋白表达YI、YH、OH、OI各组分别为1.09±0.23、1.32±0.12、1.54±0.03、1.86±0.06;金属蛋白酶MMP13蛋白表达YI、YH、OH、OI组分别为0.59±0.11、0.68±0.13、0.88±0.15、1.11±0.18。在LC3Ⅱ/Ⅰ、P21、MMP13表达中,
- 雷昌斌王东林宏生唐新文黄长兵蔡永得王炯
- 关键词：脊柱退变衰老
